滑菇多糖的分离纯化及其理化性质

本文旨在初步探索分离纯化滑菇多糖（Pholoita nameko polysaccharide,PNP）的简易方法，并对其部分理化性质进行研究，为进一步深入研究春生物学特性奠定基础。     

云芝漆酶的分离纯化和理化性质及抗增殖活性

采用DEAE-cellulose, CM-cellulose和 Q-Sepharose离子交换层析和Superdex 75 凝胶过滤层析,从云芝(Coriolus versicolor)发酵液中纯化得到了一种漆酶, SDS-PAGE 电泳检测其为单一蛋白,分子量为67 kDa,N-端部分氨基酸序列为GIGPVADLTITNAAV.该酶可以催化氧化多种底物,其中对ABTS[ 2,2,-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonate)]的催化作用最强.最适反应条件为40 ℃, pH 5.0,其活性可以被Cu2+ 激活,被Fe3+、Hg2+、Fe2+抑制.该酶对HIV-1逆转录酶、乳腺癌MCF7细胞和肝癌HepG2细胞均具有抑制作用,其IC50 分别为 1.5 μmol/L、 2.3 μmol/L 和 4.4 μmol/L.     

香菇漆酶的纯化及部分性质研究

对香菇漆酶进行了丙酮分级沉降、半透膜透析、DEAE一纤维素及Sephadex G100柱层析纯化,并研究了漆酶的产酶曲线及酶作用最适条件.,结果表明:在该培养条件下,香菇第10天达产酶高峰,峰值酶活为216 U/mL,酶作用的最适pH值为3.6,在pH值3.6～4.6有较强的稳定性.最适酶解温度为30℃,Ba2 、Cu2 对香菇漆酶有激活作用,而Ag 、Fe3 则能明显抑制漆酶活性,其它离子影响相对较小.以邻联甲苯胺为底物的表观Km值为1.68 mmol/L.     

核桃林地间种模式对土壤理化性质的影响

以8年生漾濞大泡核桃幼林地为研究对象,以芋头、辣椒、玉米、茶叶4种作物为间种作物,采用实地采样和试验测定分析相结合的方法,对核桃林地不同间种模式下的土壤理化性质进行了比较分析,以期为探讨适合核桃林地的最佳间种模式及核桃高效栽培技术的集成提供理论依据。结果表明:间种能改善核桃林地土壤理化性质,且间种芋头的效果最好,为核桃林地最佳间种模式;其次是间种辣椒,为核桃林地比较适宜的间种模式;而间种玉米及茶叶,不利于改善核桃林地土壤理化性质。     

姬松茸子实体多糖分离纯化研究

采用分级醇沉和凝胶过滤法(Sepharose 6 FastFlow,Sephacryl S-300凝胶柱)从姬松茸子实体热水浸提多糖中分离出三个均一多糖组分,分别命名为ABM-Ⅰ、ABM-Ⅱ和ABM-Ⅲ,理化性质研究表明,三个组分的分子量分别为>2.0×106、1.4×106和3.8×105,旋光度分别为+62.5、+44.3和+5.5。通过完全酸水解和光谱法初步研究了组分ABM-Ⅰ的结构,结果表明ABM-Ⅰ的主链为α-(1→6)-D-吡喃型葡聚糖。     

香菇中γ-谷氨酰转肽酶的分离纯化及其酶学性质研究

通过(NH4)2SO4沉淀、Phenyl Sepharose FF疏水层析分离纯化香菇中的γ-谷氨酰转肽酶(γ-Glutamyltranspeptidase,GGT),纯化后的GGT的比活力到达了19.59 U/mg.SDS-PAGE分析表明,GGT由分子量分别为28 kDa和60 kDa的两个亚基组成.酶学性质试验结果表明,GGT反应的最适温度为37 ℃,最适pH 值为7.6;金属离子Na+、K+和Ca2+对酶有激活作用,而Ag+、Cu2+、Zn2+和Fe3+则有抑制作用;试验范围内,GGT水解γ-glutamyl-p-nitroanilide的米氏动力学参数Km 值为2.601 μmol/mL,Vmax值为0.0287 μmol/min;组成的氨基酸中,Glu和Asp含量较高,Met和Cys含量较低.     

百合鳞茎苯丙氨酸解氨酶的分离纯化及酶学性质研究

经40 %～75 %硫酸铵分级沉淀和DEAE-Sepharose离子交换层析,从兰州百合（Lilium davidii var. unicolor）鳞茎中分离纯化苯丙氨酸解氨酶（PAL）,纯化倍数为13.19,酶回收率4.68%。纯化的PAL经 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测为单一蛋白带,其亚基分子量约58.7 kD。酶学性质研究表明：百合鳞茎的PAL不耐碱,更不耐酸;随着水浴时间延长和水浴温度提高,PAL活性逐渐降低,但40 ℃水浴30 min后酶活性仍保留47%;以L-苯丙氨酸为底物,40 ℃下的Km值为4.1×10^-3 mol·L^-1;金属离子Mn²⁺、Fe²⁺、Cu²⁺、Fe³⁺促进PAL活性,1.0、1.0、2.0和1.0 mmol·L^-1分别为在供试范围内的最佳处理浓度,Ag⁺、Co²⁺、Ca²⁺抑制其活性,其中Ag+的抑制作用最强。     

污白干酪菌核糖核酸酶的分离纯化和理化性质

采用DEAE-cellulose阴离子交换层析、CM-cellulose阳离子交换层析和FPLC-Superdex-75凝胶过滤层析,从污白干酪菌(Tyromyces amygdalinus)干子实体纯化得到一种核糖核酸酶,SDS-PAGE电泳检测其为单一蛋白,分子量为25 k Da。最适反应条件为60℃,p H4.4。该酶对几种寡聚核糖核苷酸的水解活性低于对t-RNA的水解活性。     

百合鳞茎淀粉磷酸化酶分离纯化及酶学性质研究

 从兰州百合（Lilium davidii var. unicolor）鳞茎中分离纯化淀粉磷酸化酶（Starch Phosphorylase,SP）并研究其酶学性质。结果表明：选用30% ~ 60%硫酸铵分级沉淀,SP 纯化倍数为14.78,回收率为23%,纯化的SP 亚基分子量约62.5 kD;SP 的最适反应体系缓冲液为pH 5.0 的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,最适反应温度为30 ℃,且体系中不适合加入酚类抑制剂聚乙烯吡咯烷酮（PVP）;SP 不耐强酸,在中性和弱碱性条件下活性稳定,pH < 5 时活性较弱;在合成方向上,SP 对葡萄糖–1–磷酸（G-1-P）的Km值为2.84 mmol · L-1;1 mmol · L-1 Mg2+、Ca2+对SP 活性有极显著的促进作用,K+、Zn2+也有一定的促进作用;大部分离子在高浓度（> 10 mmol · L-1）下抑制SP 活性,但Na+随着浓度的升高,对SP 活性的促进作用增强;10 mmol · L-1 的抗坏血酸可将SP 活性提高30%。     

三色雷蘑核糖核酸酶的分离纯化和理化性质

依次采用离子交换层析(DEAE-Cellulose、CM-Cellulose和SP-Sepharose)和凝胶过滤层析(Superdex 75 HR10/300 GL)从三色雷蘑(Leucopaxillus tricolor)子实体中分离纯化得到一种核糖核酸酶(Ribonuclease,RNase)。该酶比活为1406 U/mg,纯化倍数为154,通过HPLC-LTQ-Orbitrap测序得到4条肽段序列,分别为DMAVSYLSR、IGLSSIPR、ILGRFVVDTYK和SGKANAATPK。该核糖核酸酶的相对分子质量为15000,最适反应pH为 9.0,最适反应温度为40 ℃,热稳定性高,80 ℃孵育1 h后能保持90%以上的活性:Cu^2+、Ca^2+、Mn^2+、Cd^2+和Al^3+在1.25~10 mmol/L浓度下对该酶活性具有抑制作用,且抑制作用随着金属离子浓度的升高而变强;Fe^2+在1.25~5 mmol/L的浓度下,Pb^2+、Zn^2+、Mg^2+、Hg^2+、Fe^3+在1.25~2.5 mmol/L 的浓度下对该酶的活性有促进作用。