大麦黑穗病空间格局及其抽样技术研究

大麦黑穗病(坚、散黑穗)是我省沿海麦区常见病害之一,常年发病率1%左右,对大麦黑穗病的防治技术已有了诸多研究,但其在田间的分布模式及抽样技术还见刊不多。1990—1991年度我们对大麦坚、散黑穗     

改良环介导等温扩增技术快速检测转基因大豆

采用改良环介导等温扩增(LAMP)技术,建立一套准确、快速、可靠的用于转基因大豆检测及DNA提取的方法.以CP4-EPSPS外源基因为检测的目的片段,设计内、外引物和环引物,并采用改进的方法提取DNA,进行LAMP扩增,实际检测已知转基因大豆和市售大豆,通过肉眼观察白色沉淀,判断检测结果.改进的DNA提取方法与经典的CTAB方法相比,提取时间至少缩短了1 h,降低了提取成本.环介导等温扩增(LAMP)技术对转基因大豆的检出限为0.01%,是普通PCR方法的20倍.因此,改良的LAMP检测转基因大豆方法灵敏度高,耗时短,方法简便.     

抗菌剂402处理麦种防治大麦坚黑穗病试验示范简报

大麦坚黑穗病是我市影响大麦产量种传病害。近年来,由于广大农户放松了石灰水浸种工作,致使坚黑穗病发生危害逐年加重。为了寻求简便易行、经济有效的防治方法,1989、1990年,我们进行了抗菌剂402     

适用于SSR分子标记的玉米单粒种子DNA快速提取新方法

研究了玉米单粒种子DNA的提取新方法,利用该方法提取DNA,液氮、研磨、离心、沉淀、SDS、CTAB及氯仿都不用,一个工作人员提取100粒种子(1个检测样品)DNA只需30min左右,一天可以提取1600粒种子(16个检测样品)的DNA,并且提取的DNA分子量大,不降解,完全可以满足利用SSR分子标记进行DNA指纹分析的需要,为DNA指纹技术在玉米种子纯度及真伪快速鉴定中的广泛应用解决了关键性技术难题。     

柑橘黄龙病可视化LAMP检测技术的建立及应用

建立柑橘黄龙病(HLB)可视化环介导等温扩增(LAMP)检测方法,为HLB的快速检测提供有力的技术支持。根据LAMP技术原理,针对柑橘黄龙病菌16S rDNA靶序列的6个位点设计4条特异性引物,通过对反应体系和反应条件的优化,并在反应前的体系中加入1∶10的钙黄绿素(calcein)和氯化锰(MnCl2)混合液作为荧光显色剂,建立可视化LAMP检测技术,同时对该技术的特异性、灵敏度和样品检测进行了测试。该检测方法具有很高的特异性,反应体系中除了HLB具有特异性的扩增,产生黄绿色荧光扩增产物,其他供试菌株均无特异扩增。对柑橘黄龙病菌总DNA的检测限为1.51×10-3 ng/μL,而对含有目的基因的CG-pMD18-T质粒DNA的检测限为2.12×10-6 ng/μL,与定量PCR灵敏度相当,而比常规PCR灵敏度高1 000倍。利用可视化LAMP技术和定量PCR对来自漳州、南平、福州等地的样品进行检测,结果 2种技术的检出率均为76.7%,符合率达到100%。     

多重引物SSR技术鉴定玉米杂交种子纯度的研究

采用热碱法提取玉米种子DNA,并且运用多重引物(3对SSR引物)PCR对其进行SSR扩增,进行种子纯度鉴定。结果表明:①利用热碱法可以实现玉米种子的DNA快速提取,同时降低了检测成本;②利用三重引物PCR技术降低了检测结果的误差,提高了检测结果的准确性。因此,将这两种技术结合起来,将极大地推动SSR技术在玉米种子纯度鉴定中的推广和应用。     

柑桔黄龙病环介导等温扩增检测方法建立及应用

以柑桔黄龙病（Citrus Huanglongbing,HLB）病原菌16s rDNA保守区域为靶标设计LAMP引物,建立柑桔黄龙病的环介导等温核酸扩增（loop-mediated isothermal amplification assay,LAMP）检测技术。LAMP检测方法具有极高的检测特异性和灵敏性,其检测下限约为1 pg/μL质粒DNA,是PCR检测灵敏度的100倍,能快速、准确地对田间疑似样品进行检测。建立的柑桔黄龙病LAMP检测方法是对黄龙病检测方法的拓展和延伸,可以很好地应用于田间检测,可满足基层以及科研单位对该病害检测的需要。     

叶片DNA对玉米丝黑穗病研究的可靠性

提取发病植株叶片及茎髓组织DNA,用玉米丝黑穗病菌特异引物进行PCR检测,验证叶片DNA对玉米丝黑穗病研究的可靠性。结果发现,提取叶片DNA研究玉米丝黑穗病的可靠性远低于茎髓组织DNA。     

玉米单粒和单叶片DNA快速提取及SSR标记分析

优化建立了玉米单粒种子胚和单叶片基因组DNA快速提取方法.琼脂糖凝胶检测结果表明,提取的DNA主带清晰,无降解现象,质量好,可以满足SSR-PCR分析的需要.结合采用SSR分子标记技术,此DNA提取方法可有效地用于玉米种子纯度检验和分子标记辅助育种。     

玉米丝黑穗病菌DNA提取及UP-PCR反应体系建立

采用CTAB法、SDS法和尿素法,从玉米丝黑穗病菌液体培养物中提取基因组DNA,比较其提取效果。结果表明：改进的CTAB法可有效去除多酚、多糖和色素等杂质对DNA的污染,可获得高质量模板DNA。以此为模板进行UP-PCR(Universally Primed PCR)反应,对UP-PCR扩增反应中的一些重要参数进行了优化,建立适合于玉米丝黑穗菌的UP-PCR反应体系。     

大麦黑粉菌研究进展

大麦黑粉菌呈世界范围分布,是大麦生产中的主要病害之一,可造成严重经济损失,但在中医上又具有药用和食用价值。本文主要介绍大麦黑粉菌的分类及生理特性,大麦黑粉菌与寄主大麦的互作及其侵染机理,大麦黑粉菌的药用和食用价值,大麦黑粉菌转基因技术体系建立和大麦黑粉菌基因组研究的进展。     

Comparison of infection with Fusarium head blight and accumulation of mycotoxins in grain of hulless and covered barley

We have evaluated 145 covered and 29 hulless barley genotypes artificially infected with Fusarium graminearum Schw. in a field experiment. Significant genetic variation for Fusarium head blight severity measured by the area under the disease progress curve and for mycotoxin contamination was found among covered and hulless barley lines. The overall mean area under the disease progress curve of covered and hulless barley did not differ significantly. Twenty-nine hulless-covered pairs with approximately the same disease severity were chosen for analysis of mycotoxins (B-trichothecenes) in the harvested grain. The average content of deoxynivalenol of the 29 covered and 29 hulless barley samples was 15,520 and 12,964 μg kg⁻¹, respectively. The mean deoxynivalenol, 3-acetyl-deoxynivalenol and 15-acetyl-deoxynivalenol content of covered barley was significantly higher than that of hulless barleys (p<0.01), whereas for nivalenol there was no significant difference between the mean values of covered and hulless barley. Hulless barley appears to be less prone to accumulation of mycotoxins in the harvested crop than covered barley most likely because a considerable proportion of the mycotoxin resides in the barley hulls.     

不同类型大麦品种籽粒中酚酸类化合物含量的差异

为了探明不同类型大麦品种籽粒中酚酸类化合物含量的差异,采用超声辅助提取、高效液相色谱测定的方法对15个大麦品种（系）籽粒中的13种酚酸含量进行了比较分析。结果表明,大麦籽粒中的酚酸类化合物主要是羟基苯甲酸衍生物,羟基肉桂酸衍生物含量较少。不同类型大麦品种籽粒中酚酸类化合物的含量存在极显著的差异,黑皮大麦籽粒中总羟基苯甲酸衍生物（THBA）、总羟基肉桂酸衍生物（THCA）和总酚酸（TPA）的含量均高于非黑皮大麦;二棱大麦籽粒中THBA、THCA和TPA的含量均高于多棱大麦;皮大麦籽粒中THCA和TPA的含量高于裸大麦,但THBA的含量与裸大麦无显著差异。另外,与裸大麦相比,皮大麦籽粒中含有更为丰富的酚酸种类。     

玉米黑粉菌菌瘤内内生细菌对黑粉菌的冬孢子萌发的影响

利用高通量测序分析明确玉米黑粉菌菌瘤内菌粉培养液中内生细菌种类，结合16SrDNA分析，分离并鉴定在培养液中占比最高的菌株。以溶菌酶及Amp处理玉米黑粉菌冬孢子为对照，显微镜下观察菌瘤内内生细菌对玉米黑粉菌冬孢子萌发的影响。结果表明，在4份样品的菌粉培养液中，肠杆菌属细菌的占比在90%以上。当肠杆菌大量增殖时对黑粉菌的冬孢子萌发产生影响，可引起黑粉菌的冬孢子发生质壁分离，释放原生质体，部分原生质体再生成菌体；也可以使冬孢子壁直接被降解，原生质体萎缩。研究发现，玉米黑粉菌菌瘤内的内生细菌以肠杆菌为主，该内生细菌对黑粉菌的冬孢子萌发产生影响。     

大麦条纹病侵染研究

针对大麦条纹病初侵染源和再侵染问题，进行了田间试验测定和大量的调查分析，明确了种子带菌是大麦条纹病的主要初侵染源。病指比较，种子带菌占整个初侵染源的90．8％，发病率比较，种子带菌占整个初侵染源的75％。种子消毒处理，能很好的控制大麦条纹病的发生发展。土壤中残存的大麦条纹病病菌，也是大麦条纹病的初侵染源，但在整个初侵染源中所占比例很小。大麦条纹病再侵染程度主要取决于初侵染量和气候条件。     

青稞籽粒淀粉含量的差异

为筛选特色淀粉青稞材料,采用双波长法测定和分析了来自西藏、青海、甘肃、四川、国外的栽培青稞以及野生裸大麦共469个青稞材料的直链和支链淀粉含量。结果表明,这些青稞材料的直链淀粉含量平均为24.65%,变异范围为4.09%（昆仑8号）~39.72%（长芒红四棱）,其中西藏材料最高（26.87%）,甘肃材料最低（21.23%）;支链淀粉含量平均为31.76%,变异范围为15.24%（康青1号）~60.09%（喜玛拉雅2号）,其中野生裸大麦最高（35.51%）,西藏材料最低（30.17%）;总淀粉含量平均为56.00%,变异范围为31.28%（阿青5号）~74.41%（阿里当地青稞）,以野生裸大麦最高（58.11%）,青海材料最低（54.19%）。根据淀粉含量分布特征将不同来源青稞材料间直、支链及总淀粉含量都分成4个级别,这些青稞材料的直链淀粉含量主要分布在第3级,支链和总淀粉含量主要分布在第2级。从中筛选出18份具有特殊淀粉含量的青稞材料,可用于专用青稞的培育。     

产地及品种对西藏青稞营养品质的影响

为了明确产地和品种对西藏青稞营养品质的影响,对采自西藏6个地(市)、26个县的7个普通青稞品种和3个有色青稞品种(257份样品)的5个品质指标和8种矿质元素含量进行了分析。结果表明,(1)产地生态条件是影响青稞品质和矿质元素含量的首要因素,产地对普通青稞的10个被测指标有显著影响;品种对普通青稞的5种被测指标有显著影响;产地和品种的交互作用显著影响5个被测矿质元素含量;产地显著影响有色青稞的黄酮、粗蛋白和磷含量。(2)青稞不同品质指标和矿质元素含量变异程度不同,变异系数最高为52.3%。供试青稞粗淀粉含量为46.64%~53.76%,粗蛋白含量为6.51%~14.21%,粗纤维含量为1.66%~3.4%,β-葡聚糖含量为3.63%~5.13%,黄酮含量为0.18%~0.40%;钾含量为4 224.8~7 646.5mg·kg~(-1),磷含量为2 243.1~6 288.7mg·kg~(-1),镁含量为731.6~1 572.0mg·kg~(-1),钙含量为246.4~789.0mg·kg~(-1),铁含量为27.59~173.99mg·kg~(-1),锌含量为17.56~85.22mg·kg~(-1),锰含量为10.42~22.23mg·kg~(-1),铜含量为2.12~11.84mg·kg~(-1)。(3)有色青稞的粗淀粉和黄酮含量显著高于普通青稞,而粗蛋白和粗纤维含量显著低于普通青稞,β-葡聚糖含量二者间无显著差异。     

青藏高原16个青稞品种区域试验甘孜试点结果初报

为选育适应青藏高原地区种植的青稞新品种,2010—2012年在四川甘孜对16个青稞参试品种(系)进行了区域试验。结果表明,在16个参试品种(系)中,康青8号、康青7号、甘青5号、藏青25、藏青690、昆仑13这6个青稞品种比对照品种813增产显著,且综合农艺性状好,可在甘孜州青稞适宜种植区种植。其余品种(系)与对照品种813相比,产量相当或减产,可作为种质资源利用或保存。     

Characterizing the molecular structure features of newly developed hulless barley cultivars with altered carbohydrate traits (Hordeum vulgare L.) by globar-sourced infrared spectroscopy in relation to nutrient utilization and availability

Four newly developed huless barley cultivars with altered carbohydrate traits were developed at the Crop Development Centre (CDC), University of Saskatchewan which varied for amylose (1–40% DM), and β-glucan (5–10% DM) content. The four hulless barley cultivars include zero-amylose waxy, CDC Fibar; 5%-amylose waxy, CDC Rattan; normal-amylose, CDC McGwire and high-amylose, HB08302. CDC Copeland was also included as a hulled barley control. Our previous study revealed the altered carbohydrate traits in barley affected nutrition availability and rumen degradation kinetics. These biological differences may be caused by differences in their molecular structure features. The objectives of this study were to (1) reveal molecular structure features in the four hulless barley cultivars with altered carbohydrate traits, and (2) quantify the molecular structural features in relation to rumen degradation kinetics, intestinal nutrient digestion and predicted protein supply to dairy cattle. Conventional Molecular Infrared-vibration Spectroscopy was applied to detect biochemical characteristics of functional group bands including protein, non-starch carbohydrate (β-glucan and cellulosic compounds) and total carbohydrate. Spectral data were further analyzed using univariate analysis of recording absorption peak parameters (baseline, region, relative height and area) and also multivariate analysis with agglomerative hierarchical cluster analysis and principal components analysis. Although correlation results showed weak correlation (P < 0.05) between identified functional group bands and ruminal degradation kinetics and estimated protein supply from both models, molecular structure differences of hulless barley cultivars can still be detected by the Molecular Infrared-vibration Spectroscopy technique and potential truly protein supply (MP) was significantly affected (P < 0.05) by protein molecular structure characteristics in hulless barley cultivars.     

西藏青稞染色体多样性分析

为了解西藏青稞的染色体多样性，从西藏六个地区共采集124个青稞品种，每个品种取3个单株，基于南京农业大学开发的寡核苷酸探针ONPM#8(Oligonecleotide probe multiplex#8),利用荧光原位杂交(fluoresence in situ hybridization, FISH)技术对所有品种进行染色体鉴定，并建立可以区分全部染色体的青稞参考核型。结果表明，采集到的青稞植株有26种染色体多态类型，其中5种多态类型(1H-1、2H-2、4H-1、5H-1和7H-4)的频率大于50%。染色体多态性信息含量(PIC)分析发现，3H染色体最多(PIC=0.75),5H染色体最少(PIC=0.00)。372个单株存在明显的核型变异，涉及染色体多态性、杂合性和异质性，其中261个单株为纯合类型，其余111个单株为杂合类型，平均每株包含1.15对杂合染色体，说明新采集的青稞涉及染色体多样性，可通过后续个体选择和后代鉴定选育出纯系品种。