番茄细菌性斑点病菌、溃疡病菌、青枯病菌和疮痂病菌的四重PCR检测方法

针对引起番茄细菌性病害的细菌性斑点病菌（Pseudomonas syringae pv. tomato,Pst）、溃疡病菌（Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis,Cmm）、青枯病菌（Ralstonia solanacearum,Rs）以及疮痂病菌（Xanthomonas campestris pv. vesicatoria,Xcv）,建立了四重PCR检测技术,为病害的快速、准确诊断提供技术支持。根据gap1基因设计Pst特异性引物BW-F/BW-R,经PCR条件优化,扩增出了375 bp的特异性片段。将设计的引物与已报道的3种细菌特异性引物组合,通过设定不同的退火温度、引物浓度、循环次数以及延伸时间,探索影响四重PCR扩增的因素,优化了其反应体系。四重PCR反应体系中的引物对BW-F/BW-R、Fan1/Fan2、RS-1-F/RS-3-R和XCVF/XCVR可分别扩增出细菌性斑点病菌、溃疡病菌、青枯病菌和疮痂病菌长度为375、146、716和517 bp的特异性目的片段,反应体系退火温度为57.1 ℃,4对引物的终浓度分别为0.24、0.16、0.16和0.08 μmol ? L-1,延伸时间45 s,35个循环。该四重PCR反应体系可快速检测田间番茄发病植株中的细菌性斑点病菌、溃疡病菌、青枯病菌和疮痂病菌,灵敏度达到10-1 ng ? μL-1。     

番茄细菌性斑点病菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

以番茄细菌性斑点病病原菌丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonas syringae pv. tomato,Pst)的致病相关基因HrpZ为靶序列,设计了特异性引物Pst3F/Pst3R,能从Pst基因组DNA中特异性扩增出大小为161 bp的目的片段。建立的Pst实时荧光定量PCR检测技术体系的检测灵敏度比普通PCR高1 000倍。利用实时荧光定量PCR检测体系,检测模拟带菌种子中Pst的带菌量,检测下限为4.21 cfu·g~(-1);检测人工接种叶片组织中Pst的带菌量,检测到1级发病叶片带菌量为4.15×102 cfu·g~(-1)。对田间采集的63个番茄细菌性斑点病明显症状和疑似症状样本,分别进行了实时荧光定量PCR、普通PCR和病原菌分离检测,检测到54个样本中含有Pst,3种方法检测结果一致。结果表明,建立的Pst实时荧光定量PCR检测体系具有特异性强、灵敏度高的特点,可以快速准确地定量检测番茄种子和发病组织中Pst的含量,为番茄细菌性斑点病的早期预防和流行监测提供了有效的技术手段。     

番茄褪绿病毒与番茄黄化曲叶病毒复合侵染的分子鉴定

2013 年秋季，在山东寿光设施番茄植株上采集到叶片脉间褪绿黄化、叶片边缘卷曲、叶片皱缩，后期叶片变厚、变
脆，并伴随着植株矮化的疑似番茄褪绿病毒和番茄黄化曲叶病毒复合侵染的样本。分别利用番茄褪绿病毒（Tomato chlorosis
virus， ToCV）外壳蛋白基因（CP）序列引物CP-F/CP-R 和番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl virus， TYLCV）特异
引物TY1-R/TY1-F、TY2-R/TY2-F、TY3-R/TY3-F 对其进行检测、扩增，分别得到774 bp（GenBank 登录号KC709510）
和2 781 bp（GenBank 登录号KJ546418）的核苷酸序列。经序列测序后表明，KC709510 与GenBank 已登录的番茄褪绿病毒
ToCV-BJ （KC311375）分离物相似性为99.6%，KJ546418 与GenBank 已登录的番茄黄化曲叶病毒TYLCV-SDWF-L7（KC999850）
分离物相似性为99.6%。     

甘蓝一代杂种S 单元型的分布

利用SRK 基因激酶区的3 对特异性引物,对23 份甘蓝一代杂种进行PCR 扩增,经过克隆测
序、Blast 分析初步鉴定甘蓝一代杂种的S 单元型。结果表明：供试23 份材料中共出现了11 个S 单元型,
分别是S7、S16、S28、S35、S45、S57、S68 和未知的Sn 等8 个Ⅰ类S 单元型及S2、S5、S15 等3 个Ⅱ
类S 单元型。其中,Ⅱ类S 单元型的S5 出现频率最高,达到19.6%;其次为Ⅰ类S 单元型的S28,达到
17.4%。相比甘蓝类作物中存在的50 多个S 单元型而言,本试验材料涉及的S 单元型并不多,预示在遗传
育种中利用更多的S 单元型是十分必要的。     

西瓜炭疽病菌产毒条件优化及其生物活性测定

针对西瓜炭疽病菌进行了产毒条件优化、粗毒素的生物活性及其理化性质测定的研究。结果表明：不同的培养条件
对病原菌粗毒素活性的影响不同,pH 值为6 的Richard 培养液产生的粗毒素的生物活性最强,培养温度25 ℃、黑暗条件下
持续振荡培养20 d 为最佳产毒条件。粗毒素接种西瓜茎蔓可产生与病菌作用相同的发病症状,对种子胚根生长及种子萌发
有抑制作用,对幼苗有致萎作用,说明该粗毒素是西瓜炭疽病菌侵染过程中的主要致病因子。以病菌粗毒素接种10 种供试
植物,其中甜瓜、西葫芦及草莓发病症状明显,而番茄、茄子及辣椒均未见发病症状。     

接头连接介导的PCR 扩增马铃薯抗晚疫病基因侧翼序列研究

利用接头连接介导的PCR 技术，以前期NBS profiling 试验获得的1 条马铃薯抗晚疫病基因
片段为基础，设计巢式基因特异性引物，扩增获得两侧序列。结果表明：基因组DNA 经DraⅠ酶切后，
在已有536 bp 片段的左侧和右侧均得到序列延伸，右侧扩增得到2 301 bp，左侧扩增得到820 bp，去除
边界序列后，向左延伸789 bp，向右延伸2 273 bp，拼接后共长3 443 bp。采用GENSCAN 进行基因预测，
发现包含内含子在内的晚疫病抗性基因全长2 413 bp，在该预测基因 的UTR 区域设计特异性引物，在马
铃薯抗病和感病的基因型中扩增包含完整基因在内的2 571 bp 序列，发现该特异候选基因与晚疫病抗性相
连锁。     

番茄枯萎病菌分离鉴定及嫁接砧木抗病性评价

从河北省番茄栽培面积较大的定兴和肥乡地区枯萎病病株中分离纯化菌株,通过形态学和分子生物学等方法对病原菌进行鉴定,并采用浸根法鉴定了10个番茄砧木的枯萎病抗性。结果表明,从定兴和肥乡分离到的菌株均为尖孢镰孢菌,采用尖孢镰孢菌生理小种特异性引物进行PCR扩增,证明2个菌株都为尖孢镰孢菌番茄专化型(Fusarium oxysporum f.sp.lycopersici)生理小种3;筛选得到了3个枯萎病高抗砧木品种,7个抗病砧木品种。     

柑桔黑斑病菌的快速识别鉴定

为探索一种快速、可靠、准确及操作简便的柑桔黑斑病菌检测方法,采用引物JRGGc、CITRIC1-ITS4、GCP和GCF3-GCR7分别对从柠檬果实黑斑上分离纯化到的黑斑病菌进行扩增。结果表明,引物GCP的扩增特异性最好,用其与MightyAmpDNA聚合酶构建的检测体系,只需0.2g病斑组织在5h之内即可进行柑桔黑斑病菌的快速鉴定。     

番茄黄化曲叶病毒的实时荧光定量PCR 检测

番茄黄化曲叶病毒病（Tomato yellow leaf curl virus disease,TY LCVD）是目前为害番茄生
产的重要病害,准确检测TYLCV 含量是深入研究该病毒致病机理以及抗病育种的基础。根据TYLCV 的
DNA 保守序列设计引物,基于SYBR Green I 检测模式,构建了TYLCV 实时荧光定量PCR 检测体系,并
且对接种病毒30 d 后的感病番茄植株中的TYLCV 进行检测。结果显示,1ng·μL^-1 感病番茄总DNA 中
约含有3.47×10⁶ 个病毒拷贝。利用实时荧光定量PCR 法比普通PCR 法的灵敏度提高100 倍。     

番茄细菌性溃疡病菌的定性PCR检测方法

以2个番茄溃疡病菌株和其它6种植物病原菌为试验材料,以micA、cytC、TomA等3个特异性基因为检测靶标,采用检测引物设计与优化、特异性测试、灵敏度测试等方法,研究建立番茄溃疡病菌的定性PCR检测方法。结果表明:依据这3个基因建立的PCR检测方法可特异、精准检测番茄溃疡病菌,其中,以TomA基因为检测靶标的方法灵敏度可达到5copy/μL或103 cfu/mL,优于另外2种方法,为番茄溃疡病菌的早期诊断提供了快速、准确的技术手段。     

土壤含盐量对有机基质栽培番茄生长、光合 特性及产量的影响

以正常土壤中的有机基质栽培为对照（CK）,在含盐量分别为5‰（T1）、10‰（T2）、15‰
（T3）的土壤中,利用半隔离式有机基质栽培技术栽培番茄,研究了有机基质栽培条件下盐渍土中盐分的
迁移规律及对番茄的生理生化特性和产量的影响。结果显示：T1、T2 和T3 处理的基质下部土壤中的Na⁺
含量大幅降低,番茄叶片中Na⁺含量、株高、茎粗、干物质积累量、叶片净光合速率和产量等指标与对照
相比无显著差异。表明在含盐量低于15‰的土壤中,盐分未对半隔离式有机基质栽培的番茄产生明显影响。     

杨凌番茄黄化曲叶病毒外壳蛋白基因的克隆与其核心序列分析

以陕西杨凌番茄生产基地感病（TYLCV 症状）番茄植株为材料,分离得到杨凌番茄黄化曲叶
病毒分离物,命名为TYLCV-Yl（GenBank 序列号：KC293824,未公布）;克隆该病毒外壳蛋白全基因序
列CP 及其核心序列tCP;分析核心序列tCP 的特征、 进化特征;运用DNAMAN 多重比较了该病毒外壳蛋
白序列与其他18 个TYLCV-CP 核苷酸序列并且构建了基于CP 基因核苷酸序列的进化树。结果表明：获
得杨凌番茄黄化曲叶病毒（TYLCV-Yl）分离物,确定杨凌番茄黄化曲叶病毒源;获得TYLCV-Yl CP 全
基因序列核心序列tCP,为基于CP 抗TYLCV 奠定基础;tCP 核心序列非常保守,长度为 419 bp,编码
137 个氨基酸,其中在79～97 个氨基酸之间具有1 个跨膜结构;基于CP 基因构建的进化树可将番茄黄
化曲叶病毒分为3 个亚组：TYLCV 亚组Ⅰ,TYLCV 亚组Ⅱ,TYLCV 亚组Ⅲ,其中杨凌番茄黄化曲叶病毒
（TYLCV-Yl）属于TYLCV 亚组Ⅰ。     

秘鲁番茄与栽培番茄回交一代的获得及其染 色体片段分析

以栽培番茄1052 为母本,以秘鲁番茄LA3858 为父本进行杂交,通过幼胚挽救培养获得了1
株F1 植株,再以栽培番茄1052 为母本进行回交,通过幼胚挽救获得了6 株BC1 单株,利用129 个分布于
12 条染色体上的CAPS、SSR 和InDel 标记对BC1 单株进行染色体片段分析,结果表明6 株BC1 单株中12
条染色体含有的秘鲁番茄片段涵盖了秘鲁番茄LA3858 的整个基因组。     

稻草复合基质对番茄育苗效果的影响

以番茄品种中杂106 为试验材料,以传统的草炭、蛭石混合基质作为对照, 研究不同配比的
稻草、稻壳和沙子作为番茄育苗基质的理化性质及其对番茄育苗效果的影响。结果表明：稻草复合基质符
合育苗基质的要求,且育出的番茄幼苗质量优于传统的草炭蛭石混合基质。其中T1（100% 稻草）、T2（稻
草∶稻壳=75V∶25V）的复合基质培育的番茄幼苗最好,生理指标显著优于其他处理和对照。     

黄瓜种质资源果实毒死蜱残留性评价

以38 份不同生态类型的黄瓜品种（系）为试验材料进行研究,在黄瓜盛果期进行毒死蜱农
药喷施处理,利用气相色谱对黄瓜果实进行检测,以期对黄瓜主要种质资源毒死蜱的残留性进行评价。结
果表明,不同供试材料果实中的毒死蜱残留量有较大差异,毒死蜱残留量平均值为0.795 mg·kg^-1,变幅
为0.072～1.835 mg·kg^-1,变异系数为0.549。不同生态类型和来源地的黄瓜种质果实中毒死蜱的残留量
有明显差异。筛选出果实中毒死蜱残留量符合国家标准0.1 mg·kg ^-1（GB2763-2005）的有1 份材料。     

樱桃番茄新品种哈娇的选育

哈娇是以5-121212 为母本、以8-322311 为父本配制而成的樱桃番茄 一代杂种。该品种属
有限生长高封顶 类型,植株颜色深绿,单总状花序,普通叶形,花黄色,粉红果,果实长圆带尖,单果
质量15～20 g,生育期为110 d（天）左右,果味酸甜,口感好。中抗病毒病、叶霉病。每667 m² 产量
3 500 kg 左右。适合保护地栽培。     

植物果实发育调控的分子机理研究进展

果实的发育与成熟是一个复杂的过程,果实大小、形状、颜色、品质、风味等都随着果实发
育和成熟而变化,并受一系列果实发育相关基因的影响和调控。研究植物果实发育调控的分子机理对于今
后提高果实品质具有重要的意义。因此,本文主要综述了拟南芥和番茄中果实发育与成熟相关基因的发掘
与相互作用,以及果实发育调控的分子机理研究进展,为今后的果实发育研究和育种工作的开展提供一定
的理论指导。     

近十年内蒙古产地蔬 菜农药残留状况及规律 性分析

对近十年内蒙古主产的6 800 份蔬菜样品的农药残留超标状况进行数理统计分析。结果表明：
内蒙古产地蔬菜主要以绿叶菜类、茄果类和瓜类为主,其产量占蔬菜产量的70%;随着2003 年以来蔬菜
检测数量的逐年增加,内蒙古产地蔬菜质量安全状态从快速下降期、规律波动期进入到了持续稳定阶段,
各种类蔬菜的质量安全水平差异化明显。其中占主产蔬菜55% 的茄果类蔬菜、瓜类和豆类蔬菜农药残留
超标率多年变幅低于2%,平均超标率为1.1%、1.6% 和3.1%,属于质量稳定型蔬菜;占主产蔬菜30% 的
绿叶菜类和白菜类蔬菜农药残留超标率虽呈年度降低趋势,但多年徘徊在7%～10%,属风险主体型蔬菜;
根菜类和甘蓝类蔬菜（占主产蔬菜15%）农药残留超标时间不可预见,超标率在某些年份大于5%,变幅
超过15 个百分点,这部分蔬菜为随机风险型蔬菜。超标的农药相对集中并表现出超标概率风险的种类间
差异。70% 的农药间歇性超标,超标概率低于5%;20% 的传统农药经常超标,超标概率大于30%。有机
磷类和氨基甲酸酯类农药残留超标风险整体呈年度降低趋势,而一些新型含氮类农药、高效拟除虫菊酯类
农药残留超标风险逐年增加。     

番茄温敏型核雄性不育系T-4 花药蛋白质

以温敏型核雄性不育系T-4 及对照First 为材料,采用考马斯亮蓝G-250 染色通过分光光度
法测定花药蛋白质含量,通过聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分析POD 和EST 同工酶的酶谱差异。试验结果
表明,可育温度条件下的T-4 花药蛋白质含量显著高于不育温度处理,但与对照First 差异不显著。POD
及EST 同工酶酶谱显示,在不育温度条件下T-4 的POD 及EST 同工酶谱带均多于可育温度处理及对照
First;可育温度条件下T-4 的POD 及EST 同工酶谱带与对照First 差别不明显。