银杏主要栽培品种的分子鉴别

以１５个银杏主要栽培品种的种子胚乳为材料，利用筛选出来的１２种具多态型的引物进行ＲＡＰＤ分析．结果表明，１５个品种之间在分子水平上存在很大差异，并确定了这些品种的ＲＡＰＤ标记基因型．以标记基因型为依据，可以利用单倍体种子胚乳和二倍体叶片组织在ＤＮＡ水平上对这些品种进行有效的鉴别．依据各个品种的标记基因型对这些品种进行分子聚类的结果与传统的三大类分类法非常吻合．     

薄壳山核桃品种亲缘关系分析与指纹图谱构建

[目的 ]基于荧光SSR标记结合高通量毛细管电泳技术,建立一种快速、高效、稳定、准确的薄壳山核桃基因分型体系,用以分析各品种间亲缘关系并构建指纹图谱,旨在为薄壳山核桃品种鉴定与新品种保护提供理论依据,也为薄壳山核桃种质资源评价、品种选育与推广提供有益参考。[方法 ]选取薄壳山核桃及其近缘种54对SSR引物进行初筛,最终确定10对标记合成荧光引物用于后续分析。基于毛细管电泳技术对25个薄壳山核桃品种进行基因分型,利用软件统计位点数据并计算各个位点的等位基因数(A)和多态信息含量(PIC)。利用SSR标记间的相互组合构建薄壳山核桃不同品种的指纹图谱。通过等位片段的转化对薄壳山核桃品种进行聚类,并分析其亲缘关系。[结果 ]10对荧光SSR标记共扩增出68条等位片段,平均为6.8个;位点Cc19最多,有12个等位基因,位点BFU-Jr19最少,有3个等位基因。多态信息含量(PIC)变化范围为0.291 0～0.843 5(平均为0.588 3)。优选的4对核心引物Cc19、PM-GA31、PM-CIN4和PM-GA41组合能完全区分25个薄壳山核桃品种。25个品种遗传相似系数在0.62～0.99之间,并聚类成2个大的类群,部分亲缘关系较近的品种聚类在一起,部分品种聚类不能与遗传背景完全对应。[结论 ]与传统的显性标记及聚丙烯酰胺凝胶电泳分型技术相比,荧光SSR标记结合毛细管电泳技术构建薄壳山核桃品种指纹图谱切实可行,通量大且速度快,结果稳定可靠,通过标记组合可有效的对不同品种进行区分。在品种亲缘关系分析中,建议增加杂交亲本数量,并在全基因组范围内选取一定数量效率更高的标记,以便最大程度地揭示薄壳山核桃品种间亲缘关系的真实水平。     

银杏16个主要栽培品种的分子鉴别

以16个银杏栽培品种的单倍体胚乳DNA为材料,用筛选出了高效引物进行RAPD分析,确定了各品种的标记基因型.在此基础上,可利用单倍体种子胚乳或二倍体叶片等材料实现对银杏无性系品种的有效分子鉴别,为银杏的良种鉴别、保护和登录提供了科学依据.     

马尾松实生种子园F1代的RAPD分子鉴别

为了筛选出鉴定马尾松优良杂种F1代的RAPD特征标记,从DNA水平上区分杂交子代,以从23个马尾松实生种子园F1子代嫩叶中抽提的DNA作为试验材料,采用RAPD分子标记技术检验DNA序列的多态性。从99条引物中筛选出5条适合马尾松F1代RAPD扩增且具有多态性的引物S1026、S1110、S1040、S1180、S1172。利用这5条引物,采用RAPD分子标记技术,对23个F1子代进行了标记基因型的研究,得到了27个标记位点,确立了各样品的标记基因型,并在此基础上进行了马尾松子代的分子分类研究。     

美国薄壳山核桃育苗技术

美国薄壳山核桃[Carya illinoe nsis（Wangenh．）K．Koch]又名美国山核桃、长山核桃，为胡桃科山核桃属落叶大乔木，树高可达55m，胸径2．5m。该品种原产于美国和墨西哥北部北纬25°～40°的区域，但以北纬30°～35°地区生长最好。现分布于世界5个洲的20多个国家和地区，包括美国、墨西哥、意大利、法国、以色列、日本、中国等地。     

7个桉树杂交亲本RAPD位点多态性和杂合性的研究

利用RAPD分子标记技术对桉树杂交亲本的RAPD位点多态性和杂合性进行了比较研究.研究材料包括不同起源的3个尾叶桉母本和4个细叶桉父本及其杂交产生的5个全同胞家系,每家系10株子代.RAPD为显性标记,其检测一个杂交群体中分离位点的概率可以用分离位点至少在一个个体中出现的概率来表示,即1-(1/2)n-1(Aa×aa或aa×Aa)或1-(3/4)n-1(Aa×Aa)(n为群体内个体数),则利用10个个体的杂交群体,其概率分别为99.8%和92.5%,检测的有效性较高.各样品RAPD扩增结果统计中,以1代表一条谱带出现,以0代表不出现.9个随机引物共扩增出58条谱带,亲本间呈多态性的谱带42条,占72.4%,多态性较高.利用亲本的RAPD数据矩阵,计算了亲本间的遗传距离.根据亲本出现的谱带在子代中是否分离判断该位点是否为杂合位点,如果某谱带出现于亲本且在子代中分离,则亲本在该位点上的基因型为Aa,即杂合位点,从而统计出不同亲本的杂合位点数.以亲本的杂合位点数占其总位点数的百分比表示亲本的杂合性,检测各亲本的杂合性水平.7个亲本的杂合性平均为28.0%,杂合性较高.但不同亲本的杂合性有差异,介于16.2%和39.5%之间.并且,同一无性系在不同的家系中检测到的杂合位点数和计算的杂合性有差异,这主要是由于以下两个原因;一是RAPD为显性标记技术,不能有效探测样品本身的杂合位点,因此当另一亲本在该位点上基因型为AA时,则亲本的基因型即使为Aa,子代在该位点上的RAPD谱带也没有分离;二是10个个体的群体偏小,有些实际分离的位点需要更大的群体才能检测到(尤其是偏分离的位点).林木中,常用F1谱系和显性标记进行遗传连锁图谱构建,相应的作图策略为拟测交策略(Pseudo-testcross strategy),即可用于图谱构建的标记为只出现于一个亲本、而在子代中按1∶1分离的标记,类似于测交的分离方式.因此,亲本的较高杂合性表明其杂交时有大量的拟测交位点出现,这种位点在子代中的分离可以用显性标记有效检测.所以,本研究中亲本杂合性均较高的家系可以用作遗传图谱构建的材料(合适大小的群体,如100个以上的子代),这对增加图谱的标记数量和提高作图的效率具有重要意义.     

美国山核桃群体遗传多样性的RAPD分析

运用随机扩增多态性DNA（RAPD）标记技术，采用Operon公司的10种随机引物，以采自美国东南部、北部、西部和我国江苏、浙江、湖北、湖南、云南等地的9个美国山核桃栽培群体45个单株的种子为材料，检测出多态位点42个。以这些多态位点为依据，计算了估测了多态性位点百分比、Shannon表型多样度指数、Virk群体内遗传距离和Nei氏群体间遗传距离，并用它们作为参数进行群体遗传多样性的RAPD分析。结果表明，参试的美国山核桃品种群体遗传变异明显，且群体间差异大于群体内差异，我国引种的群体遗传差异大于原产地美国的群体遗传差异。     

3个美国山核桃优良品种的生物学特性调查

在美国山核桃试验示范基地漾濞研究站,对云星15、云光11、云早丰10三个美国山核桃优良品种的生物学特性进行了调查测定。依据观测结果,系统而详尽地总结出3个品种的适生环境,树体特征,生长结实习性、果实的性状及其发育状况,物候期等特性,以及这些特性在品种间的主要差别,为正确掌握此3个美国山核桃优良品种的特性进行规模化栽培提供了理论依据。     

马兰种质遗传多样性的研究

为了解马兰遗传多样性，提高配制马兰杂交组合及品种选育的目的性，利用RAPD分子标记对丽水市10个马兰种质遗传多样性进行研究。试验通过优化马兰DNA提取方法，建立马兰RAPD反应体系，筛选出26个RAPD引物，扩增出146个条带，其中多态位点为109个，多态性比率为74．66％。依据RAPD标记数据，建立遗传距离和遗传相似系数矩阵，进行聚类分析，构建了遗传关系树状图。结果表明这10个供试材料之间的遗传距离都比较远，可以作为育种的亲本材料。     

云南核桃品种遗传多样性的RAPD和ISSR标记研究

利用RAPD和ISSR分子标记技术对11份云南核桃(Juglans silillata Dode)品种进行了遗传多样性研究。研究结果表明,筛选出的8条RAPD和8条ISSR引物分别产生86和102条扩增带,其中多态性条带分别为53和62条,分别占总数的61.63%和60.78%。用POPGENE对两种标记方法的遗传多样性进行计算,有效等位基因数分别为1.3552和1.3707,基因多样性为0.2110和0.2143,Shannon信息指数为0.318 8和0.3216。以Nei氏遗传距离矩阵按UPGMA方法聚类分析结果RAPD和ISSR标记的遗传距离分别为0.0355~0.4113和0.1423~0.4011,平均值各为0.2288和0.2338,以上数据表明分析品种具有比较丰富的遗传变异,同时也说明尽管Mantel相关性检测两种标记方法相关性较低(r=0.543 9,P<0.05),但都可以有效地揭示核桃品种的遗传多样性状况。     

利用ISSR DNA标记鉴定主要银杏栽培品种

银杏 (Ginkgobiloba)是我国特有树种 ,我国劳动人民自古就有栽植银杏的习惯。在长期栽培过程中 ,已逐渐形成了一些农家品种。由于品种间形态差异 (非果期 )较小 ,用常规方法无法鉴别各个品种 ,特别是早期(苗期 )鉴定。 2 0世纪 90年代以来 ,DNA分子标记技术的不断发展和完善 ,为品种鉴定提供了新的技术手段 ,如RAPD、AFLP、ISSR、SSR等。这些标记也逐步被用于植物种或品种的鉴定研究 ,如RAPD标记鉴定桂花 (Osmanthusfragrans)品种 (赵小兰等 ,1999)、AFLP标记鉴定苹果 (Maluspumila)品种 (祝军等 ,2 0 0 0 )和美洲黑杨 (Populus…     

核桃早实基因的SCAR标记

根据与核桃早实性状连锁的RAPD标记OPB-08958序列,设计SEA-F/SEA-R和SEB-F/SEB-R2对SCAR引物。在亲本、杂交后代和栽培品种(系)中的检测结果表明:SEA-F/SEA-R引物对在早实亲本‘绿园’中能稳定扩增出SCAR-SEA958特异标记;在‘绿园’ב绿丰’杂交F1后代群体中,SCAR-SEA958标记与核桃早实性状共分离,与核桃早实性状间的遗传距离为1.99cM;用晚实优系‘T-12’和栽培品种‘元丰’及‘T-12’ב元丰’杂交F1后代,检测SCAR-SEA958标记的分离情况,SCAR-SEA958与核桃早实性状共分离;在9个核桃栽培品种(系)中,SCAR-SEA958在8个供试品种的7个早实品种上出现,在1个早实品种‘鲁光’和1个晚实优系‘T-12’上没有扩增出条带。SCAR-SEA958标记在不同遗传背景下有较高的稳定性。     

切花月季芽变品种的分子标记与鉴别研究

现代月季的基因型高度杂合，目的基因的定位如同大海捞针，形态指标模棱两可的描述比比皆是。为此，特别收集了组别17个，品种45个及相对的芽变品种进行随机增护多态DNA（Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD）基因分析。结果表明：11个经筛选的人工全盛随机引物（10－base）共增扩出基因位点143个，其中多态性位点93个，平均多型性比率高达66.0％；切花月季品种与品种之间，特异性RAPD图带清晰稳定，极易识别；由同一品种变异而来的芽变品种之间，特异性位点极少，相似性遗传距离非常接近，最小为0.8607，最大为1；幼叶DNA双步CTAB提取法有助于提高基因指纹图谱的重现性。这为表型性状较为相近的切花月季芽变品种的分子鉴别提供了可靠的技术手段，也为转基因品种的育成奠定了基础。     

分子标记在林业辅助选择育种中的应用

本文主要阐述分子标记在林木辅助选择育种中的应用。利用多种分子标记（ＲＡＰＤ，ＲＦＬＰ，ＡＦＬＰ，ＳＴＳ，ＳＳＲ，ＳＴＲ等），可以在林木早期生长阶段对一些性状进行鉴别，构建单种分子标记遗传连锁图谱或几种分子标记共存的混合连锁图谱和对控制数量性状的基因进行定位，对林木群体遗传结构、遗传变异、遗传分化和基因流动进行研究，在基因工程中，能够追踪目的基因行为和对控制质量性状的基因进行鉴别，对单株进行指纹图谱，对种子质量进行监测和对品系、品种和无性系进行鉴定     

利用RAPD分析药用石斛的遗传多样性及亲缘关系

通过对9种药用石斛进行遗传多样性和亲缘关系的分析,为更好地开发利用石斛资源奠定基础。采用RAPD技术,应用NTSYS软件对9种石斛的RAPD-PCR结果进行分析。利用从103条随机引物中筛选出的70条随机引物对供试材料DNA进行随机扩增,共得到520条带,其中多态性带有491条,多态性百分率为94.42%。采用UPGMA类平均法对扩增出的谱带进行遗传聚类分析,得出反映各种间亲缘关系的树状图。在遗传距离（D）=0.44处,可将供试材料分为2类,RAPD对基因组的分析结果与传统分类学的结果差异不大。试验结果表明,RAPD技术可有效地应用于药用石斛的遗传多样性及亲缘关系的研究。     

Molecular identification of sex in Hippophae rhamnoides L. using isozyme and RAPD markers

In many dioecious plants, gender affects economic value, breeding schemes and opportunities for commercial harvests. Hippophae rhamnoides L. is a dioecious plant species in which female genotypes are commercially preferred over male genotypes. Its berries have rich medicinal, nutritional and pharmaceutical properties because of their large amounts of vitamins, essential oils, proteins, fatty acids, free amino acids and flavanoids. Primary limitation for breeding H. rhamnoides L. is its dioecious nature, since gender cannot be identified by traditional methods. Therefore, some reliable and quick methods need to be developed. This communication deals with the development of isozyme and RAPD markers for early sex identification in this dioecious tree. The isozyme analysis was conducted with four enzyme systems, viz. peroxidase, esterase, malate dehydrogenase and catalase. The peroxidase enzyme system produced a female specific sex marker, which successfully differentiated between the staminate and pistillate genotypes of H. rhamnoides L. Thirty five random decamer primers were used in our study and one male sex linked marker was identified. OPD-20 (5′-ACTTCGCCAC-3′) displayed a band at 911 bp that expressed polymorphism between male and female genotypes. The staminate and pistillate genotypes could be distinguished using RAPD marker OPD-20911. These results revealed the immense potential of peroxidase isozyme patterns and RAPD as genetic markers for sex identification in H. rhamnoides L.     

板栗优良品种（无性系）苗木分子标记鉴别研究）

利用ＲＡＰＤ标记对浙江省林木良种审定委员会审定（认定）和通过省级鉴定的８个板栗品种及无性系进行指纹分析，鉴别出各板栗品种（无性系），实验过程中对６８４个随机核苷酸引物进行了重复筛选，经筛选共获得９个稳定的ＲＡＰＤ标记，构建了板栗的ＮＤＡ指纹图谱，经过大量的实验，确定了鉴别板栗优良品种（无性系）的较为理想的程序，获得了ＲＡＰＤ良好的重复性，建立了较完整的板栗ＲＡＰＤ分析的技术体系，用大田苗进行步验证，结果可靠。     

山茶属植物油茶组与金花茶组的分子分类

以山茶属5种油茶组植物和20种金花茶组植物的叶片为材料抽提DNA,利用筛选出的16种多态性随机引物进行PCR扩增,将扩增出来的多态型谱带转化为0-1数据,利用0-1型数据聚类软件进行RAPD聚类分析,将5种油茶组植物分为3大类,20种金花茶组植物分为4大类,分类结果与张宏达分类系统大致相同,并对差异很小的一些物种提出了合并建议.     

A male-specific SCAR DNA marker and sex ratio of seedlings in salak (<Emphasis Type="Italic">Salacca zalacca</Emphasis> var. <Emphasis Type="Italic">zalacca</Emphasis>)

A male-specific SCAR DNA marker was developed using a RAPD DNA marker specific for male plants of Salacca zalacca var. zalacca (salak palm). The marker is 1579 bp long and has a GC content of 38.5 %. Its sequence contains 1 or 2 open reading frames, indicating the marker is probably a coding region. No highly similar sequences were found in a search of the GenBank database. Sexes were identified using the SCAR DNA marker for three kinds of seedlings grouped by the number of seeds per fruit (1, 2 or 3). The sex ratio of female to male did not differ significantly from 1:1 for the three kinds of seedlings, implying that the number of seeds per fruit is not a reliable index to identify the sex of a seedling.