澳洲坚果RAPD标记反应体系的建立及应用

以澳洲坚果为试材,利用单因素试验对影响RAPD标记反应体系的主要因素进行优化,建立适合澳洲坚果RAPD标记的反应体系。结果表明,澳洲坚果RAPD最优反应体系为:20μL反应体系中,模板DNA 40 mg/L,引物0.6μmol/L,Taq聚合酶1.0 U,Mg2+2.5 mmol/L和dNTPs 0.4mmol/L。利用该最优反应体系对不同引物和澳洲坚果种质进行验证,扩增条带具有良好的可靠性和稳定性,且分辨率较高,可用于澳洲坚果种质资源鉴定及遗传多样性分析等。     

利用正交设计建立洋桔梗RAPD最佳反应体系

利用正交设计法对影响洋桔梗RAPD反应的Mg2 、dNTPs、Taq DNA 聚合酶、引物和模板等主要因素的作用进行了比较分析,建立了洋桔梗RAPD的最佳反应体系:即在25 μL反应体积中,10×PCR buffer为2.5 μL ,Mg2 浓度为2.0 mmol/L,dNTPs浓度为0.4 mmol/L,引物浓度为0.2 μmol/L,模板浓度为50 ng/μL,Taq DNA聚合酶用量为1.0 U;在此基础上,比较了不同退火温度对RAPD扩增产物的影响,退火温度经筛选选定为41℃;最后再将该反应体系应用于不同引物,结果表明该优化结果具有较好的稳定性和通用性.     

岩虱子RAPD反应体系的研究

利用RAPD（随机扩增多态DNA）技术对濒危植物岩虱子进行了RAPD反应体系的研究.以岩虱子叶片为材料,采用改良的CTAB法提取其基因组DNA,进行RAPD反应条件的优化试验.通过单因子试验分别研究了模板DNA用量、Mg^2＋浓度、dNTPS浓度、Taq酶的用量和引物浓度对RAPD反应的影响,建立了适于岩虱子RAPD分析的有效的稳定的反应体系,即在25μL总反应体系中,模板DNA的最适用量为10 ng、Mg^2＋的适宜浓度为2.0 mmol/L、dNTPs的适宜浓度2.2 mmol/L、Taq酶的用量以1 U、随机引物的浓度以2.5 μmol/L为佳.     

适于南瓜遗传多样性分析的RAPD引物筛选

采用CTAB法提取南瓜DNA基因组,优化的RAPD反应体系,对RAPD随机引物进行了筛选,从260条引物中筛选出多态性好、稳定性高的引物26条作为南瓜RAPD分析引物,为进一步进行南瓜遗传多样性分析提供依据.     

阿月浑子性别鉴定的RAPD分析

应用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对新疆阿月浑子(PistaciaveraL.)地方品种雌、雄株进行性别鉴定的研究。通过叶片总DNA抽提、RAPD标记分析及反复的试验筛选,找到了一个适用于新疆阿月浑子的RAPD反应体系和循环参数。采用OPO08引物对雌、雄株基因组DNA扩增出性别之间差异性的核苷酸片段,证实雄性植株DNA的扩增产物有一条大约700bp的特异性条带,而雌性植株则无此特异性条带。即找到一条与阿月浑子性别相关的基因标记,表明RAPD技术可应用于新疆阿月浑子地方品种的性别鉴定。此研究是对我国雌雄异株果树阿月浑子在分子水平进行早期性别鉴定的一个尝试。     

石斛属植物遗传多样性RAPD分析

应用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,对石斛属植物16个种进行了基因组DNA多态性分析.从82个随机引物中筛选出20个多态性好的引物进行RAPD扩增,扩增DNA片段数据用UPGMA聚类法构建系统发育树.20条引物共扩增出142条带,多态性带118条,约占总数的83.1%.聚类结果显示RAPD分子标记构建的系统发育树与经典分类系统一致.RAPD标记可为石斛属植物的系统分类研究提供分子生物学依据.     

RAPD和SRAP分子标记在真姬菇菌种鉴定中的应用

利用RAPD及SRAP分子标记技术对从国内外收集到的12个真姬菇菌株进行遗传多样性分析.结果表明,20条RAPD引物共扩增出多态性条带285条,18对SRAP引物共扩增出多态性条带176条.在相似系数0.800水平时,RAPD和SRAP分子标记分别将12个真姬菇菌株分为5个和6个类群.两种方法均适用于真姬菇种内鉴定,而SRAP标记较RAPD标记稳定性好,更适于真姬菇的种内鉴定.     

黄瓜老化种子基因组DNA的损伤与修复的RAPD研究

应用RAPD技术对人工老化和PEG处理的黄瓜种子进行扩增多态性DNA分析.建立了黄瓜种子基因组DNA的损伤及其修复的RAPD指纹图谱.在92条引物中有22条可应用于老化种子的研究.16条可应用于PEG处理种子的研究,并从中找出了6条引物S190、S300、S359、S475、S1140、S2144用来比较黄瓜老化种子及其修复的RAPD扩增带型的变化.结果发现,人工老化处理的黄瓜种子的DNA带减少甚至消失.而PEG渗调修复后的黄瓜老化种子DNA带重新出现或者与对照基本相同,从而建立了黄瓜老化种子基因组DNA的损伤与修复的RAPD指纹图谱.     

基于RAPD分析的李子新品种鉴定

以改进CTAB法对玉皇李和未鉴定新品种叶片基因组DNA的提取进行了试验。结果表明,该方法从这2个品种李树叶片中均能提出基因组总DNA,且DNA的纯度和完整性均较好,OD_(260)/O D_(280)的比值在1.8～2.0之间,无降解现象,RNA去除干净;此外,运用RAPD标记方法对这2个李品种基因组总DNA进行了PCR扩增,其RAPD分析条带清晰,用20条随机引物共扩增出114条带,平均每条引物扩增出5.7条条带,扩增片段长度为200～2000 bp,其中P_6、P_7、P_(10)、P_(14)和P_(18)5条随机引物可以单引物区分这2个品种,共获得20个条带,其中差异条带有6个,表明这6个位点存在差异。因RAPD每条扩增谱带对应基因组DNA分子上的一个位点,说明供试品种间DNA位点存在差异,表明未鉴定新品种在栽培过程中发生突变和分化,可能是1个优良种源。     

十八个麝香百合基因型遗传差异性的RAPD分析

对18个麝香百合基因型的遗传差异性进行了RAPD分析,筛选具有优良性状的新品种,并尝试使用RAPD标记技术的DNA指纹图谱作为DUS测试的分子生物学依据.结果表明:14条引物共扩增出142条带,其中多态性条带106条,多态百分比为74.65%,总体多态百分比不是很高,说明各基因型之间遗传差异较小.对RAPD扩增结果进行聚类分析,这18个基因型可以分成4类.一些引物扩增的结果显示,部分基因型具有特异性条带,说明RAPD技术在DUS测试中可以从分子生物学性状来鉴定新品种的特异性.     

基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的柑橘溃疡病菌检测方法

根据柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri ssp.citri,Xcc)基因组的保守序列设计特异引物,通过对引物浓度、反应温度和反应时间条件优化,建立了柑橘溃疡病菌重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification,RPA)检测方法。该方法无需PCR仪等复杂设备,在39℃恒温反应30 min即可完成检测过程,快速简便。该检测方法与其他柑橘病原无交叉反应,特异性强;检测灵敏度是普通PCR的100倍,与实时荧光定量PCR基本一致。对71个柑橘样品进行检测,RPA检测出溃疡病阳性样品22个,与PCR、实时荧光定量PCR检测结果一致。     

高质量提取柑橘样品中病原总核酸方法的建立

针对柑橘老熟组织中富含多糖、多酚、色素和其它次生代谢产物的特点,以柑橘老叶老皮为试材,在传统CTAB提取法的基础上通过添加增效剂并优化配方,建立了一种快速、简便的提取植物老熟组织及其内部病原总核酸的CTAB-Triton提取法。新的提取液对细胞的裂解能力更强,且解决了传统CTAB溶液因低温析出而致DNA得率损失的弊端。比较了该法和微量葡聚糖柱纯化法制备模板时韧皮部杆菌的检出率,并用该法制备模板,分析了韧皮部杆菌在柚子叶片中的分布情况,及对其它几种柑橘病原菌进行PCR/RT-PCR检测。结果表明,CTAB-Triton方法能有效提取柑橘老熟叶片的DNA,所得DNA质量高,产量比商品化试剂盒大,提高了韧皮部杆菌的检出率,且可用于柑橘其他病原真菌、细菌,以及DNA或RNA病毒病害的PCR/RT-PCR检测,也可用于定量PCR检测和病原种群多态性分析。     

柑橘黄龙病和衰退病的同步PCR和RT-PCR检测

柑橘黄龙病(HLB)和衰退病(CTV)是2种危害严重的世界性柑橘病害,国内外对其病原检测的研究相当多。研究建立了同时检测HLB和CTV的多重RT-PCR体系,从影响多重RT-PCR扩增的引物浓度、Mg2+浓度、Taq酶浓度、dNTPs浓度、退火温度等方面进行体系优化。结果表明,多重PCR反应的退火温度应优先考虑退火温度高的引物,退火温度高的引物所需浓度要大于相应退火温度低的引物。该体系实现了DNA病原和RNA病原的统一检测,进一步体现了多重RT-PCR的优越性。     

提高我国柑桔果实品质的探讨

柑桔(Citrus Linn)是一种热带和亚热带植物,它是我国南方重要的经济作物。柑桔的产量和品质与多种因子相联系。这些因子是:生产对象、环境因子和人为因子。本文讨论了柑桔品质与上述因子之间的相互关系,以及提高我国柑桔果实品质的方法。为了提高我国柑桔果实的品质,作者建议:(1)选择生态环境适宜的地区栽培柑桔;(2)选育和推广柑桔良种;(3)采取各种有效措施改造桔园生态环境,诸如搞好桔园基本建设,营造桔园防护林和应用合理的栽培技术等。     

QuEChERS-三重四极杆串联质谱测定柑橘中农药基质效应的方法研究

【目的】针对柑橘中常用的农药,采用QuEChERS方法和超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱,系统研究了其测定过程中的基质效应。【方法】柑橘样品利用乙酸-乙腈溶液(V∶V=1∶99)提取、GCB净化,采用甲醇-0.1%甲酸水溶液(含1 mmol·L^-1乙酸铵)作为流动相,正离子多反应监测(MRM)模式,基质外标法定量,可以有效地减弱基质效应。【结果】10种农药在柑橘中主要是以基质抑制为主,其基质效应范围为-18%~4%,在0.1~100 ng·mL^-1内线性关系良好,相关系数(r)大于0.999,检出限为0.08~0.30μg·kg^-1,回收率为70.5%~102%,相对标准偏差(RSD)为3.32%~5.76%。【结论】该方法快速简便、净化效果好,适合柑橘中常见农药的快速测定。     

环割对柑橘叶片衰老的影响

以3年生红黎檬砧‘暗柳橙’（Anliucheng）为试材,研究了环割与环剥对柑橘叶片光合性能及活性氧代谢的影响。结果表明,环割和环剥30 d后均不同程度降低了叶片叶绿素相对含量（SPAD）、净光合速率（Pn）、蒸腾速率（Tr）、气孔导度（Gs）和细胞间CO2浓度（Ci）,其中环剥处理对叶片SPAD和Pn产生了持续性的影响;环割和环剥在处理的前期均显著增加了叶片超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）等抗氧化酶活性;处理30 d后叶片抗氧化物质抗坏血酸（AsA）和还原型谷胱甘肽（GSH）含量显著低于对照,随后呈上升趋势,达到一个峰值后缓慢恢复到正常状态;各处理叶片膜脂过氧化产物丙二醛（MDA）含量均呈上升趋势,环割2次和环剥处理叶片初期MDA含量显著高于对照,引发柑橘叶片中一系列抗氧化反应,造成其膜脂氧化程度加剧。     

快速液相色谱法测定柑橘中6种类黄酮化合物含量

为建立一种快速分析测定柑橘果实中6种类黄酮(橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷、川皮素、桔皮素、橙黄酮)化合物的技术方法,以蜜橘为材料,利用加速溶剂萃取技术对柑橘果实中的6种类黄酮化合物进行提取,并通过快速液相色谱对样品中的类黄酮化合物进行分离测定。结果显示,该方法可以同时测定6种类黄酮化合物,并且具有良好的回收率和精密度。整个提取测定技术快速、简单、准确,适合柑橘果实中6种类黄酮化合物含量的测定。     

微生物发酵法从柑橘皮渣制取乙醇的研究

柑橘皮渣经石灰水浸泡、中和、过滤，提取液用微生物发酵法再经分馏而获得乙醇。此产 品经ＧＣ等分析达到Ａ．Ｒ级。     

利用AFLP鉴定柑橘变异

利用AFLP分析鉴定了7个柑橘变异类型,从64对引物组合中筛选了8对引物组合,共得到334个扩增位点2099条带数据。7个变异类型与亲本品种之间多态性带为36至92条,变异类型的多态性带数与亲本品种总带数的比例为0.1721至0.4182。说明变异类型的遗传基础已经发生了不同程度的改变,7个柑橘变异类型应是芽变,具备了成为新品种的遗传基础,特别是红皮冰糖脐橙选育成功将填补高糖脐橙空白。研究同时表明,AFLP具有扩增谱带多,谱带清晰,扩增信息量大的特点。根据谱带位点差异即可鉴定柑橘变异是否遗传,多态性位点数也反映了性状变异程度。AFLP方法1次可同时鉴定多个变异类型,是柑橘新品种选育早期鉴定灵敏、可靠、有效的方法。     

柑桔裂皮类病毒RT-PCR检测体系的建立及优化

柑桔裂皮类病毒(CEVd)是严重危害柑桔生产的一种世界性病害.本研究以感染CEVd的柑桔叶片为材料,提取总RNA,采用RT-PCR进行检测,并对PCR反应体系进行优化.结果表明:rTaqDNA聚合酶和Hotstart TaqDNA聚合酶能有效排除非特异性带的干扰;使用PCR增强剂,能有效解决CEVd非特异性带的干扰,提高了PCR的扩增效率.