几种麻类作物及其近缘种植物总DNA的提取与鉴定

采用Ｐｉｃｈ和Ｓｃｈｕｂｅｒｔ１９９３年发展的ＳＤＳ方法，经适当改进后，成功地从苎麻，红麻，黄麻，青麻四种麻类作物及其近缘种植物中提取了细胞总ＤＮＡ，并对其得率，质量和纯度进行了鉴定。所得的ＤＮＡ可进行限制性内切酶消化，ＰＣＲ扩增和ＲＡＰＤ分子标记。     

青麻总DNA的简易提取和鉴定

青麻成熟组织中酚类、黃酮类等次生代谢物较多,要从中提取出高纯度的DNA比较困难。本研究利用黄酮等次生代谢物未大量合成的青麻幼芽为材料,采用简化CTAB法提取青麻总DNA,可以获得高纯度、高产量的DNA。经实验鉴定,DNA纯度符合分子遗传实验要求。该方法快速、简便,也适于其它麻类作物总DNA提取。     

青麻总DNA的简易提取和鉴定

青麻成熟组织中酚类、黄酮类等次生代谢物较多,要从中提取出高纯度的DNA比较困难.本研究利用黄酮等次生代谢物未大量合成的青麻幼芽为材料,采用简化CTAB法提取青麻总DNA,可以获得高纯度、高产量的DNA.经实验鉴定,DNA纯度符合分子遗传实验要求.该方法快速、简便,也适于其它麻类作物总DNA提取.     

茶树地理近缘种种质生化性状的比较

本文用茶叶生化定量分析方法及茶树及其地理近缘种的生化性状进行了分析比较，似探明茶树与其近缘种植物生化性状的差异，为用茶树近缘种植物资源改良现有茶树品种的生化性状提供了一定的实验数据。指出用我国特有丰富的茶树近缘植物能使茶树的现有生理、生化性状得到明显改善。     

亚麻进化与近缘种研究回顾与展望

本文对亚麻近缘种收集、分类、进化以及分子技术的应用等方面的研究进行了回顾,并指出有必要对中国亚麻属植物进行系统的研究。     

亚麻进化与近缘种研究回顾与展望

本文对亚麻近缘种收集、分类、进化以及分子技术的应用等方面的研究进行了回顾,并指出有必要对中国亚麻属植物进行系统的研究.     

改良CTAB法提取野牡丹科7种植物DNA

以野牡丹科植物幼叶为材料，对影响野牡丹科植物DNA提取质量的主要因子进行研究，以期建立适宜野牡丹科植物DNA提取的优化反应体系。结果表明，当提取液中CTAB浓度为4%，沉淀时加入0.6倍体积预冷异丙醇、1/2倍体积5 mol/L NaCl、2倍体积无水乙醇时，所提取的DNA纯度较高，电泳条带清晰。且在此条件下，能提出野牡丹科7种植物的DNA。     

一种快速高效的DNA提取方法研究

DNA提取技术是分子实验的一个重要步骤,快速、高效的植物DNA提取方法是样品需要量大的分子实验的一个关键技术。本实验通过改进传统的DNA提取方法,使用96孔联体试管板,而不是单个离心试管,对叶片进行冷冻干燥后粉碎,无需使用液氮。在实验过程中,使用排枪操作,CTAB法提取DNA。以小麦为例,依据该方法提取幼苗叶片DNA,并选取6对引物对DNA样品进行PCR扩增,使用ABI PRISM 3730 DNA分析仪对扩增产物进行分析,以检测提取的DNA质量。结果表明,本实验的DNA提取方法所得到的PCR扩增条带均有较高的强度。在6对实验引物的扩增结果中,扩增条带强度最好的引物有98%的样品在6 935～16 786 RFU( Relative Fluorescence Unit)之间;扩增条带强度较低的引物有93% 的样品在532～1 111 RFU之间;在所有的PCR扩增反应中,最低PCR扩增条带强度为205 RFU,缺带样品数量平均只有0.8%。按照本实验的方法操作,每人每天可提取上千个样品的DNA。因此,该DNA提取方法是一种高效、快速、能获得高质量DNA的有效方法。     

一种高质量的红毛丹基因组DNA提取方法

为了提取高质量的红毛丹基因组DNA，本研究以红毛丹叶片为试材，比较改良CTAB法、改良SDS法和试剂盒法对红毛丹叶片DNA的提取效果。结果表明：3种方法均可从红毛丹叶片中提取DNA，但由于改良CTAB法通过多次洗涤，并联合使用PVP和β-巯基乙醇处理，可有效去除红毛丹叶片中的多糖、多酚和蛋白质等物质，所获得的DNA纯度高且完整性较好，可用于SRAP-PCR等分子标记分析。此结果为后续分子生物学等相关研究奠定了基础。     

悬铃叶苎麻基因组DNA的六种提取方法比较

悬铃叶苎麻(Boehmeria tricuspis(Hance)Makino)是一种多年生草本植物,含有较多的多酚、多糖等次生代谢物质,这些次生代谢物质能够与基因组DNA结合从而影响其DNA的提取。本文以悬铃叶苎麻幼嫩叶片为试材,采用6种方法提取基因组DNA,并比较其提取效果,以期寻找到正确的、快速的、能够得到高质量的基因组DNA的方法。琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度仪、SSR-PCR扩增和限制性内切酶酶切等方法检测不同方法提取的全基因组DNA的质量和纯度。结果显示:采用方法 1(Tian Gen试剂盒)提取的溶液中含有杂质,DNA含量较少;方法 2(常规CTAB法)提取的DNA含有较多杂质;方法 3(硅胶-CTAB法)和方法 4(酚抽提-CTAB法)没有提取到DNA;方法 5(高盐预先去杂-CTAB法)得到的基因组DNA溶液含有较多的蛋白质或盐;方法 6(葡萄糖预先去杂-CTAB法)是唯一能获得高质量的基因组DNA,能够满足PCR、限制性内切酶酶切等分子实验对DNA的要求。本研究找到了一种通用、简单易行,成本低且安全的去除植物DNA提取过程中多糖等杂质的方法,为悬铃叶苎麻后续的其他分子生物学的研究奠定了基础。     

花生DNA快速简便提取方法的研究

在花生新鲜针叶和干叶ＤＮＡ提取过程中,应用ｐＨ值较低,无机盐浓度较高的提取缓冲液可沉淀蛋白质,其中加入２％的β－巯基乙醇可有效地防止次生代谢物质使ＤＮＡ变色。提取出的ＤＮＡ样品产率在９２．６～２１６．３１ｎｇ／ｍｇ．ｆｗ,ＤＮＡ质量和纯度较高,２６０ｎｍ／２８０ｎｍ光密度比值在１．８～１．９之间。所得ＤＮＡ可直接用于限制性内切酶酶切,并可用于随机引物ＰＣＲ扩增。该方法为花生分子生物学研究提供基础。     

小麦TILLING突变体检测中基因组DNA提取方法的优化

为了优化小麦高通量TILLING突变体扫描所需基因组DNA提取的方法,对利用SDS法、改良SDS法、CTAB法、改良CTAB法、AxyPrep DNA提取试剂盒、Qiagen DNeasy Plant Mini Kit试剂盒以及再生Qiagen硅胶柱方法提取的小麦基因组DNA进行了系统比较。结果表明,尽管7种方法所提取DNA的纯度及琼脂糖凝胶电泳检测结果均良好,但再生Qiagen硅胶柱方法、CTAB法和改良SDS法的DNA浓度显著高于其他方法。根据小麦细胞分裂素氧化酶基因1(TaCKX1)的DNA序列设计引物,以新鲜DNA样品用于PCR扩增大于1 000bp的片段时,后4种方法扩增效果优于前3种方法;DNA在-20℃下保存100d后重新进行PCR扩增时,则只有Qiagen试剂盒和再生Qiagen硅胶柱2种方法提取的DNA能扩增出大于1 000bp的片段。采用本实验室与新西兰坎特伯雷大学合作建立的再生硅胶柱与自配提取液提取小麦基因组DNA,既保证了DNA的高质量,又降低了使用试剂盒的成本,为小麦TILLING库的构建及其他相关试验提供了一种经济有效的DNA提取方法。     

Nutrient content of the edible leaves of seven wild plants from Niger

Wild plants play an important role in the diet of the inhabitants of Niger. These plants tend to be drought-resistant and are gathered both in times of plenty as well as times of need. Used in everyday cooking, famine foods may be an important source of nutrients. The goal of this study was to investigate the nutritional role of wild plants in the nigérien diet. To this end, leaves of seven plants species were analyzed for their mineral, amino acid and fatty acid contents: Ximenia americana, Amaranthus viridus, Corchorus tridens, Hibiscus sabdarifa, Maerua crassifolia, Moringa oleifera, and Leptadenia hastata. Ximenia americana} contained large amounts of calcium. Large quantities of iron were present in Amaranthus viridus. All seven plants contained significant amounts of selenium and phosphorus. Corchorus tridens contained the most protein (19–25% dry weight), and its composition compared favorably to the World Health Organization's standard for essential amino acids. Moringa oleifera contained 17% protein and compared favorably with the WHO standard. Corchorus tridens contained the largest amounts of the two essential fatty acids linoleic and -linolenic acids. These results reinforce the growing awareness that wild edible plants of the Western Sahel can contribute useful amounts of essential nutrients, including amino acids, fatty acids and trace minerals, to human diets.     

豆科植物异黄酮提取技术研究进展

豆和豆制品,红三叶草,葛藤中都含有异黄酮,包括染料木苷(Genistin),黄豆苷(Daidzin),黄豆黄苷(Glycitin)以及它们的衍生物如丙二酰(malonyl),乙酰(acetyl),苷元(aglucone )等.由于不同的组分在原料中的含量差别很大,寻找最优的异黄酮提取法是很困难的.传统的提取法利用甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、n-丁醇、二甲基亚砜、Genapol等有机溶剂提取异黄酮.有机溶剂的大量使用对环境和人体都造成较大损害.近几年来,研究人员已发现几种高效的、环境友好型的提取法:超临界流体萃取法(SFE),超声波辅助萃取法(UAE),高压液体萃取法(PLE),固相萃取法(SPE),微波辅助萃取法(MAE)等.文章综述了从豆科植物中提取异黄酮的溶剂提取法和新近发展的提取技术.     

Separation of DNA for molecular markers analysis from leaves of the Vitis vinifera

In the present study, three DNA extraction procedures were examined to determine which might yield DNA from Grape leaves suitable for molecular analysis for RAPD, SSR. AFLP and etc analysis. The three methods examined were: the miniprep procedure and the modified CTAB for difficult species and protocol CTAB. Only the modified CTAB method consistently yielded DNA suitable for Polymerase Chain Reaction (PCR) amplification, regardless of plant growing conditions or leaf age. The quality and quantity of extracted genomic DNA gained from these methods are deliberated by means UV biophotometer, electrophoresis in 1.2% agarose gel and PCR. In this regard, application chosen for young and mature leaves, the most value of qualified DNA, is extracted from fully expanded leave when PVP was added to the extraction buffer. This same procedure also yielded PCR-amplifiable DNA from various other perennial, woody species and from other fruit species such as apple (Malus domestica), cherry (Prunus avium), peach (Prunuspersica), plum (Prunus domestica). DNA yield from this procedure is high (up to 1 mg g(-1) of leaf tissue). DNA is completely digestible with restriction endonucleases and amplifiable in the Polymerase Chain Reaction (PCR).     

玉米DNA的小量快速提取

以玉米的幼叶为实验材料,用小量快速法提取玉米总DNA.提取的DNA经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,结果发现DNA质量较好,所得的DNA可用于RAPD和DNA酶切等技术.此法具有提取速度快、DNA质量好和经济实用等优点,为玉米及其他植物DNA的提取提供了一个快速、简便的途径。     

基因组DNA快速提取及在转基因大豆检测中的应用

基因组DNA的提取是DNA分子水平研究和检测的重要环节。为补充完善现场检测方法,根据硅膜吸附 DNA的特性,结合过滤膜和注射器,开发一种现场快速提取植物基因组DNA的方法。选取大豆、棉花、油菜、玉米、 水稻5种主要作物的叶片和种子为样品提取DNA,利用PCR和普通重组酶聚合酶扩增（recombinase polymerase am⁃ plification, RPA）对快速提取和QIAGNE试剂盒提取的DNA进行内源基因的扩增。结果显示,快速方法不需要离心 机,现场3分钟完成DNA提取;在DNA得率上要高于QIAGEN方法,但在DNA纯度上低于QIAGEN方法。不过两种 方法提取的DNA都能满足PCR和RPA的需要。利用DNA快速提取方法结合普通PCR、荧光RPA和荧光定量PCR 对转基因大豆SHZD32-1进行实际检测,3种方法的检测结果一致,均能准确检出大豆SHZD32-1的转基因成分。     

一种高效便捷的水稻DNA提取法及其应用

 以水稻叶片、根和种子为材料,采用高通量快速法提取基因组DNA,用稻瘟病Pita基因分子标记进行检测,获得与预期片段大小一致的特异性条带,对165份育种材料的检测结果与稻瘟病接种鉴定一致。操作方法如下：将少量水稻叶片、根或种子放入 200 μL PCR盘中,加入70 μL 缓冲液A (含NaOH和Tween20),在PCR仪中加热到95℃,保持 10 min,再加入70 μL 缓冲液B (Tris HCl和EDTA),该提取液可以直接用于PCR扩增。该方法具有几个优点：1）成本低,仅用4种化学试剂,共140 μL 提取液;2）操作简便,仅需3步,每人每天可以提取上千份样品;3）仪器设备简单,只用常规的PCR仪;4）可直接提取干种子的DNA;5）DNA质量好,能检测出水稻中的抗稻瘟病单基因Pita,并且与稻瘟病接种鉴定结果一致;6）用量少,只需要 5~20 mg 叶片、20 mg 根或半粒籽粒。尤其是检测大量样本的基因型时, 此种方法更显得高效便捷。