月季‘萨蔓莎’愈伤组织的诱导及植株再生

 以试管苗的小叶为外植体, 探讨了月季品种‘萨蔓莎’愈伤组织诱导及植株再生的方法。结果表明: 高浓度的生长素能诱导小叶产生愈伤组织, 经2,4-D 7.0～10.0 mg/L光下诱导愈伤15 d的小叶外植体, 在含TDZ 1.5 mg/L的MS培养基上光下培养约20 d后有白色假珠芽形成, 此芽暗培养在含NAA、ZT和GA3 的培养基上产生新的假珠芽和新的愈伤组织, 通过持续选择继代生活力高的组织, 约1年后获得可长期继代的愈伤组织, 到目前为止已保存了16个月。此愈伤组织在TDZ 1.0 mg/L、NAA 0.01 mg/L和GA3 0.1 mg/L的诱导下30 d内分化出不定芽, 在含BA 2.0 mg/L和NAA 0.01 mg/L的培养基上不定芽伸长形成正常植株。     

中国李Nubiana胚性愈伤组织诱导及植株再生

以中国李Nubiana试管苗幼嫩叶片为外植体,探讨激素浓度配比、暗培养时间、琼脂浓度等对胚性愈伤组织诱导及TDZ浓度对胚性愈伤组织不定芽再生的影响,建立其愈伤组织诱导及不定芽再生体系。结果表明,外源激素对中国李Nubiana胚性愈伤组织诱导影响显著,TDZ不适合胚性愈伤组织的诱导;暗培养28 d,产生的愈伤组织质地较好,诱导愈伤组织的效果最佳。胚性愈伤组织在WPM+NAA 0.5 mg·L-1+6-BA 2.0 mg·L-1+TDZ 2.0 mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂6.0 g·L-1培养基上光培养可再生出不定芽,其再生率为6.7%。     

中国特有濒危植物八角莲胚状体的发生及其植株再生研究

以我国特有濒危药用植物八角莲(Dysosma versipellis (Hance) M.Cheng)为试材,采用DPS软件正交设计法和SPSS的Duncan's multiple range test,研究了不同植物激素对其愈伤组织形成、胚状体诱导及植株再生的影响,以期为离体培养条件下快速诱导八角莲愈伤组织、胚状体及其植株的再生,以及将来深入研究真菌诱导子诱导八角莲活性成分鬼臼毒素累积的作用机理、信号调控机制和人工种子制作等提供参考依据.结果 表明:八角莲叶和叶柄最适合作为诱导愈伤组织的材料;植物激素对愈伤组织形成的影响效果从大到小依次为2,4-D＞ TDZ＞KT＞NAA＞2-ip,愈伤组织形成的最佳培养基为MS+2,4-D 1 mg·L-1 +NAA 0.05 mg·L-1 +TDZ 0.5 mg·L-1 +2-ip 1 mg·L-1;诱导颗粒状愈伤组织胚状体形成的最佳培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L-1 +NAA 0.1 mg·L-1,诱导率为71.33％;胚状体生根和植株再生培养基为MS+IBA 0.5 mg·L-1 +GA30.5 mg·L-1.     

朱顶红‘Red Lion’胚性愈伤组织诱导及体细胞胚发生

以‘Red Lion’朱顶红(Hippeastrum vittatum)的鳞片为外植体进行体细胞胚诱导和形态学与组织学的胚性鉴定。结果表明,鳞片在MS+2 mg·L~(-1) BA+1 mg·L~(-1) NAA+2 mg·L~(-1) TDZ+30 g·L~(-1)蔗糖培养基上胚性愈伤组织诱导率可达90.63%,而不添加TDZ的培养基上胚性愈伤组织诱导率为0。胚性愈伤组织可呈白色松散、透明膨松、透明致密、微棕色松脆和翠绿色松脆等类型;非胚性愈伤组织呈微棕色致密状。胚性愈伤组织中可明显观察到球形胚、心形胚和棒状胚3个发育时期。体细胞胚在不添加植物生长调节剂的MS培养基上可发育形成芽和根,长成完整小植株。     

铁线莲‘Multi-Blue’不定芽及体细胞胚发生的初步研究

 用‘Multi-Blue’铁线莲的幼叶、茎尖、嫩茎作为外植体进行培养，发现外植体来源以茎尖为最优，基本培养基以低盐的1/2MS为最佳。茎尖在附加0.5 mg·L-1TDZ+0.01 mg? L-1NAA+2%蔗糖的1/2MS固体培养基上培养1个月后芽增殖率达200.8%，且幼苗长势健壮。茎尖在附加0.8 mg· L-1TDZ+0.5 mg· L-1NAA+2%蔗糖的1/2MS固体培养基上培养时可形成淡黄色块状至颗粒状愈伤，经多次继代培养后可逐渐形成胚性愈伤组织，胚状体诱导率可达60%，进而获得再生植株。     

芹菜胚性愈伤的诱导及高频植株再生体系的建立

通过对芹菜离体培养过程中激素配比、基因型、不定芽产生等条件的研究,建立了芹菜高频植株再生体系。研究表明,芹菜苗期的下胚轴最适于诱导愈伤组织,其愈伤组织诱导和继代培养的最佳培养基是MS+2,4-D1.0mg·L-1+KT1.0mg·L-1和MS+2,4-D0.5mg·L-1+BA0.2mg·L-1+CH500mg·L-1+4%甘露醇;基因型对愈伤组织和胚状体的诱导影响很大;60%以上的愈伤组织在继代培养基上可以从非胚性状态向半胚性和胚性状态转化。愈伤组织在1/2MS+1.5%蔗糖+CH500mg·L-1+KT0.25mg·L-1上获得不定芽或小试管苗;在无激素的MS或1/2MS固体培养基上继续培养不定芽或小试管苗,即可生根或长大,获得芹菜的完整再生植株。     

黄瓜体细胞胚途径再生体系的建立及优化

以不同生态型的黄瓜（Cucumis sativus L.）为材料，利用不同基因型建立黄瓜体细胞胚再生体系，并在此基础上对 黄瓜体细胞胚再生体系进行了优化。结果表明：华南型黄瓜9101 和D4 能够诱导出正常的胚状体。以筛选出的9101 为材料， 进一步通过不同组织部位、激素配比、暗培养等对体细胞胚再生体系进行优化，认为子叶节是最佳的外植体，其胚性愈伤 组织诱导的最适培养基为MS + 2.00 mg·L-1 2，4-D，诱导率可达100.00%，出胚的最适培养基为MS+0.10 mg·L-1 2，4-D + 0.5 mg·L-1 KT，其出胚率可达33.33%。此外，在愈伤诱导培养前期给予暗培养条件能提高愈伤诱导率、出胚率及正常再生植株 的获得。对体细胞胚的形态学观察发现，黄瓜体细胞胚发源于子叶节表面的胚性愈伤组织，经历球形胚、心形胚、鱼雷形胚 和子叶胚等时期，最终发育成完整的黄瓜植株。     

无子西瓜郑抗4号的体细胞胚诱导及植株再生(英文)

以无子西瓜(CitrulluslanatusMansfeld)郑抗4号无菌苗子叶为外植体,进行了体细胞胚发生及植株再生的研究,结果表明,无菌苗应先进行3d暗培养,然后采取光照16h/d和黑暗8h/d培养3d;将子叶的叶面朝下放置于培养基上的愈伤组织诱导率高于叶面朝上的培养方式;子叶诱导胚性愈伤组织的最适培养基配方为MS+6-BA2.0mg/L+KT1.0mg/L+GA31.0mg/L;诱导需要在黑暗条件下启动,进行7d暗培养,而生长分化于光照16h/d和黑暗8h/d条件下培养7d;继代3次得到的胚性愈伤组织最多;最适生根培养基配方为1/2MS+IBA0.3mg/L。体细胞胚胎诱导率最高为25%。胚性愈伤组织经进一步培养发育为成熟的体细胞胚胎,生根成为完整植株。     

香榧体细胞胚发生、发育的形态与细胞学观察

将香榧(Torreya grandis‘Merrillii’)的未成熟合子胚置于SH+0.1 mg·L-1 NAA+500 mg·L-1AC+3%蔗糖+0.5 g·L-1 Gln培养基上暗培养45 d,诱导产生半透明颗粒状胚性愈伤组织;将胚性愈伤组织转入SH+20 g·L-1 PEG+10 mg·L-1 ABA培养基中暗培养3个月诱导体细胞胚。采用碘—碘化钾染色和石蜡切片技术对体胚起源、形态发育与细胞组织学进行了观察。结果表明:胚性愈伤组织起源于合子胚胚轴表皮或皮层细胞的对称分裂。胚性愈伤组织含有两类细胞,一种是细胞质浓厚、细胞核大、体积小的圆形胚性细胞,另一种是高度液泡化拉长的细胞。胚性愈伤组织包含由这两种细胞构成的原胚团Ⅰ、原胚团Ⅱ和原胚团Ⅲ,以及一些游离细胞。原胚团Ⅲ在无植物生长调节剂的SH基本培养基上形成原胚,原胚接入成熟培养基,历经球形、棒状、心形、鱼雷形胚后发育成子叶胚。将子叶胚转入萌发培养基后胚根伸长,胚芽发育长出针叶,形成完整的再生植株。同时在离体培养中合子胚胚柄处退化的裂生多胚也能重新发育形成胚体。在初生体胚发育过程中表面常伴有次生体细胞胚的形成。     

红姜花体细胞胚胎发生及植株再生的研究

以红姜花（Hedychium coccineum）的花丝和花药为外植体,通过体细胞胚胎发生途径建立了植株再生体系。结果表明：外植体在MS + 4 mg ? L-1 2,4-D + 4 mg ? L-1 NAA + 1 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1 蔗糖 + 7 g ? L-1 琼脂的培养基上经过120 d诱导出愈伤组织,愈伤组织在MS + 1 mg ? L-1 2,4-D + 0.25 mg ? L-1 NAA + 0.25 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1 蔗糖 + 7 g ? L-1琼脂的培养基上经过继代筛选,获得浅黄色松散易碎的胚性愈伤组织。胚性愈伤组织在MS无机盐 + B5维生素+ 100 mg ? L-1谷氨酰胺 + 230 mg ? L-1 脯氨酸 + 100 mg ? L-1麦芽提取物 + 0.02 mg ? L-1 NAA + 0.02 mg ? L-1 TDZ + 0.5 ~ 1.0 mg ? L-1 2,4-D + 45 g ? L-1蔗糖的培养基中通过3个月的悬浮培养,可得到均质稳定的胚性细胞悬浮系（ECS）。胚性悬浮细胞在SH无机盐 + B5维生素 + 100 mg ? L-1谷氨酰胺 + 230 mg ? L-1脯氨酸 + 100 mg ? L-1麦芽提取物 + 0.25 mg ? L-1 NAA + 0 ~ 0.20 mg ? L-1 TDZ + 45 g ? L-1蔗糖 + 7 g ? L-1琼脂的体胚诱导培养基中培养10 d,可见到白色半透明体胚发生,20 d后体胚发育成熟。当TDZ浓度为0.15 mg ? L-1时,体胚诱导率高达4 500个 ? mL-1 PCV ECS（PCV：细胞密实体积）。在SH无机盐 + B5维生素 + 0.20 mg ? L-1 IAA + 0.25 ~ 1.0 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1蔗糖 + 7 g ? L-1琼脂的体胚萌发培养基上,体胚萌发率高达100%。将萌发的体胚转移到1/2MS + 1 g ? L-1活性炭成苗培养基中,进一步发育成正常的再生植株,植株室外栽培成活率达90%。     

多花蔷薇胚性细胞悬浮系原生质体分离及再生植株

利用多花蔷薇‘无刺3号’假珠芽诱导的胚性愈伤细胞悬浮系分离得到原生质体,并培养获得再生植株。酶种类和浓度, 酶解时间及悬浮细胞继代时间对原生质体分离有重要影响,最佳酶液组成是2.0%纤维素酶,0.5%离析酶,5.0 mmol·L^-1 MES, 0.5 mol·L^-1甘露醇,0.5% CaCl₂·2H₂O。采用继代3 d的悬浮细胞系,酶解10 h,原生质体产量达到26.67×10⁶g^-1,原生质体活力为92.21%。采用液体浅层培养,肌醇比蔗糖更有利于纯化后的原生质体分裂和生长。愈伤组织形成增殖培养基为1/2MS + 2,4-D 1.0 mg·L^-1+ EBR 0.2 mg·L^-1 + 10 g·L^-1 Ficoll + 500 mg·L^-1谷氨酰胺 + 20 mg·L^-1甘氨酸 + 20 mg·L^-1天冬氨酸,分化培养基为1/2MS + 10 mg·L^-1 TDZ + 500 mg·L^-1谷氨酰胺+ 20 mg·L^-1甘氨酸+ 20 mg·L^-1天冬氨酸,后转入1/2MS培养基上获得完整植株。     

花烛体细胞胚胎发生及植株再生研究

 以花烛(Anthurium andraeanum Lind. ) 盆花品种无菌苗叶片、叶柄、根段为外植体, 对花烛体细胞胚胎发生及植株再生进行了研究, 建立了花烛体细胞胚胎发生体系。结果表明, 花烛叶片较其他外植体更适宜体细胞胚的诱导; 胚性愈伤组织及胚性结构诱导最适培养基为改良MS + 2, 4-D 2.0～3.0 mg·L ^{- 1} + KT 0.5 mg·L ^{- 1} +蔗糖2% +葡萄糖1% , pH 5.5, 暗培养40 d, 诱导率可达90.3%; 体胚发育适宜培养基为改良MS + 6-BA 0.5 mg·L ^{- 1} +蔗糖3% , 光强20 μmol·m ^-2 · s^-1 , 培养20 d后体胚萌发率达6219%; 萌发的体胚在发育培养基上继续培养30 d后均能发育成完整植株。对不同阶段培养材料的组织结构及超微结构的观察证明了花烛体胚发生过程。     

芸芥体细胞胚胎发生的组织细胞学研究

以芸芥子叶为外植体, 在MS + 2, 4-D 1.0 mg·L^-1培养基上培养2周后可诱导体细胞胚胎的发生。胚性愈伤组织在MS + 2, 4-D 0.2 mg·L^-1培养基上大量增殖, 体细胞胚胎在N₆培养基上成熟后, 可在附加0.1 mg·L^-1 IBA的1/2MS培养基上生长。切片观察表明: 芸芥体细胞胚胎为单细胞发生方式, 与合子胚形成过程相似。芸芥胚性细胞具有细胞小、胞质浓、核大、核仁明显, 排列紧密的特点, 首先由单个细胞分裂形成2 - 细胞原胚, 2 - 细胞原胚分裂成3 - 细胞原胚或4 - 细胞原胚, 3 - 细胞原胚或4 - 细胞原胚继续分裂形成多细胞原胚, 进一步发育成一个成熟的体细胞胚胎。     

‘过山香’香蕉多芽体的诱导及其体细胞胚的发生

 以我国重要香蕉种质‘过山香’ (AAB) 为材料, 研究了香蕉多芽体诱导、多芽体茎尖薄切片即分生组织性的表层结构物( scalp) 愈伤组织诱导和体细胞胚发生的合适条件。结果表明, 该品种单个不定芽茎尖在P4培养基(含BAP 100 μmol·L ^{- 1}和IAA 1 μmol·L ^{- 1} ) 中继代5个周期后可诱导获得类似花椰菜结构的多芽体。从30 μmol· m ^{- 2} ·s^{- 1}光强, 光/暗周期(16 h /8 h) 培养的多芽体所获得的scalp在添加2,4-D 5μmol·L ^{- 1}和Zeatin 1 μmol·L ^{- 1}的愈伤组织诱导培养基中黑暗培养, 45 d后愈伤组织诱导率可达97.6%。诱导20 d后黄色分生小球体类结节状愈伤组织开始发生, 90～120 d后在分生小球体局部可获得白色或浅黄色松散的胚性愈伤组织(诱导率为17.5% ) 。从胚性愈伤组织诱导的体细胞胚在成熟培养基上培养60 d后体胚萌发率和植株转化率分别为14.5%和11.1%。     

根癌农杆菌介导Cry1Ac基因转化‘雪青’梨获得转基因植株

 以‘雪青’梨叶片愈伤组织为外植体, 经根癌农杆菌介导将CaMV35S启动子调控下的Cry1Ac基因导入‘雪青’梨。698块愈伤组织和231个Kan^r芽与携带表达载体质粒pBX203的根癌农杆菌菌株LBA4404共培养3 d后, 转入含50 mg·L^-1 Kan的筛选培养基培养30 d, 15 d转接1次。结果表明,在MS + 5 mg·L ^-1 6-BA + 0.1 mg·L^-1 IAA筛选培养基中, Kan^r芽率为34.24% , 在1/2MS + 2 mg·L^-1 IBA+ 0.5 mg·L^-1 6-BA + 500 mg·L^-1AC筛选培养基中, 15.58% Kan^r芽生根。共获得再生植株32株, 经PCR和Southern-blot分析证明, 其中4株的基因组已成功导入和整合Cry1Ac基因。     

枣离体叶片高效再生植株的研究

 以‘黄骅冬枣’组培苗叶片为试材, 研究了叶片幼嫩程度、叶片来源、组培苗状态以及植物生长调节剂等对离体叶片诱导不定芽再生的影响, 并获得了完整的再生植株。结果表明, 以未生根组培苗中上部叶片再生效果较好; TDZ诱导叶片再生不定芽的效果显著优于BA; 离体叶片在MS + TDZ 1.0 mg·L ^{- 1} + IBA 0.1 mg·L ^{- 1}培养基中诱导培养28 d后, 转入MS + IBA 0.1 mg·L ^{- 1} + GA₃ 0.05 mg·L ^{- 1}培养基中二次培养, 叶片再生效果最好, 再生率可达92.45%。将叶片再生植株转入MS +BA 1.0 mg·L ^{- 1} + KT0.5 mg·L ^{- 1} + IBA 0.1 mg·L ^{- 1}培养基中继代增殖培养, 增殖系数达3.64。以1 /2MS + IAA 1.0 mg·L ^{- 1}培养基诱导生根, 生根率87.1%。生根苗大田移栽成活率达到57%。     

大白菜、青花菜和叶用芥菜体细胞杂交种形态学与细胞学特性鉴定

 为拓宽十字花科蔬菜育种种质资源,以大白菜（Brassica campestris L. ssp. pekinensis）、青花菜（B. oleracea L. var. varitalica）和叶用芥菜（B. juncea L. Czern）的子叶、下胚轴为材料,分离、纯化原生质体,采用40% 聚乙二醇（Polyethylene glycol,PEG）融合法进行原生质体融合。融合细胞在附加0.2 mg · L^-1 2,4-D + 0.5 mg · L^-1 6-BA + 0.1 mg · L^-1 NAA + 0.1 mg · L^-1 激动素（kinetin）的改良K8p培养基中液体培养,当细胞分裂至8 ~ 10细胞期时,将分裂的细胞包埋于0.15%琼脂糖,然后在添加0.3 mol · L^-1蔗糖和2 mg · L^-1 6-BA + 2 mg · L^-1 玉米素（zeatin）+ 1 mg · L^-1 NAA + 0.5 mg · L^-1 kinetin的Kao培养基中诱导愈伤组织。将培养获得的936个愈伤组织转到3种不定芽诱导培养基MS + 5 mg ? L-1 zeatin + 2 mg · L^-1 IAA;MS + 2 mg · L^-1 zeatin + 2 mg · L^-1 IAA;MS + 0.5 mg · L^-1 6-BA + 0.5 mg · L^-1 NAA上诱导芽分化,当芽长3 cm左右时,转到1/2 MS + 0.2 mg · L^-1 NAA的生根培养基上诱导生根,共获得了96株再生植株,对其进行形态学、细胞学和分子生物学鉴定。形态学观察显示再生植株表型变化大,包括3个亲本的中间型或两个亲本的中间型;PCR技术鉴定结果显示96株杂种植株中93株为细胞质雄性不育特性;染色体计数显示,再生的植株染色体数变化范围广（2n = 38 ~ 64）,但未发现染色体数总和与3种融合亲本染色体数总数（2n = 74）相一致的个体。基因组原位杂交（Genomic in situ hybridization,GISH）和扩增片段长度多态性（Amplified fragment length polymorphism,AFLP）分析结果表明,再生植株基因组中分别检测出大白菜、青花菜、叶用芥菜的DNA片段,证实了大白菜、青花菜、叶用芥菜种间体细胞杂交种的真实性。     

不同培养条件对‘丰香’草莓离体叶片再生的影响

 以草莓品种‘丰香’离体叶片为外植体, 探讨了基本培养基、不同细胞分裂素、暗培养、硝酸银浓度以及不同植物生长调节剂组合对不定芽再生的影响。结果表明, 基本培养基中以MS 最为适合,WPM、QL 、AS 培养基均不利于不定芽的再生, 而TDZ 的诱导效果好于BA。以MS 基本培养基附加TDZ2.0 mg·L - 1和IBA 0.8 mg·L ^-1可以使‘丰香’叶片不定芽的再生率高达72.33 % , 平均每叶再生芽5.59个。暗培养14 d 可以将‘丰香’叶片的不定芽再生率提高到90.09 %。硝酸银对于提高‘丰香’叶片的不定芽再生没有明显效果, 但在一定程度上改变了细胞分化的方向。     

银条茎尖培养快繁及离体根状茎的诱导

 以银条‘二细一粗’品种为试材, 研究了蔗糖浓度、激素组合对茎尖培养和快速繁殖的影响及温度、光照、蔗糖浓度等因素对根状茎离体诱导的影响。结果表明: 茎尖培养较理想的培养基为MS + 蔗糖4 % + 6-BA 0.5 mg·L ^{- 1} + NAA 0.1 mg·L ^{- 1} , 成苗率可达74.0 %。茎尖增殖较适培养基为MS + 6-BA 3.0 mg·L ^{- 1} + NAA 0.5 mg·L ^{- 1} , 每个外植体平均可产生5.6 个芽。根状茎诱导以MS + 蔗糖10 % + 6-BA 510 mg·L ^{- 1}+ CCC 500 mg·L ^{- 1}培养基, 20 ℃全黑暗培养效果最好。     

适于制作人工种子的一品红体细胞胚的培养

 MS + 2,4-D 2.0 mg·L ^{- 1} + 6-BA 0.5 mg·L ^{- 1}固体培养基较适合一品红苞片诱导愈伤组织。MS+ 2,4-D 1.0 mg·L ^{- 1} + 6-BA 0.5 mg·L ^{- 1} +水解酪蛋白80 mg·L ^{- 1}固体培养基上体细胞胚分化率最高。活性炭、MS培养基和悬浮振荡培养有利于高频率体细胞胚发生。球形、心形及梨形胚及时转入添加NAA 0.2 mg·L ^{- 1}、6-BA 0.5 mg·L ^{- 1}及水解酪蛋白80 mg·L ^{- 1}的MS液体培养基中, 有利于高质量体细胞胚发生。子叶期胚及时转入添加ABA 0.5 mg·L ^{- 1}的上述培养基中, 会提高正常体细胞胚的百分率。用高质量(子叶期) 的一品红体细胞胚包埋制作人工种子, 在无菌条件下萌发率为58.1%。