黄龙病菌侵染晚锦橙叶脉和根早期病原蛋白组学的比较分析

【目的】黄龙病(Huanglongbing,HLB)是世界柑橘生产上最具毁灭性的病害,由于黄龙病病原菌无法离体培养,其关键的致病机制仍不清楚。为此,通过蛋白组学分析探究黄龙病菌侵染晚锦橙早期时病原蛋白的表达情况。【方法】利用叶圆片嫁接技术对晚锦橙(Citrus sinensis Osbeck)进行嫁接传毒,在传毒2个月时,对感病后的根和叶脉组织进行蛋白组测序,以黄龙病亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas)基因组为参考,对测序结果进行注释,并以感病叶脉为对照,筛选病原菌差异表达蛋白,最后利用qRT-PCR对显著性差异表达蛋白质进行验证。【结果】共鉴定出38个病原蛋白,其中有6个显著性表达差异蛋白;GO功能注释揭示这些病原蛋白主要与核酸结合和物质转运活性相关;qRT-PCR结果显示,6个显著差异蛋白在根部组织中的表达水平显著高于叶片组织;其中ABC转运系统重要组成成分CLasMalE(ACT56611.1)转运蛋白基因的表达倍数高达595倍。【结论】在黄龙病菌侵染柑橘根和叶的早期,与病原菌物质运输和核酸代谢相关基因的表达差异明显,暗示其在黄龙病菌侵染寄主中起着重要作用,为黄龙病菌致病机制研究提供了基因资源和理论基础。     

柑橘响应黄龙病侵染的韧皮部蛋白2基因CsPP2B15的克隆与表达分析

黄龙病病原菌诱导柑橘筛孔胼胝体过度积累是其致病的一个重要因素。柑橘韧皮部蛋白（Phloem Protein,PP）在筛孔胼胝体积累中起着重要作用。为研究柑橘韧皮部蛋白响应黄龙病亚洲种（Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas）侵染的功能,克隆获得了一个响应黄龙病侵染差异表达的PP基因CsPP2B15的编码区和长1.5 kb的启动子序列,并以高感品种锦橙和耐病品种酸柚老叶和嫩叶为材料,进行基因表达分析。结果发现,CsPP2B15在高感品种锦橙嫩叶中受CLas诱导显著上调表达,而在耐病品种酸柚嫩叶中受CLas诱导显著下调表达,且在叶肉中的表达量显著高于叶脉。嫩叶和嫩梢被认为是柑橘响应黄龙病侵染的早期原初侵染部位。因此,CsPP2B15可能在CLas侵染柑橘早期中起重要作用。CsPP2B15启动子的顺式作用元件预测分析发现,CsPP2B15启动子含有许多与逆境和激素有关的顺式作用元件。进一步构建了CsPP2B15启动子控制GUS报告基因的植物表达载体,转化枳[Poncirus trifoliata（L.）Raf.]上胚轴。GUS组织化学染色和GUS酶活性测定均表明,CsPP2B15启动子具有较强的韧皮部组织特异性。     

土霉素处理对Valencia夏橙中淀粉及相关基因表达的影响

黄龙病(Huanglongbing,HLB)会造成柑橘韧皮部坏死堵塞,导致光合同化物运输不畅,淀粉大量积累。在感染HLB的4年生Valencia夏橙病株上分别注入0.1和0.2 g·株~(-1)土霉素(Oxytetracycline,OTC),90 d后运用qPCR检测,病株中HLB病原菌(Candidatus Liberibacter asiaticus,Las)含量均明显降低,且0.2和0.1 g·株~(-1) OTC处理的效果相当。I2/KI显色及LM观测表明,0.2 g·株~(-1) OTC处理后植株的淀粉含量从注射前的18.58μg·mm~(-2)减少至90 d的5.24μg·mm~(-2),而0.1 g·株~(-1)的处理90 d仅降至11.88μg·mm~(-2)。高效液相色谱(HPLC)检测结果表明,注射后90 d内,试验用浓度0.2 g·株~(-1) OTC在植株体内可降解至200μg·kg~(-1)以下。基因表达结果表明,注射0.2 g·株~(-1) OTC后30和90 d,淀粉合成及分解相关基因表达量均下降,其中淀粉合成相关基因AGPase表达量下降最显著,这与OTC注射后30和90 d叶片内淀粉含量下降结果一致。     

柑橘响应黄龙病菌侵染的NAC基因的克隆及表达分析

挖掘柑橘抗黄龙病（Huanglongbing,HLB）基因是抗病育种的基础和关键。以感染黄龙病菌亚洲种Candidatus Liberibacter asiaticus(CLas)早期（2个月）锦橙根和叶片中脉比较转录组数据为基础，筛选到9个响应柑橘黄龙病侵染诱导的NAC基因，从中选3个差异表达水平较高的基因克隆，分别命名为Cs NAC21/22、Cs NAC68和Cs NAC78。生物信息分析表明3个基因均符合NAC基因家族的特征；烟草亚细胞定位结果表明，Cs NAC68定位在细胞核，Cs NAC21/22和Cs NAC78定位在细胞核和细胞质。实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分析表明，3个候选基因在易感HLB的锦橙、耐病的马蜂柑和高耐病的九里香的组织和病原菌诱导表达特征呈现明显差异。以健康植株为对照，Cs NAC68和Cs NAC78主要在锦橙的根中响应CLas感染，显著上调表达，Cs NAC68在九里香叶肉和马蜂柑根中响应CLas感染，显著上调表达；Cs NAC21/22主要在锦橙根和马蜂柑叶肉中显著下调表达。以‘锦橙’叶片为试材通过q RT-PCR分析候选基因响应SA、J...     

梨树主要病害的发生与防治

梨树病害种类较多，但发生普遍，比较严重的主要有：梨黑星病、轮纹病（包括干腐病）和腐烂病。一、梨黑星病在我国各梨产区均有发生，可引起早期落叶，削弱树势，被害果形成黑斑，甚至畸形龟裂，降低产量和品质。（一）症状可为害芽、新梢、花序、叶片和果实等部位。芽被害鳞片茸毛较多，表面生出霉层，鳞片开裂；被害新梢和花序基部先呈淡黄色斑，后长出黑霉，常引起花序枯萎。叶片发病初期，叶背主脉两侧、叶柄上也是先产生不规则形淡黄色斑，几天后生出黑色霉状物，即是病原菌的分生孢子梗和分生孢子。（二）病原菌是真菌中的子囊菌。分…     

柑橘中黄龙病菌效应子SDE70的表达特征及寄主互作蛋白解析

柑橘黄龙病菌主要致病种亚洲种（‘Candidatus Liberibacter asiaticus’，Las）具有完整的Sec依赖型分泌系统，可分泌致病因子（效应子）作用于寄主靶标蛋白或基因，调控寄主的抗（感）病反应。为了研究黄龙病菌Sec依赖型效应子在柑橘中的致病机理及其寄主靶标基因，本研究中从感病‘锦橙’中克隆了Las病原菌Sec依赖型效应子基因SDE70（CLIBASIA_02470）。生物信息分析显示，SDE70蛋白全长132个氨基酸，N端20个氨基酸为典型信号肽。大肠杆菌碱性磷酸酶活性分析显示，该信号肽具有胞外分泌功能。亚细胞定位显示，SDE70::GFP融合蛋白在洋葱细胞质和细胞核中积累。定量PCR分析发现，耐黄龙病酸柚显症叶脉中SDE70表达量显著低于未显症叶脉，相反，易感黄龙病‘锦橙’显症叶脉中表达显著高于未显症叶脉；‘锦橙’根中SDE70表达量显著高于叶脉，而幼叶叶脉中显著低于老叶。SDE70在不同品种不同症状发育时期以及不同组织中表达差异显著。利用酵母双杂交试验筛选获得26个与SDE70互作的柑橘蛋白。GO富集分析表明，42.3%的蛋白质与细胞内生物合成过程有关；65.4%的靶标蛋白位于细胞质或质膜上；34.6%的靶标蛋白具有核糖核苷酸结合的分子功能。进一步酵母点对点杂交试验验证3个与SDE70效应子强相互作用的靶标蛋白（CsTRAPP、CsARF、CsRub1），其主要参与植物囊泡转运、类泛素化等过程，暗示SDE70效应子极有可能调控柑橘信号转导和胞质运输途径影响寄主抗（感）病反应。     

农药使用指南（八）——胡萝卜黑腐病的防治

胡萝卜黑腐病是南根生交链孢（Alternaria radicina）引起的真菌性病害,全世界各胡萝卜种植区均有发生。我同山西、河北、内蒙古、安徽、福建、浙江、甘肃、台湾等地胡萝卜种植区均有该病害发生,近几年发生程度日趋严重。病原菌在胡萝卜各生长阶段均可侵染。苗期侵染可导致未出土胡萝卜幼苗或苗期幼苗猝倒;成株老叶易感病,发病时首先在叶柄上形成黑色斑点,后扩展到叶梢,导致整片叶枯死,发病严重时扩展到胡萝卜根冠部,形成一个黑色腐烂环（即黑冠）;贮藏期胡萝卜侵染后会出现干燥的黑色内陷病灶,在温暖潮湿贮存条件下,病原菌在胡萝卜间迅速蔓延。     

农药使用指南（八） ———胡萝卜黑腐病的防治

胡萝卜黑腐病是由根生交链孢（Alternaria radicina）引起的真菌性病害，全世界各胡萝卜种植区均有发生。我国山西、河北、内蒙古、安徽、福建、浙江、甘肃、台湾等地胡萝卜种植区均有该病害发生，近几年发生程度日趋严重。病原菌在胡萝卜各生长阶段均可侵染。苗期侵染可导致未出土胡萝卜幼苗或苗期幼苗猝倒；成株老叶易感病，发病时首先在叶柄上形成黑色斑点，后扩展到叶梢，导致整片叶枯死，发病严重时扩展到胡萝卜根冠部，形成一个黑色腐烂环（即黑冠）；贮藏期胡萝卜侵染后会出现干燥的黑色内陷病灶，在温暖潮湿贮存条件下，病原菌在胡萝卜间迅速蔓延。     

柑橘MAPK基因的生物信息及其响应溃疡病菌侵染的表达分析

为挖掘柑橘溃疡病抗性关键基因，对柑橘促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）基因家族进行注释和功能域分析，明确了CsMPK1、CsMPK3、CsMPK4、CsMPK6和CsMPK19的组织表达特异性和在抗病品种‘金弹’（Fortunella japonica Swingle）和感病品种‘晚锦橙’（Citrus sinensis Osbeck）中受病原菌（Xanthomonas citri subsp. citri，Xcc）诱导的表达情况；并对CsMPK19进行了生物信息分析。共注释出12个柑橘MAPK基因家族成员，根据系统发育树将其分为3个亚类，均含有促分裂原活化蛋白激酶（Pkinase）功能结构域。其中CsMPK1、CsMPK3、CsMPK4-1和CsMPK6在果实中表达水平较高，CsMPK19在叶片中表达量相对较高。CsMPK1的表达在溃疡病抗（感）品种中均受病原菌强烈诱导，且在感病品种中上调的幅度高于抗病品种；CsMPK3 和CsMPK6仅在感病品种中病原菌处理早期有较强烈的响应；CsMPK4-1和CsMPK4-2的表达在感病品种中受病原菌诱导上调，而在抗病品种中病原菌处理后低于水处理对照；CsMPK19的表达在抗（感）品种中均受病原菌强烈诱导，且在抗病品种中上调幅度更大。克隆了CsMPK19，其序列全长为1 824 bp，编码607个氨基酸，分子量为69 174.36 D，为非分泌性蛋白，其25 ~ 316 aa为典型的Pkinase功能域。晚锦橙和金弹MPK19启动子的顺式作用元件存在较大差异。结果表明柑橘MAPK基因强烈响应溃疡病菌侵染，推测CsMPK19在溃疡病抗性调节中有潜在应用价值。     

每州金柚黄龙病发生情况及防控对策建议

梅州金柚（沙田柚）是梅州农业的名片，全市现有栽培面积1．83万hm^2,总产26．99万t，金柚生产已成为梅州市农业主导产业和农民脱贫致富奔小康的重要途径。但是，随着金柚生产的发展，近年来梅州市金柚主产区陆续发生了柑橘黄龙病为害，并存在进一步蔓延扩散的可能，对金柚产业的发展和稳定造成严重的威胁。为进一步摸清梅州金柚黄龙病的发生分布和为害情况，确保梅州市金柚产业持续健康安全发展，2010年冬2011年春梅州市集中力量开展了金柚黄龙病普查工作，笔者根据普查结果进行研究与分析，提出了梅州金柚黄龙病防控对策建议。     

小西瓜工厂化嫁接育苗多效唑化控试验

在育苗气温15~30℃条件下,利用300mg/kg多效唑,采用种芽化控法,分别对接穗小西瓜和砧木水瓜进行化控,适度增加胚轴粗度,培养健壮接穗、砧木并进行嫁接育苗。结果表明,3人1小组嫁接速度由490株/h提高到700株/h,嫁接成活率由89%提高到98%,小西瓜嫁接苗生长健壮,叶色深绿、肥厚,叶柄短于叶长,根系粗壮、根毛发达,90%以上育苗基质被根毛包裹,综合抗病、抗逆性较强。但嫁接后真叶出现相对较晚,达到3叶1心苗龄需30~35d。     

葡萄病毒A实时荧光定量RT-PCR检测技术的建立及应用

根据文献报道和GenBank已登录序列设计引物建立了葡萄病毒A（Grapevine virus A,GVA）SYBR GreenⅠ染料法实时荧光定量RT-PCR检测技术体系。该技术标准曲线循环阈值与模板浓度呈现良好线性关系,扩增效率为99.2%,决定系数为0.999,可特异性检测GVA,灵敏度高（达常规RT-PCR的100倍）,重复性好。对不同季节、不同品种以及不同部位葡萄样品（嫩叶、嫩叶柄、老叶、老叶柄、卷须和休眠枝条）中GVA的检出率普遍高于常规RT-PCR。不同季节间比较,对秋、冬季样品检测效果最好,除嫩叶外其余部位检出率均达100%,春夏季检出率为10% ~ 100%。不同部位间比较,老叶柄和休眠枝条检测效果最好,检出率均达100%,其次为老叶（80% ~ 100%）,其余部位样品检出率为10% ~ 100%。在大量田间样品检测中,休眠枝条样品检测结果与常规RT-PCR一致,而秋季老叶柄样品检出率明显高于常规RT-PCR。     

ToCV和TYLCV侵染番茄对烟粉虱解毒酶的影响

番茄病毒病已成为目前番茄生产最主要的病害之一,造成番茄的大量减产甚至绝收,其中番茄褪绿病毒（tomato chlorosis virus,To CV）和番茄黄化曲叶病毒（tomato yellow leaf curl virus,TYLCV）危害最为严重,二者的复合侵染还会对烟粉虱的取食、获毒以及传毒等行为产生一系列影响,给番茄病毒病的防治造成了很大困难。为了明确在To CV和TYLCV复合侵染条件下,烟粉虱取食带毒番茄对其体内解毒酶以及生理防御反应相关基因变化的影响,以便更好地对烟粉虱进行防治,通过酶活性测定和实时荧光定量PCR技术,研究烟粉虱取食To CV、TYLCV单独侵染及To CV+TYLCV复合侵染番茄48h后其体内解毒酶变化,并以健康番茄作为对照。结果表明,除取食To CV单独侵染番茄的烟粉虱谷胱甘肽S–转移酶（Glutathione S-transferase,GST）和UDP–葡萄糖醛酸转移酶（UDP-glucuronosy-ltransferase,UDPGT）活性较取食健康番茄烟粉虱下降,烟粉虱带毒后GST、羧酸酯酶（Carboxylesterase,Car E）...     

BTH处理网纹甜瓜对两种真菌潜伏侵染率的影响

分别于网纹甜瓜开花前7 d、幼果期（花后14 d）、果实迅速膨大期（花后21 d）和网纹形成期（花后28 d）用100 mg·L^-1 BTH对植株进行1、2、3、4次喷洒,分析BTH处理后幼果期、膨大期、网纹形成期和成熟期果实内链格孢（Alternaria alternata）和镰刀菌（Fusarium sp.）潜伏侵染率的变化。结果表明：采前BTH处理可有效控制甜瓜果实内两种真菌的潜伏侵染。1、2、3、4次处理均降低了两种真菌的潜伏侵染率,2、3、4次处理的效果较好,在成熟期总潜伏侵染率均为对照的23.53 %。网纹形成期是两种真菌潜伏侵染的关键时期。采前BTH处理对潜伏于果实内的两种优势病原菌链格孢和镰刀菌的控制效果存在差异,且对果实顶部、中部的控制效果优于底部。     

辣椒采后病害发生情况

从广东省广州、增城采收辣椒,在常温（25 ℃）贮藏条件下观察辣椒采后病害的发生情况,测定采收时无病害症状的辣椒组织中病菌的潜伏侵染率。结果表明：辣椒采后在25 ℃下贮藏,发生的病害有果腐病（Fusarium sp.）、炭疽病（Colletotrichum gloeosporioides）、软腐病（Erwinia carotovora）、黑斑病（Alternaria alternata）、疫病（Phytophthora capsici）、灰霉病（Botrytis cinerea）,且5 d后开始表现病害症状。其中果腐病、炭疽病、软腐病是辣椒采后的主要病害。辣椒采后病害主要从果柄部位开始发生,向果蒂和果身部位扩展,最后引起整个辣椒果实腐烂。辣椒果柄、果蒂是带有潜伏侵染菌较多的部位,从果柄、果蒂组织中分离出的病菌有炭疽病、链格孢菌、镰刀菌、灰葡萄孢菌和欧氏杆菌,从果身组织中只分离出炭疽菌、链格孢菌和欧氏杆菌。伤口是辣椒采后病害病原菌侵入的主要通道,伤口接种的处理发病率高,无伤口接种的处理不发病。剪除果柄可明显减轻辣椒采后病害的发生,提高辣椒的贮藏效果。     

白萝卜新品种雪玉1号的选育

雪玉1号是以萝卜核-胞质互作雄性不育系803A为母本，以05-6-8-12为父本配制而成的白萝卜一代杂种。生育期75 d（天），植株开展度66.8 cm，叶片长39.9 cm，宽15.08 cm，主脉白绿色，叶绿色，叶柄绿色，叶片长、倒卵形，叶缘缺刻深，叶面稍皱，有叶刺，短而多；肉质根长圆柱形，皮黄绿色，肉白色，肉质根长48.25 cm，横径10.19 cm，表皮光滑；平均单株质量2.54 kg，肉质根质量2.14 kg，高抗软腐病、黄瓜花叶病毒病和花椰菜花叶病毒病，抗霜霉病和芜菁花叶病毒病，群体整齐度高，每667 m2产量6 000 kg左右，适合在东北、华北、西北地区栽培。     

甜橙SWEET2a促进柑橘溃疡病菌侵染

柑橘溃疡病菌（Xanthomonas citri subsp. citri,Xcc）侵染感病种质冰糖橙叶片后，在侵染部位形成典型的火山口凸起症状，但在抗病种质枸橼C-05叶片侵染部位呈现逐渐褐色坏死，未形成溃疡病典型症状。基于前期冰糖橙和枸橼C-05叶片接种Xcc的转录组测序结果，分析鉴定的20个甜橙SWEET受Xcc诱导表达变化，结果显示SWEET2a和SWEET17d在冰糖橙中受Xcc诱导上调表达，SWEET12b在枸橼C-05中受Xcc诱导上调表达；实时荧光定量PCR验证，SWEET2a在冰糖橙叶片中受Xcc诱导高表达而在枸橼C-05叶片中表达变化不显著；SWEET2a在不同柑橘种质同源基因编码的氨基酸序列相似性为94.6%，其启动子顺式作用元件在冰糖橙和枸橼C-05中的种类和数量存在较大差异。冰糖橙和枸橼C-05叶片瞬时过表达结果显示，SWEET2a促进Xcc的繁殖，且拟南芥过表达转基因株系接种毒性菌Pst.DC3000(Pseudomonas syringae tomato DC3000)后，单位叶面积菌含量显著高于野生型。SWEET2a蛋白部分定位于质膜，表明SWEET2a...     

一种新的柑橘采后病害病原的鉴定

从疑似青霉、绿霉症状的甜橙（Citrus sinensis）果实样品中分离得到一株新的致病菌株Pu. XHz。该菌株在PDA培养基上形成白色圆形菌落,产生大量蓝灰色分生孢子,培养后期有液滴渗出;在察氏培养基（Czapek–Dox Medium,CA）上菌落呈烟花绽放状;在察氏酵母膏琼脂培养基（Czapek Yeast Autolysate agar,CYA）上菌落呈同心圆状;在25%甘油硝酸盐琼脂培养基（25% Glycerol nitrate agar,G25N）上白色菌丝体发达,不产生分生孢子。分生孢子大小为（4.48 ~ 8.37）μm ×（2.65 ~ 5.24）μm,大部分为长椭圆形。致病性测定结果表明,在金钱橘、茂谷柑和甜橙果实上接种3 d左右开始出现水渍状病斑并逐渐扩大,接种12 d左右在病斑中央产生许多特征性晶须状霉层（Whisker mold）,为病原菌的孢梗束,其顶端产生大量蓝灰色分生孢子。ITS序列分析表明,Pu. XHz与日本菌株Penicillium ulaiense SU-9分离物同源性为99%,证实了P. ulaiense是导致柑橘果实采后霉状腐烂的病原菌,为进一步研究由其引起的发病规律奠定了基础。     

《中国蔬菜》2011·16“品种选育”彩版介绍

牛早秋1号大白菜 牛早秋1号属早熟秋大白菜一代杂种,生长期约63d（天）。植株直立,株型较紧凑,株高38cm,开展度52cm,外叶半披张,淡绿色,较平展,无刺毛,叶柄白色。     

柑橘轮斑病症状、发病规律及47个柑橘品种的抗性测定

【目的】调查重庆柑橘轮斑病田间症状、发病规律，探究47个柑橘品种对3个省份来源致病菌株的抗性差异。【方法】调查重庆万州柑橘轮斑病田间症状变化和不同情况果园发病时间、发病率及病情指数，采用分离自陕西、湖北、重庆的3个菌株离体接种47个柑橘品种叶片，根据发病率和病斑平均直径评价不同柑橘品种的抗病性。【结果】柑橘轮斑病侵染叶片、枝梢、果实、叶（果）柄、花萼等部位。病斑由内而外为灰白色、棕褐色和深褐色，中央产生“轮纹状”排列的黑色子实体，外缘油渍状，不同柑橘品种和不同生育期叶片病斑有差异；此病1—2月为发病高峰，高海拔区、果园郁闭、树势弱、种植感病品种的果园发病早（12月3日），病情指数均大于其他果园；11—1月，平均高温、平均低温和极端低温越低，发病越重，而2—4月，以上3个气候因子值越高，发病加重；12—4月，雨日、空气湿度和降雨量值越大，发病越重；不同来源菌株对47个品种毒力差异显著（p<0.05）,YLSDP80毒力最强，CGDS2毒力中等，WZSS1毒力相对较弱。24个柑橘品种表现为抗病，尤力克柠檬表现感病，其余22个品种对3个省份的菌株抗性表现不一。【结论】田间症状及其发病规...