基于交配型基因的酶切扩增多态性序列鉴定双孢蘑菇核型

为建立鉴定双孢蘑菇(Agaricus bisporus)核型的方法,根据GeneBank公布的其基因组信息,针对交配型基因序列设计特异性引物,以W192两个不同核型的同核体菌株A1和A2的菌丝体基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得交配型基因序列,筛选存在差异的序列,预测基因片段的限制性内切酶位点,筛选最佳酶切位点,根据酶切片段的差异鉴定菌株的交配型。结果表明:筛选得到长度为736 bp的基因序列,将其命名为aba1;核型为A1的同核体菌株,采用内切酶EcoRⅤ可以将aba1酶切成大小为257 bp和479 bp的两个片段;核型为A2的同核体菌株,采用内切酶XhoⅠ可以将aba1酶切成大小为327 bp和409 bp的两个片段;如果同时可以被两种限制性内切酶酶切,说明该菌株为异核体。采用基因测序鉴定了5株标记为孢子同核体的菌株和8株标记为原生质体同核体的菌株,测序结果表明:5株标记为孢子同核体的菌株中176P11、176P14和176P17的核型属于A1型,176P12和176P19属于A2型;8株标记为原生质体同核体的菌株中101-1P75和03P75的核型为A1型;152P11、46P23、46P27和152P2为A2型;03P46和176P21属于异核体;同时又采用笔者建立的内切酶方法鉴定了这些菌株,核型与基因测序鉴定结果相同。     

葡萄MADS-box转录因子家族全基因组鉴定及表达分析

从葡萄基因组中共鉴定出54个MADS-box基因,其中Type-Ⅰ型10个,Type-Ⅱ型44个,分布于15条染色体中,编码的蛋白质序列为62～596个氨基酸,外显子数1～16个。启动子区含有大量光信号、植物激素、胁迫和分生组织等相关功能域。根据实时荧光定量RT-PCR的结果发现,SEP、FUL、FLC、SVP、SOC1和ANR1亚类基因随叶片生长表达水平逐步升高,在成熟叶中最高,衰老叶片中下降;果实第1次膨大期和果实转色期是SEP、SOC1和ANR1亚类基因的两个表达高峰期;单氰胺处理诱导SVP、AGL15、SOC1、AP3/PI、AGL12和FLC亚类基因在休眠过程中表达量持续上升,在休眠解除过程表达量下降。     

菜田除草膜的应用技术

为解决菜田草害,提高蔬菜产量,我们与华东理工大学合作,将除草剂制成药膜进行试验,以寻求省工、增产、高效的除草新途径.现就除草膜的应用结果报告如下:材料与方法配制含有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号除草剂药膜,以及Ⅰ+Ⅱ和Ⅱ+Ⅲ号的不同混配药膜.选择杂草基数较高且地势平坦的田块,耕翻整地划小区,每个小区10—12m~2,分别覆盖含不同除草剂、不同剂量药膜以及混配药膜,每个处理重复3次,按随机区组排列.另外在辣椒、茄子试验田,每年分别各设1个试验点,盖膜后30天、60天,分别考查残存杂草数,最后1次加测杂草鲜重,计算除草效果.并目测安全性和作物农艺性状,最后测产.     

我国双孢菇菌株与国外引进菌株间亲缘关系的ISSR分析

以国内外的10个双孢菇菌株为试材,利用ISSR分子标记技术对其进行亲缘关系分析。结果表明:从117个ISSR引物中筛选出11个条带清晰重复性好的引物,对10个双孢菇菌株的基因组DNA进行扩增,共获得73条清晰条带,其中多态性条带51条,多态性位点百分率为69.86%。利用NTSYSpc 2.10软件计算菌株间Nei遗传距离为0.5479~0.9589,以平均连锁法(UPGMA)进行聚类分析,可将10个双孢菇菌株分为4个类群:类群Ⅰ为国内的2个菌株258和2796;类群Ⅱ是引自荷兰的HRLM;类群Ⅲ包括引自美国的L901、5113、XXX和2200;类群Ⅳ包括引自荷兰的H901、F3F和HA15。引自美国和荷兰的双孢菇菌株之间亲缘关系较近,相似性达0.85以上,而与我国的双孢菇亲缘相似性仅为0.61。因此,国外优质双孢菇菌株的引进对于增加我国双孢菇遗传多样性具有重要作用。     

河南省白灵侧耳菌株遗传多样性分析

采用拮抗反应和基因间隔区2(intergenic spacer 2,IGS2)分析方法对河南省32个白灵侧耳(Pleurotus tuoliensis)菌株的遗传多样性进行分析。结果:除菌株Pt1、Pt5和Pt22外,绝大多数菌株间存在拮抗反应;应用Hpa Ⅱ、Rsa Ⅰ和Hae Ⅲ等3个限制性内切酶,对IGS2扩增产物进行酶切和电泳分析,不同菌株电泳后产生多样性丰富的图谱。根据聚类分析结果将所有菌株分为3个大类,3个大类遗传关系相对较远,最终将32个菌株鉴定为3组,可为今后白灵侧耳新品种杂交选育亲本的选择提供参考。     

辣椒全基因组WRKY转录因子的分析

基于已公布的辣椒全基因组数据,利用生物信息学方法对辣椒WRKY转录因子家族进行全面鉴定和系统命名,并在此基础上对基因分类、染色体定位、系统进化关系和结构域序列保守性进行了研究。结果表明:辣椒CaWRKY家族包含71个基因,根据WRKY结构域的数量及锌指结构的特征可将其分为GroupⅠ、GroupⅡ和GroupⅢ等3大类,GroupⅡ又可分为Ⅱ(a)、Ⅱ(b)、Ⅱ(c)、Ⅱ(d)和Ⅱ(e)等5个亚类。辣椒12条染色体上均有WRKY转录因子分布,其中第1号染色体上分布最多,共有10个,第4号染色体上分布最少,仅有2个。辣椒每类/亚类WRKY几乎含有相同的保守基序。辣椒WRKY编码的蛋白在132~869个氨基酸范围内,平均氨基酸数量为373个。     

不同基质配比对寿星桃叶片几种生理指标的影响

以2a生红花寿星桃叶片为试材,研究了河沙∶泥炭∶腐叶土=1∶1∶1(处理Ⅰ)、珍珠岩∶泥炭∶腐叶土=1∶1∶1(处理Ⅱ)、蛭石∶泥炭∶腐叶土1∶1∶1(处理Ⅲ)、泥炭∶腐叶土=2∶1(对照)不同基质配比对其叶绿素含量、蛋白质含量及可溶性糖含量的影响.结果表明:不同季节不同基质处理下叶片总叶绿素含量大小为:春季:处理Ⅰ＞对照＞处理Ⅲ＞处理Ⅱ.夏季:处理Ⅲ＞处理Ⅰ＞对照＞处理Ⅱ.秋季:对照＞处理Ⅱ＞处理Ⅲ＞处理Ⅰ.不同季节不同基质处理下叶片可溶性糖含量大小为:春季:对照＞处理Ⅲ＞处理Ⅱ＞处理Ⅰ.夏季:处理Ⅱ＞处理Ⅰ＞对照＞处理Ⅲ.秋季:对照＞处理Ⅱ＞处理Ⅲ＞处理Ⅰ.不同季节不同基质处理下叶片蛋白质含量大小为:春季:处理Ⅱ＞对照＞处理Ⅰ＞处理Ⅲ.夏季:处理Ⅲ＞处理Ⅱ＞对照＞处理Ⅰ.秋季:对照＞处理Ⅲ＞处理Ⅱ＞处理Ⅰ.     

马缨杜鹃ARF转录因子家族的全基因组鉴定与生物信息学分析

以马缨杜鹃(Rhododendron delavayi)基因组数据为基础,以拟南芥ARF(AtARF)序列为参考,利用Blast比对程序,在马缨杜鹃基因组数据库中鉴定了15个ARF基因,命名为RdARF。使用生物信息学的方法对基因的结构、理化性质、系统进化关系以及表达模式进行了分析,以期为马缨杜鹃ARF基因的克隆及深入研究提供参考。结果表明:15个RdARF蛋白均含有保守的B3结构域和Auxin-resp结构域,部分蛋白含有Aux/IAA结构域,共有10个保守基序,均含有丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)磷酸化位点,均含有内含子和外显子结构,与23个AtARF蛋白一起可以分为Ⅰa、Ⅰb、Ⅱa、Ⅱb和Ⅲ5个亚家族,15个RdARF基因在干旱胁迫前后具有4种不同的表达模式。     

苹果WRKY转录因子家族基因生物信息学分析

 利用生物信息学方法对苹果MdWRKY转录因子家族成员、基因分类、染色体定位、系统进化关系和结构域序列保守性进行了预测,并分析基因在果实成熟期和砧穗互作中的表达差异。苹果MdWRKY家族包含116个基因,分为GroupⅠ、GroupⅡ和GroupⅢ,其中GroupⅡ又可细分为GroupⅡa、GroupⅡb、GroupⅡc、GroupⅡd和GroupⅡe亚类;苹果的17条染色体均有WRKY转录因子分布,其中第1条染色体上的分布最多,有12个WRKY基因分布。MdWRKY编码的蛋白在118 ~ 965个氨基酸范围内,等电点位于4.81 ~ 10.16之间。Microarray分析发现,在苹果果实成熟时期和砧木接穗互作过程中,多数MdWRKY基因的表达都有不同程度的变化。     

转Pofst3糙皮侧耳菌株农艺性状和胞外酶活性分析

通过袋栽实验比较野生型、Pofst3过表达型和Pofst3反义沉默型糙皮侧耳（Pleurotus ostreatus）菌株（分别记为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）的菌丝生长速度、原基数量、子实体数量、菌柄直径、菌盖直径等农艺性状;测定其漆酶、木聚糖酶、纤维素酶活性。结果表明：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ菌丝生长速度差异不显著；与Ⅰ相比，Ⅲ的原基和子实体数量多，菌柄直径大，菌盖直径小，原基和子实体中Pofst3的相对表达量低；与Ⅰ、Ⅱ相比，Ⅲ的漆酶、木聚糖酶及纤维素酶活性较高；Pofst3对糙皮侧耳发育的影响可能与其胞外酶活性相关。     

辣椒B-box转录因子家族的鉴定及表达分析

以辣椒基因组数据为基础,利用生物信息学方法,对辣椒B-box家族基因进行了染色体定位、基因结构、系统进化及组织表达模式等分析,并通过qRT-PCR方法对该家族基因在激素及非生物胁迫下的转录水平进行了检测。辣椒全基因组中共鉴定出26个BBX家族成员,分布于辣椒12条染色体上。系统进化分析分析发现,辣椒BBX蛋白成员可进一步分为5类:groupⅠ～Ⅴ。其中,groupⅠ包含两个B-box结构域;groupⅡ和Ⅲ中的蛋白除CaBBX25外,都包含B-box1、B-box2和CCT结构域;groupⅣ仅包含1个B-box结构域;groupⅤ含有1个B-box和1个CCT结构域。同一进化分类中的成员通常具有相同或者相似的外显子数,其蛋白中保守基序的构成也具有较高的相似性。组织特异性表达分析发现,除D类基因外,其他17个基因在不同器官或者果实的不同发育时期都有着较高的表达水平。qRT-PCR分析发现,10个CaBBX基因受到激素和非生物胁迫不同程度的诱导表达。     

不同短截结果母蔓对“贵长”猕猴桃新蔓发育和产量的影响

1　材料与方法试验在贵州省蚕科所猕猴桃园内进行,供试品种9～10年生“贵长”猕猴桃,行株距为3ｍ×2ｍ,667ｍ2定植树110株。试验设3个处理,每处理重复3次,单株小区。处理Ⅰ:对所留结果母蔓的春蔓段剪去顶蔓1/3留蔓长度;处理Ⅱ:对结果母蔓的顶蔓剪去1/4留蔓长度;处理Ⅲ:对结果母蔓的顶蔓剪去1/5留蔓长度。于每年1月下旬、5月上旬、7月上旬和10月上旬,分别调查结果母蔓条数,单株留芽量;单株开花朵数;新蔓和结果蔓条数;单株挂果数和单株产量各项指标平均值进行比较。2　结果与分析21　不同短截程度对单株留芽量、新蔓抽生数量及成蔓率均有不同…     

辣椒全基因组中LBD转录因子的鉴定与表达分析

利用生物信息学的方法,从辣椒基因组中鉴定出45个LBD基因,这些基因分布于辣椒9条染色体上。该家族成员内含子数整体上不超过3个,结构相对简单。进化关系显示辣椒LBD基因可分为ClassⅠ和ClassⅡ两大类,细分为Ⅰa、Ⅰb、Ⅰc、Ⅰd、Ⅰe、Ⅱa和Ⅱb等7个亚类。不同组织和发育时期的表达模式研究发现,该基因家族具有一定的时空表达特异性。qRT-PCR结果表明,热激胁迫可以明显激活或抑制部分LBD基因的表达,其中ClassⅡ类基因较ClassⅠ类对高温具有更高的敏感性。     

芥菜种质资源的RAPD和ISSR分析

利用RAPD和ISSR标记对28份芥菜种质资源进行遗传多样性分析,20个RAPD引物共扩增出162条清晰的谱带,其中140条显示多态性,平均每个引物扩增出7.0条多态性谱带.18个ISSR引物共扩增出143条清晰的谱带,其中多态性谱带124条,平均每个引物扩增出6.9条多态性谱带.基于RAPD和ISSR两种标记,利用UPGMA分别构建了28份芥菜资源的聚类树状图.结果表明,RAPD和ISSR分别聚类以及两种标记混合聚类均将28份芥菜种质分为3类:第Ⅰ类群中包括了15份种质;第Ⅱ类群中包括了9份种质;第Ⅲ类群中包括了4份种质.     

利用SSH方法分离辣椒胎座中不同辣味积累阶段cDNA克隆

辣椒素主要在果实胎座组织中合成,为了进行辣椒素生物合成的分子遗传学研究,采用SSH法,构建一个特辣型品种Habanero胎座cDNA文库。通过dotblot和核苷酸序列分析,从400个消减克隆中选择了39条cDNA克隆,将其与数据库中DNA和蛋白质进行了比对,估计这些克隆的序列信息。结果表明cDNA克隆可分为4类:I类cDNAs,与编码包括酰基转化酶和脂肪酸乙醇氧化酶在内的代谢酶基因同源;Ⅱ类为推定细胞壁蛋白质;Ⅲ类为生物和非生物胁迫蛋白质;Ⅳ类为非同源cDNAs。Northern blot分析证明这些克隆在辣椒中差异表达。结果说明所有的cDNA克隆在辣椒中差异表达,Ⅰ类和Ⅳ类的cDNA克隆在辣椒胎座中差异表达或优先表达。     

草菇泰国1号菌株交配型A因子分子遗传学及生物信息学解析

采用简并PCR引物获得mip基因保守片段后,通过长片段PCR技术从草菇(Volvariella volvacea)菌株泰国1号孢子单核体中扩增获得了A1、A2交配型位点的DNA序列,结果表明:每个交配型位点均含2个交配型基因(HD1和HD2),其中A1位点的交配型基因为HD1-A1-TG和HD2-A1-TG,长度分别为1341bp和1450bp,各编码446和429个氨基酸残基;A2位点的交配型基因为HD1-A2-TG和HD2-A2-TG,长度分别为1442bp和1501bp,各编码463和443个氨基酸残基。利用生物信息学方法分析了泰国1号及另外两株草菇代表性菌株V23和屏优的交配型基因编码的HD蛋白序列,结果表明:HD蛋白均含有同源异形结构域。根据系统进化树可以看出,泰国1号与V23、屏优菌株A位点HD1和HD2基因序列所编码的氨基酸序列之间亲缘关系复杂,可能具有不同的起源。     

大白菜—结球甘蓝异源三倍体（ACC）基于25S rDNA的FISH分析

 应用25S rDNA-FISH对大白菜—结球甘蓝异源三倍体（ACC）中期染色体组成和减数分裂染色体行为进行了分析,并进行了花粉特性和结实性的研究。结果表明,大白菜—结球甘蓝异源三倍体染色体数为28,含有9个25S rDNA位点,其中4个来自结球甘蓝4号和7号染色体;5个来自大白菜1 ~ 5号染色体;A、C基因组间不同染色体同源程度不同,减数分裂终变期常形成单价体、二价体和三价体等不同的联会方式;中期Ⅰ和中期Ⅱ存在游离染色体;后期Ⅰ和后期Ⅱ染色体分离不均衡,并存在染色体落后或丢失;末期Ⅱ有微核产生。异源三倍体花粉整齐度和生活力远低于其二倍体亲本,自交及与亲本甘蓝（CC）回交的结籽率都极低,仅为0.01%。     

种植密度对黄芩生育性状和产量的影响

以1年生黄芩为试材,研究了不同种植密度对1年生黄芩产量和干物质分配的影响,以明确人工栽培黄芩最适种植密度。结果表明:种植密度对植株茎高以及主茎分枝数的影响不显著;对茎粗和根长的影响较为明显,呈处理Ⅴ(株距20cm)处理Ⅳ(株距16cm)处理Ⅲ(株距12cm)处理Ⅱ(株距10cm)处理Ⅰ(株距5cm);随着种植密度的增大,根变细,叉根数增多,根外观品质变差。一定范围内增大种植密度,黄芩群体单位面积根重、地上面积干重以及根冠比均明显提高,说明提高种植密度是增加黄芩产量的有效措施;单株根重和单株地上部分干重则随种植密度的增加而减少,表现为处理Ⅴ处理Ⅳ处理Ⅲ处理Ⅱ处理Ⅰ;种植密度对根、茎、叶黄酮量的影响表现为根部黄酮量处理Ⅱ处理Ⅲ处理Ⅰ处理Ⅳ处理Ⅴ,茎部黄酮量处理Ⅲ处理Ⅱ处理Ⅰ处理Ⅳ处理Ⅴ,叶部黄酮量处理Ⅱ处理Ⅲ处理Ⅳ处理Ⅴ处理Ⅰ。人工种植黄芩适当密植,协调好个体与群体、地上部分与地下部分的关系,促使器官物质合理分配,并最大程度的利用光、温、水、气、肥等自然环境条件,是黄芩获得高产优质最重要的技术手段。     

异源三倍体百合为母本的杂交后代GISH分析

百合异源三倍体是渐渗育种的常用亲本。为了评价异源三倍体‘Royal Lace’的育种价值,采用基因组原位杂交技术分析了‘Royal Lace’及其与亚洲百合‘Pollyanna’的6个杂种后代的基因组组成。研究结果显示：‘Royal Lace’含有24条亚洲百合染色体和12条麝香百合染色体,为异源三倍体,包括1条亚洲百合重组染色体和1条麝香百合重组染色体。6个杂种后代均为非整倍体,染色体数27 ~ 32,不同杂种后代的重组染色体及重组位点存在差异,杂种后代基因组组成的不同是后代表型变异的遗传基础,因此,‘Royal Lace’是百合渐渗育种及非整倍性育种的良好亲本。     

青萝卜种质资源主要农艺性状的表型评价

主要农艺性状的表型评价是青萝卜育种的重要依据。对48份青萝卜种质资源的33个主要农艺性状进行变异分析、相关性分析、主成分分析和聚类分析,结果表明:9个数量性状均有不同程度的变异,单株质量变异系数最大,为32.46%,叶宽变异系数最小,为14.67%;以肉质根为主的典型农艺性状间存在复杂的相关性,相关性极显著的有29对,相关性显著的有8对;从33个农艺性状提取出9个主成分,累计贡献率为78.937%,基本反映了青萝卜地上部和地下部重要农艺性状信息;在平方欧式距离系数为8.5时,可将48份供试青萝卜种质资源分为3个组群,第Ⅰ组群包括33份材料,主要特征是株高、开展度、叶长、叶宽和叶片数在3组中最小,第Ⅱ组群包括14份材料,主要特征为株型、叶片大小中等,第Ⅲ组群只有1份材料,其株高、开展度、单株质量和单根质量在3组中最大。