自带介质血红密孔菌NFZH-1的鉴定及其木质素降解特性（英文）

菌株自带介质可提高其漆酶降解木质素能力,因此自带介质高产漆酶菌株的筛选、鉴定对漆酶的商业应用将起到促进作用。从南京山林地区分离出两株血红密孔菌NFZH-1和NFZH-2,并以杂色云芝为对照,研究了两株血红密孔菌发酵产漆酶和木质素降解特性。首先通过形态学特性鉴定了NFZH-1为自带介质血红密孔菌。其次以愈创木酚为反应底物,平板接种菌株,培养5天,NFZH-1颜色圈较菌丝圈大,且颜色最深;经10天固态发酵,NFZH-1所产漆酶酶活高达23 600 U/g,且未检测出木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)。平板显色和固态发酵产酶结果表明自带介质血红密孔菌NFZH-1为漆酶高产菌株。麦草粉经菌株NFZH-1 30天降解,木质素降解率、综纤维素降解率分别达56.7%和36.6%,表明血红密孔菌NFZH-1为选择性高木质素降解活性菌株。     

灵芝属木质素降解高效菌株筛选

The diagnostic methods of extracelluar oxidase mat were used to select lignin-degrading enzymes producers among nineteen Ganoderma lucidum fungal strains. The results showed that the producing laccase activity of G.sp.var. Tianzhi was the highest,followed by that of G.lucidum 10 and G.lucidum 8.The producing lignin peroxidase activity of G.sp.var Tianzhi was the highes, and the producing Manganese peroxidase activity of G.sp.var yuanzhi 6 and G.lucidum G8 were the highest, followed by that of the G.sp.var. Tianzhi and G.lucidum 10. It was found that G.sp.var Tianzhi, G.sp.var. Yuanzhi 6, G.lucidum 8 and G.lucidum 10 showed the highest lignin-degrading enzymes activity.     

竹材木质素降解菌的筛选与鉴定*

竹材木质素的降解一直是制约竹材资源利用的重要影响因素。文章通过对49 份腐烂的竹材样品进行平板划线分离纯化得到74 株真菌,利用PDA- 愈创木酚变色及PDA- 苯胺蓝退色反应,初步筛选出具有木质素降解酶能力的4 株木质素降解菌,通过酶活力测定对初筛得到的4 株木质素降解菌进行复筛,发现FG-22 菌株具有较好木质素降解能力,对FG-22 降解菌株进行形态学和分子生物学鉴定,确定FG-22 为杂色云芝（Trametes versicolor）。     

3种白腐菌木质素降解酶的比较

对3种白腐菌——黄孢原毛平革菌、变色栓菌和木质层孔菌在恒温振荡培养条件下产漆酶、锰过氧化物酶的情况进行比较研究,同时还对此3种菌在培养过程中还原糖的变化作了研究.结果表明:3种白腐菌中变色栓菌产漆酶相对最高,其漆酶酶活最高达到136.5 U/L,产酶最高时间为第8天;而木质层孔菌产锰过氧化物酶相对最高,其最高酶活达到880.2 U/L,产酶最高时间为第8天;同时在培养过程中还原糖含量随培养时间的延长而逐渐降低.     

竹材木质素高效降解菌的分离筛选及鉴定

采用愈创木酚变色、苯胺蓝平板退色和酶活性测定筛选出高效降解竹材木质素的菌株。结果表明:通过腐烂的竹材等34份样品分离纯化出139株真菌;通过0.04%愈创木酚和0.1‰苯胺蓝平板初筛,从分离纯化的139株真菌中筛选出具有产木质素降解酶活性的7株降解菌;7株降解菌经液体产酶培养基复筛得到2株高效产降解木质素酶活的菌株:培养7 d,漆酶、木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶活性分别达72.558、23.769、55.044和34.611、38.781、82.646 U/mL;2株降解菌FG-35和FG-98分别鉴定为革耳菌Panus lecomtei和烟管菌Bjerkandera adustus。     

几种真菌产木质素降解酶的比较研究

通过PDA-Bavendamm平板显色反应、PDA-RB亮蓝显色反应、变色圈试验,获得选择性降解稻草木质素的高酶活菌株:糙皮侧耳、彩绒革盖菌和粗毛栓菌。液态产酶活性试验结果表明,粗毛栓菌是供试菌株中Lac、Mnp、Hcel的高产菌株。粗毛栓菌出现2次产Lac酶高峰,分别为第6天和12天,12天产Lac酶达894U/L;产Mnp酶高峰出现在第6天,达185 U/L;在18天时出现产Hcel酶高峰,产酶达62.7U/L。     

猴头菌菌株CB1的系统发育分析与木质素降解酶的检测

首先对猴头菌菌株CBI进行培养特性观察,表明菌株能产生较多的厚垣孢子;对其ITS序列进行扩增(GenBank登录号为GU584100),并与猴头菌属5个种的17个不同地域菌株进行基于ITS序列的系统发育分析,结果表明菌株CB1与猴头菌同种其他菌株遗传距离较近并聚类在一起.明确该菌株的分类地位后,对其进行木质素降解酶系统的检测,结果表明猴头菌可产生锰过氧化物酶(MnP)和漆酶(laccase),但不产生木质素过氧化物酶(LiP).MnP和漆酶的酶活性变化是有规律的,Mn2是猴头菌产生MnP的必要因子,而漆酶的产生则不受该条件的制约.在含Mn2+的LNAS培养基中加入木屑为底物的条件下,猴头菌MnP最大酶活性为45.56 U·L-1,漆酶最大酶活性为61.85 U·L-1.     

灰树花的系统发育分析和主要木质素降解酶的测定

对灰树花菌株迁西二号进行了ITS序列扩增与测序(GenBank登录号为GU584099),并对灰树花及相关白腐菌进行了基于ITS序列的系统发育分析,结果表明灰树花与Grifola sordulenta (Mont.) Singer等白腐菌的亲缘关系较近。采用LNAS(低氮天冬酰胺-琥珀酸)培养基添加4种不同底物,对菌株迁西二号在25 ℃恒温下静置培养,得到了不同时间内的培养液,用紫外可见分光光度计分别检测了在470 、420 、310 nm处对于2,6-二甲氧基苯酚 (2,6-DMP)、2,2’-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)、3,4-二甲氧基苯甲醇/藜芦醇(VA)的氧化作用后光密度值的变化情况,作为锰过氧化物酶(MnP)、漆酶(Laccase)和木质素过氧化物酶(LiP)产生和活性大小的依据,从而获得了灰树花木质素降解酶系统的主要酶系及其与培养基的成分和酶作用底物的基本关系。结果表明,灰树花可产生MnP和漆酶,但不产生LiP;对比4种成分不同的培养液酶活力测定结果,未添加底物的培养液MnP最大酶活仅为2.96 U·L^-1,漆酶最大酶活仅为4.49 U·L^-1。添加底物木屑和2,6-DMP后MnP最大酶活为8.06 U·L^-1,漆酶最大酶活为9.85 U·L^-1,表明在培养液内添加酶的底物木屑后能轻微地提高两种酶的分泌量。     

一株用于石油污染修复的产漆酶菌种产酶条件优化及性能评价

选取血红密孔菌Pycnoporus coccineus为产漆酶菌种,通过开展单因素产漆酶条件优化研究,明确最佳液体发酵工艺参数,制备出粗酶制剂并进行原油降解性能评价。结果表明:1)漆酶最佳液体发酵工艺参数为初始pH值5～7、初始温度30℃、摇床转速200r/min,接种量1.5%、碳源为羧甲基纤维素钠20.00g/L、氮源为硝酸钠5.00g/L、磷源磷酸氢二钾为2.00g/L、Cu2+浓度为1.00mmol/L、诱导剂为蔥2.00×10-4 mmol/L;复合制剂(粗酶制剂+菌剂)TPHs降解率高于单一制剂(仅投加菌液),环境耐受性、微生物底物作用能力及原油降解速率均显著提升。     

红平菇木质素降解酶系统漆酶、锰过氧化物酶及木质素过氧化物酶的检测

木材白腐菌在分解木质素的过程中会产生非特异性的分解木质素结构的酶系统,这些酶系统主要包括细胞外过氧化物酶[锰过氧化物酶(manganese peroxidase,MnP)、木质素过氧化物酶(lignin peroxidase,LiP)]和细胞外酚氧化酶[漆酶(laccase)].因此,在生物修复方面,白腐菌能够有效地降解废水和土壤中难被降解的多氯联苯、多环芳烃、DDT、染料、炸药和其他氯化物、叠氮化合物等.     

漆酶/介体体系降解单一纸浆树脂模拟物的研究

以松香酸、亚油酸、油酸、β-谷甾醇、甾醇油酸酯分别作为纸浆中单一树脂的模拟物,采用一种产自黄孢原毛平革菌的漆酶对树脂模拟物进行降解,通过对比漆酶/介体体系的降解效率,筛选了该漆酶合适的介体,探讨了漆酶/介体体系对单一树脂模拟物的降解效果,研究了漆酶/介体体系降解亚油酸和油酸的动力学,并对漆酶降解亚油酸的工艺条件进行了优化。研究结果表明:1-羟基苯并三唑(HBT)是较为合适的介体;漆酶/HBT体系对松香酸、亚油酸、油酸、β-谷甾醇、甾醇油酸酯单一树脂模拟物均有较好的降解效果;漆酶/HBT体系处理亚油酸、油酸的米氏常数分别为1.38和1.86mmol/L,表明亚油酸更易与漆酶/HBT体系结合;该漆酶处理亚油酸的最佳工艺条件为酶用量2.0U/mg、1-羟基苯并三唑介体用量7.6mol/g、时间60min、温度50℃、pH值4.0,此条件下亚油酸的降解率为88.9%,当酶用量增加到4.0U/mg或者处理时间延长至120min时,亚油酸的降解率可达到100%。     

Degradation of a nonphenolic β-O-4 lignin model dimer by horseradish peroxidase with 1-hydroxybenzotriazole

Nonphenolic β-O-4 lignin substructure model dimer, 1,3-dihydroxy-2-(2,6-dimethoxyphenoxy)-1-(4-ethoxy-3-methoxyphenyl)propane (I) was degraded by horseradish peroxidase (HRP) in the presence of hydrogen peroxide and 1-hydroxybenztriazole (HBT). 4-Ethoxy-3-methoxybenzoic acid (II), 1-(4-ethoxy-3-methoxyphenyl)-3-hydroxypropanone (III), 2,3-dihydroxy-1-(4-ethoxy-3-methoxyphenyl)-1-formyloxypropane (IV), 2,3-dihydroxy-1-(4-ethoxy-3-methoxyphenyl)propanone (V), 1-(4-ethoxy-3-methoxyphenyl)-1,2,3-trihydroxypropane (VI), 1-(4-ethoxy-3-methoxyphenyl)-1,2,3-trihydroxypropane-2,3-cyclic carbonate (VII), and 1-(4-ethoxy-3-methoxyphenyl)-1,2,3-trihydroxypropane-1,2-cyclic carbonate (VIII) were identified as degradation products by gas chromatography-mass spectrometry. These degradation products were qualitatively the same as those of substrate I in the laccase/HBT system, but the yield of the products was apparently different. The products catalyzed by the HRP/H₂O₂/HBT system contained large amounts of the aromatic ring cleavage products IV, VII, and VIII compared with those catalyzed by the laccase/HBT system, while the amount of Cα-Cβ cleavage product II is relatively low. These results suggest that the role of HBT is not in a simple one-electron transfer between the enzymes and substrates.     

磨木木质素在硫酸盐法蒸煮过程中的降解及与木糖的缩合

在木糖存在的条件下,采用硫酸盐法蒸煮对蓝花楹磨木木质素(MWL)进行处理,然后对处理后的产物进行红外光谱和13 CNMR分析,研究蓝花楹MWL的结构变化,探讨在硫酸盐法蒸煮过程中木质素-碳水化合物复合体(LCC)的形成情况.研究发现:蓝花楹MWL结构单元之间的α-烷基芳基醚键、β-O-4型连接键很容易发生断裂,而在这些连接键发生断裂的同时,形成的木质素中间体与木糖通过化学键的结合,形成新的LCC结构.这种新形成的LCC结构主要是由β-O-4型木质素结构和5-5′缩合型木质素结构与木糖形成的以苯甲醚键连接的LCC,这种新形成的LCC结构对碱非常稳定.     

一株具有杀松材线虫活性细菌的筛选和鉴定

为了筛选对松材线虫（Burrmphezen曲“5xylophilus）具有较高杀线活性的细菌,作者从腌制芥菜的表面分离出了一株对松材线虫具有较高杀灭活性的细菌,命名LZ～01。经形态学观察、生理生化分析及对该菌16SrDNA序列分析,将该茵鉴定为BacilluscereusLZ-01。利用该菌培养滤液对松材线虫的杀灭活性进行了检测,结果表明：处理10h时松材线虫的校正死亡率可达100％。     

油茶种子水通道蛋白CoPIP1-1的鉴定与分析

以构建的油茶cDNA文库为基础,采用交错延伸PCR技术,分离克隆到一个水通道蛋白基因的编码序列(coding sequence,CDS),它编码一个287aa的跨膜蛋白(GenBank蛋白质id:ACF39901)。该蛋白可能由2条基因(GenBank登录号:EU850810、EU850811)编码,这2个基因具有相同的CDS和3′-UTR,但5′-UTR不同,其中之一多了2个小的插入片段。经对该蛋白的同源性比对和特征性基序分析,推测这个水通道蛋白属于质膜内在蛋白成员,定名为CoPIP1-1。通过同源建模,论证CoPIP1-1的水通道活性与通道口的(去)覆盖有关。N端与D环、B环的静电势作用导致了对通道口的(去)覆盖,并受磷酸化/质子化门控机制调控,质子化抑制通道活性,磷酸化则解除抑制。从同源建模的结果和细胞内的氧化状态推测该蛋白为组成型的低活性,这可能是油茶种子近成熟期脱水的成因之一。