交配型基因作为分子标记鉴定蛹虫草退化菌株的核相初步研究

根据蛹虫草(Cordyceps militaris)交配型基因的序列设计3对特异性引物,对收集到的14株蛹虫草正常菌株和退化菌种进行PCR鉴定.结果表明,3株正常菌株含有MAT-HMG和MAT-alpha两类交配型基因,判定为异核体;11株退化菌株仅仅含有MAT-HMG或者MAT-alpha交配型基因,判定为同核体.笔者推测,蛹虫草发生不形成子实体的菌种退化的原因之一是核相发生了改变,即异核体变成了同核体.     

高产虫草菌素蛹虫草菌株的紫外线诱变选育

蛹虫草是重要的药食用真菌。通过对蛹虫草原生质体进行紫外诱变处理，筛选到1株优良的菌株CMM-81。经固体发酵，虫草菌素和腺苷含量分别为0．437％和0．036％，是出发菌株的2倍。菌株CMM-81经连续15代传代培养，虫草菌素和腺苷的含量保持稳定。     

冬虫夏草分离株的分子鉴定及主要活性成分测定

对冬虫夏草分离株进行DNA鉴定，测定其固体培养菌丝体中虫草多糖、腺苷和虫草素。方法采用PCR技术，以rDNA-ITS区为分子指标，对冬虫夏草分离株进行测序和分析；分别用苯酚一硫酸法测定虫草多糖，反向高效液相色谱法测定腺苷和虫草素。结果将所测得的冬虫夏草分离株18S-28SrD-NAITS序列与Genebank数据库进行相似性分析，发现与AB067721（Hirsutella sinensis，日本）完全相同，与AJ309359（Hirsutellasinensis，贵州大学）相比在544位多一个G，从分子水平上证明了该分离株为冬虫夏草的真正无性型一中国被毛孢；菌丝体中虫草多糖、腺苷和虫草素分别为16．81％±0．669％，（342．7±5．20）μg/g、（10.41±1．32）μg/g。     

蛹虫草—猕猴桃保健饮料工艺研究

试验以蛹虫草、猕猴桃为主要原材料,对蛹虫草-猕猴桃保健饮料的生产工艺进行研究,确定出最佳配比。结果表明:蛹虫草汁和猕猴桃汁的混合比例为1∶5,混合汁添加量20%,白砂糖添加量10%,柠檬酸添加量0.1%,稳定剂CMC添加量0.20%,饮料外观形态、色泽、口感等均为最佳。饮料适合各类人群,并具有保健功能,是具有开发前景的一种新型的天然保健饮品。     

六种蛹虫草与其它食药用菌中的纤溶酶活性比较

采用纤维蛋白平板法对来自辽宁、上海地区的6株蛹虫草(Cordyceps militaris)的纤溶酶活性进行比较,结果表明:不同来源的蛹虫草纤溶酶活性差异较大,最高的比活力可达134.8IU/mg(鲜LN-2),最低的比活力仅有3.4IU/mg(鲜LN-3);经PCR鉴定首次发现,就纤溶酶活性而言,双交配型的蛹虫草明显高于单交配型的蛹虫草;本研究还进一步比较分析了蛹虫草(C.militaris)与秀珍菇(Pleurotus geesteranus)等11种食药用菌的纤溶酶活性;结果表明,所测定的11种食药用菌中,纤溶酶比活力最高的是冬虫夏草(C.sinensis)(149.5IU/mg),其次是蛹虫草(65.6IU/mg)和秀珍菇(30.6IU/mg),而双孢蘑菇(Agaricus bisporus)、桑黄(Phellinus spp.)、灵芝(Ganoderma lucidum)和银耳(Tremella fuciformis)的子实体中未检测到纤溶酶。     

蛹虫草真菌性病原菌分离培养初报

研究蛹虫草栽培中真菌性病原菌,为蛹虫草的病害预防提供依据。利用ITS序列分析方法,结合真菌形态特征,研究蛹虫草栽培过程中导致病害的3种真菌。病原菌株F1与Fungal sp.YX-2,F2与Calcarisporium sp.LB2012-1,F3与Gibberella intermedia AB92的进化距离较小,同源性较高,初步明确分别为同种。真菌性病原菌是影响蛹虫草生长发育、子座产量及经济效益的重要因素。     

蛹虫草一猕猴桃保健饮料工艺研究

试验以蛹虫草、猕猴桃为主要原材料，对蛹虫草一猕猴桃保健饮料的生产工艺进行研究，确定出最佳配比。结果表明蛹虫草汁和猕猴桃汁的混合比例为1：5，混合汁添加量20％，白砂糖添加量10％，柠檬酸添加量0．1％，稳定剂CMC添加量0．20％，饮料外观形态、色泽、口感等均为最佳。饮料适合各类人群，并具有保健功能，是具有开发前景的一种新型的天然保健饮品。     

产不同色素古尼拟青霉菌株功效成分分析

为比较产不同色素古尼拟青霉菌株菌丝体功效成分的差异，本研究对产不同色素古尼拟青霉菌株及对应古尼虫草样品进行试验分析。观察其菌落形态和菌落颜色；用紫外分光光度法测定多糖和D-甘露醇含量；用HPLC法测定虫草素、腺苷、肌苷、胸苷、鸟苷、尿苷6种核苷类成分含量。结果显示，菌落背面绿色的菌株pgjt03，腺苷含量是古尼虫草样品YHCGGB0145的6倍，且虫草素、胸苷、鸟苷、尿苷含量也均达到最高，与它对应的古尼虫草样品YH—CGJT0148虫草素、腺苷、鸟苷、尿苷含量均高于其它古尼虫草；而菌落背面浅灰色的菌株pNt01，核苷类成分含量均低于其他菌株。说明古尼拟青霉产色素与功效成分之间有一定的相关性，古尼拟青霉所产色素颜色越深，功效成分的含量相对越高。通过该研究指出，菌落颜色可作为筛选古尼拟青霉菌株高产功效成分的标志之一，且菌落背面绿色的菌株pgit03，性状优良，生长较快，可作为潜在的生产菌株。     

人工栽培蛹虫草真菌病害的分离与鉴定

以污染的蛹虫草栽培料为试材,采用划线分离法分离病原真菌,并对其进行形态学观察及ITS序列系统发育分析,以期鉴定人工栽培蛹虫草栽培料中污染真菌的种类。结果表明:从蛹虫草栽培料中分离到3株真菌菌株,P1和P5分离物与GenBank中多株深绿木霉分离物同源性最高,均在99.6%以上,结合形态学特征,鉴定P1和P5分离物为深绿木霉。分离物P3和扩展青霉同源性最高,结合形态特征,鉴定P3为扩展青霉。该研究结果为人工栽培蛹虫草真菌病害的鉴别与防治提供了参考依据。     

九州虫草的研究进展

九州虫草作为一种新的虫草真菌资源,具有重要的研究开发价值.从九州虫草的生物学特性、化学成分、药用价值等方面对九州虫草的研究进展进行了综述.     

添加氧化铝对灰树花菌丝体生长及多糖产量的影响

考察添加不同浓度的氧化铝(粒径为200~300目)对灰树花(Grifola frondosa)发酵菌丝体生长及多糖(胞内和胞外粗多糖)产量的影响。结果表明,在试验添加范围内,灰树花菌球直径随氧化铝添加浓度的增加而显著变小,当添加氧化铝浓度为20 g/L时,游离菌丝体明显增多,且菌球主要表现为S型(D<0.5 cm,D：菌体当量直径,与对象具有相等面积的圆形的直径),其中L(D≥1.5 cm)、M(0.5 cm≤ D<1.5 cm)和 S 型菌丝体的比例分别为4.9%、24.3%和70.8%;添加3 g/L氧化铝时灰树花菌丝体生物量最高,达到5.81 g/L,比空白组提高了2.7倍;添加20 g/L氧化铝时灰树花胞外多糖产量达到最大,为8.46 g/L,为空白组的1.7倍左右,而菌丝体多糖产量以添加0.1 g/L氧化铝时最高,为65.6 mg/g。     

钙、铁和锰对两种灵芝液体培养菌丝体生物量的影响

探讨了水中不同含量的钙、铁、锰离子对赤芝(Ganoderma lucidum)和松杉灵芝(G.tsugae)液体培养下菌丝体生物量的影响.结果表明,在200～1200 mg/L时随着Ca浓度增加赤芝生物量逐渐减少,而松杉灵芝在Ca浓度为200 mg/mL时生物量最高,在600～1200 mg/mL低于不添加Ca的处理;在Fe浓度为200～600 mg/L及200～800 mg/L时,赤芝和松杉灵芝的生物量高于不添加的处理,但当浓度超过相应范围时,这两种灵芝的生物量显著降低;Mn浓度为200或400 mg/L时,两种灵芝的生物量较高,当浓度超过800 mg/L时低于不添加的处理.     

姬松茸菌株的胞外酶活性及与产量的关系

研究了姬松茸(Agaricus blazei Murrill)菌株(出发菌株AbM9,AbM9经离子束注入选育的菌株AbML2、AbML7和AbML11,及AbM9单孢分离所得菌株AbMD3)在菌丝生长期、菇蕾期、一潮菇期和二潮菇期培养料的胞外羧甲基纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶活性的动态变化及与产量的关系。试验结果表明,姬松茸菌株AbML11产量最高,与AbML2、AbMD3、AbML7和AbM9的差异达极显著水平,但AbML11的产量与菌丝长速相关性不显著;5个供试菌株的淀粉酶活性在菌丝生长期均最高,与菌丝长速的相关性不显著;蛋白酶活性在菇蕾期最高,与产量的相关性不显著;羧甲基纤维素酶活性在一潮菇期最高,与产量呈正相关,相关系数为0.928,达显著水平。本研究可为姬松茸高产菌株的筛选提供一定的理论依据。     

灵芝多糖液体发酵条件优化

从一系列灵芝(Ganoderma sp.)菌种中筛选出多糖产量高、生长快的紫灵芝菌株(G.japoncium),研究了不同氮源、碳源及金属离子对紫灵芝产多糖的影响。结果表明,以2%的蔗糖为碳源,0.2%的豆饼粉为氮源,0.2%的FeSO4为培养基可获得较高多糖。发酵罐放大实验表明,采用同样的培养基,每100mL发酵液胞外粗多糖含量可高达181.7mg,每100mL发酵液菌丝体含量可高达151.0mg,发酵过程中pH值的变化比较缓和,相对摇瓶生长,发酵生产可获得更多的灵芝多糖。     

八种食用菌水溶性粗多糖的β-葡聚糖含量与体外免疫活性研究

采用水提醇沉法提取了8种不同食用菌子实体的水溶性粗多糖,测定了样品中多糖、葡聚糖和β-葡聚糖的含量,结果表明,刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)、毛头鬼伞(Coprinus comatus)、香菇(Lentinula edodes)和桑黄(Phellinus baumii)粗多糖中的多糖含量较高,香菇和姬松茸(Agaricus blazei)粗多糖中葡聚糖含量较高;猴头菌(Hericium erinaceus)、刺芹侧耳、香菇和姬松茸粗多糖中β-葡聚糖含量较高。采用截留分子量8000～12000透析袋纯化8种食用菌粗多糖,将纯化产物用于体外刺激巨噬细胞RAW264.7释放NO实验和脾淋巴细胞增殖实验,8种样品均能刺激巨噬细胞释放NO,其中香菇、刺芹侧耳和毛头鬼伞粗多糖在低浓度(200μg/mL)时,刺激巨噬细胞释放NO量即可达到40μmol/L以上,高浓度(500μg/mL)时高于阳性对照;体外脾淋巴细胞增殖实验结果显示,8种供试样品均能刺激脾淋巴细胞增殖,以香菇、刺芹侧耳和猴头菌粗多糖效果较好。实验结果证明这8种食用菌粗多糖均具有体外免疫活性。     

木屑栽培香菇胞外纤维素酶和磷酸二酯酶的活性变化

不同木屑培养料栽培香菇菌丝生长盛期，原基形成期和子体成熟期胞外ＣＸ酶和Ｃ２酶的活性是逐渐增强的，以确保碳素营养的充分供应。不同木屑培养料的成分只影响酶活性的相对大小，而不影响酶活性的变化规律。纤维素酶活性对子实体形成不起决定作用。     

桦剥管孔菌液体发酵环境条件的研究

以发酵液的多糖含量为考核指标,通过单因素试验和正交试验,对桦剥管孔菌(Piptoporus betulinus)液体发酵的接种量、培养基装量及培养基初始pH进行优化.结果表明,优化的桦剥管孔菌培养条件为:接种量2.5％、500mL三角瓶装200mL液体发酵培养基、培养基初始pH自然条件下,发酵6d时,发酵液中多糖含量最高(28.75％).     

灵芝细胞中异源表达透明颤菌血红蛋白基因提高胞外多糖的产量

在灵芝(Ganoderma lingzhi)中异源表达透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla hemoglobin,VHb)基因,采用一氧化碳差异波谱分析的方法检测转基因菌株的生物活性,并对野生型菌株和工程菌株进行发酵,通过荧光定量PCR对灵芝多糖生物合成途径上的葡萄糖磷酸变位酶(α-phosphoglucomutase,PGM)、尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(uridinediphosphate glucose pyrophosphorylase,UGP)和β-1,3-葡聚糖合酶(β-1,3-glucan synthase,GLS)3个基因的转录水平进行分析。研究表明:透明颤菌血红蛋白基因(Vitreoscilla hemoglobin gene,vgb)在灵芝中能够成功表达,并且具有生物活性;工程菌株中胞外多糖的最高产量达0.83g/L,比野生型菌株提高了88.6%;与野生型菌株相比,工程菌株中多糖生物合成途径上PGM、UGP和GLS基因的相对表达量分别是1.52、1.55和3.85。异源表达透明颤菌血红蛋白基因是提高灵芝胞外多糖产量的一种有效方法。     

硝酸钙对番茄氯化钠胁迫下的缓解效应

为探索减轻番茄遭受盐胁迫的影响,研究了硝酸钙对番茄遭受氯化钠胁迫的缓解作用。结果表明:在氯化钠浓度相同时,不同浓度的硝酸钙对盐胁迫的缓解效应差异较小。0.05%的硝酸钙就可有效增强番茄的SOD活性,缓解氯化钠对番茄种子萌发过程的干扰,保障番茄根系的细胞分裂与生长,同时提高幼苗的叶绿素含量,促进叶片光合作用过程,保证番茄幼苗的细胞生长与物质积累,使番茄对氯化钠胁迫的可适应性从0.3%提高至1.0%。     

猕猴桃果实成熟前补钙对果实含钙量的影响

猕猴桃果实成熟前用喷叶法和喷果法补钙，可显著提高果实中的钙含量。喷叶较喷果效果好。用Ca(NO3)2喷叶，比用CaCl2处理效果好，差异显著。而果实对CaCl2和Ca(NO3)2的吸收选择性差异不显著。经补钙处理的果实采后进行贮藏效果观察发现：用Ca(NO3)2喷叶处理的果实贮藏性较好，用其喷果处理次之；用CaCl2喷果和喷叶处理的果实贮至28天软果率均达到90％。