无细菌松材线虫对马尾松的致病性

【目的】探讨松材线虫及其伴生细菌在松材线虫病中的作用,为其致病机制研究及病害防治提供理论依据。【方法】以5年生温室健康马尾松盆栽苗为材料,人工接种无菌松材线虫和带菌松材线虫(8 000条·株-1),观察松苗萎蔫情况,并于接种5、10和30天后取茎段横切面观察松脂分泌情况,对接种20天后的茎段组织解剖结构进行显微观察,接种后30天对植株取样进行线虫再分离,统计线虫在树体内种群增殖情况。【结果】无菌松材线虫和带菌松材线虫均能引起5年生马尾松盆栽苗发病,且症状一致,接种35天后致萎蔫率均达到90%,对照植株保持健康状态;茎段横切面观察结果显示,无菌松材线虫接种5天后松脂停止分泌,10天后茎段开始出现少量空洞,30天时空洞化严重;带菌线虫接种5天后尚有少量松脂分泌,10天松脂分泌停止,30天后茎段产生空洞;对照松树松脂分泌正常,茎段横切面完整平滑。石蜡切片结果显示,2组线虫接种致萎蔫松树茎段的组织解剖结构均发生显著变化,皮层及木质部细胞、髓心细胞大多破碎变形,树脂道上皮细胞破碎解体。无菌松材线虫在松苗体内种群增殖速率高于带菌松材线虫,萎蔫松苗体内线虫数量分别为(8 105±5 661)条·g-1和(4 317±1 896)条·g-1,但二者差异不显著(P=0.361 9)。【结论】无菌松材线虫和带菌松材线虫接种均能使5年生马尾松苗发病,无菌化处理未使松材线虫失去对马尾松苗的致病性,松材线虫的致病性与其伴生细菌无关。     

无菌和带菌松材线虫对赤松的致病性

【目的】探讨无菌和带菌松材线虫对赤松的致病性,明确松材线虫在松树萎蔫病中的地位,为致病机制研究及病害防控提供依据。【方法】以赤松胚性愈伤组织为材料,每块组织接种无菌松材线虫250条,培养12天后,利用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法对愈伤组织进行染色,分析无菌松材线虫对赤松愈伤组织细胞活性的影响。以赤松组培苗和4年生盆栽实生苗为对象,每株接种无菌松材线虫和带菌松材线虫(组培苗250条,4年生苗3 000条),分别于18天和35天后统计2种类型线虫接种所致松苗萎蔫率,并对植株体内线虫进行再分离,分析2种类型松材线虫对赤松幼苗的致病能力。【结果】无菌松材线虫接种导致赤松胚性愈伤组织严重水渍化,TTC染色为米黄色或淡粉色,证明愈伤组织已失去活性。无菌松材线虫和带菌松材线虫接种均能导致赤松组培苗萎蔫,接种18天后,萎蔫率分别为70%和60%;萎蔫植株中均可再分离到松材线虫,其每株平均分别为599±567条和365+240条,二者差异显著(P0.01)。剩余外观健康的赤松组培苗中也分离到线虫,但数量较少(仅10~20条)。2种类型松材线虫接种引起赤松盆栽苗同等程度的萎蔫,接种35天后的萎蔫率均达80%,无菌和带菌松材线虫致萎蔫植株中均可再分离到松材线虫,其每株平均分别为34 733±34 162条和25 057±21 410条,但差异不显著(P=0.508)。其余外观尚健康的松苗也进行线虫分离,2株接种无菌松材线虫的植株体内线虫分别为486条和22条;接种带菌松材线虫的2株松苗中,1株分离到646条线虫,另1株没有分离到线虫。【结论】无菌和带菌松材线虫均对赤松具有致病性,松材线虫是赤松萎蔫的直接原因,伴生细菌并非赤松萎蔫的必须因子。     

松材线虫致病性最佳接种量的研究

松材线虫是引起松树死亡的一种毁灭性病害的病原。为了研究松材线虫的致病性,该文对松材线虫的接种量进行研究,对3年生黑松苗接种松材线虫后的发病程度进行了等级划分以及发病等级的描述。3年生黑松苗,接种松材线虫LN001后,每株接种量为10000条时,发病率、感病指数、死亡率3个指标均达到最大值。接种松材线虫LN002后,每株接种量为8000条的松苗,在接种第47d时,感病指数达到100。3年生黑松苗接种松材线虫8000~10000条,为适合进行松材线虫接种试验的接种量。     

松材线虫病树早期诊断的研究：Ⅱ松树品种,接种量及线虫来源对 …

１９９７－１９９８年用不同量的松材线虫接种黑松和马尾权,用３个来源的松材线虫接种马尾松,用松材线虫接种７种松种,接种后对松树的流胶情况定期进行观察。     

不同松树感染松材线虫后NO和核酸酶变化与其抗病性的关系

以黑松、马尾松和火炬松为研究对象,对其接种松材线虫后4,12,24,48,72,96和120 h的NO和核酸酶的活性进行测定.3种松树接种松材线虫后,针叶内NO平均含量的积累为火炬松＜马尾松＜黑松,这种差异在12 ～48 h尤为明显;48h后较其割伤处理(CK1)的增加幅度为火炬松＞马尾松＞黑松.同时3种松树接种后的核酸酶变化趋势存在差异,单链核酸酶活性在4～48 h为火炬松＞马尾松＞黑松,而火炬松双链核酸酶活性在4～96h时却一直低于马尾松和黑松,这表明不同松树体内单链或双链核酸酶的活性变化与其抗病性有关.且3种松树在接种松材线虫后,表现出症状的时间顺序为黑松最早,马尾松次之,火炬松最晚.这表明NO和核酸酶的变化与松树感染松材线虫后的病程发展密切相关.     

拟松材线虫携带的细菌及其致病性研究

用来源于俄罗斯(E2),中国江西(JX2)、四川(SC)的3个拟松材线虫虫株,接种3年生黑松Pinus thunbergii,1个月后分离线虫体表携带的细菌。经API/ATB细菌自动鉴定系统鉴定:28个菌株中,鲁氏不动杆菌Acinetobacter 1woffii有10株,嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila和赫氏埃希菌Escherichia hermannii各有4株,其余10个菌株包括3株耳葡萄球菌Staphylococcus auricularis、2株泛菌Pantoeu agglomerans某些种、2株铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa、2株阴沟肠杆菌Enterobacter cloacae、1株荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens。对黑松切根苗的生物测定结果表明:强、弱、无致萎性菌株分别有10,15,3株。以强致萎活性菌SC5,SC7,E211和无致萎活性菌E25,JX23为代表,进行16S rDNA序列分析,结果表明:SC5为嗜水气单胞菌,SC7为荧光假单胞菌,E211为恶臭假单胞P.putida,E25为约翰逊不动杆菌Acinetobacter johnsonii,JX23为欧文氏菌Erwinia cypripedii。在此基础上,挑选SC7和E25为代表菌株,SC为代表虫株,对3年生黑松苗野外接种,结果为:强致萎病菌单独接种黑松不发病,无菌线虫单独接种也不发病,两者混合接种病情严重,说明拟松材线虫引起的松萎蔫病是该线虫与细菌复合侵染的结果。     

流胶法在长岛县防治松材线虫病中的应用

长岛县是我国北方松材线虫病的唯一疫区。 1999年用流胶法对长岛疫区内约 4 0 0多hm2 的松林内的感染松材线虫黑松病树进行早期诊断 ,结果表明低温对流胶法影响很大。在约 6 0 0 0 0 0株松树中 ,发现 935株松树流胶异常 ,从这些松树中取样经分离镜检发现 182株松树带有松材线虫 ,伐除这 182株松材线虫病树后 ,当年松材线虫病树死亡率减少 97%。对流胶法在生产上的应用进行了讨论。     

松材线虫与拟松材线虫杂交及后代的致病性

收集松材线虫5虫株与拟松材线虫1虫株进行生物学杂交,结果显示:松材线虫各虫株均能与拟松材线虫杂交且杂交率均较高,但杂交后代中普遍存在线虫死亡率较高的现象.用杂交后代线虫与未杂交亲本线虫分别接种2年生马尾松苗,结果表明杂交后代线虫对接种松苗的致病性小于其未杂交亲本线虫,从接种后萎蔫的松苗中再分离线虫,杂交后代线虫再分离数远少于亲本线虫数.     

松材线虫病树早期诊断的研究 Ⅱ.松树品种、接种量及线虫来源对流胶法的影响

１９９７～１９９８年用不同量的松材线虫接种黑松和马尾松,用３个来源的松材线虫接种马尾松,用松材线虫接种７种松树,接种后对松树的流胶情况定期进行观察。结果表明,接种量小的,松树流胶异常出现得晚,全部供试松树流胶出现异常的时间长;用南京的松材线虫接种的松树和用其它来源松材线虫接种的松树相比较,其流胶异常出现得快,全部供试松树表现流胶异常的时间短;感病松树流胶异常出现后,很快全部供试松树均表现异常并死亡。中度感病松树流胶异常出现后,到全部供试松树流胶表现异常的时间长,部分死亡。抗病松树的全部供试植株表现流胶异常的时间长,而且流胶异常的等级低,无松树死亡。虽然各处理中流胶异常的时间不同,但９８％以上的供试松树在感染松材线虫后流胶均出现异常。这进一步证明了流胶法可作为松材线虫病树的早期诊断方法。冬季为清理病死树的最佳时期。     

松材线虫在我国的分布

松材线虫[Bursaphelenchus xylophilus(Steiner＆Buhrer,1934)Nickle,1970]引起的松树萎蔫病(Pine Wilt Disease)是一种毁灭性病害。松树感染此线虫后可很快死亡。作者在温室用松材线虫接种三年生黑松苗,35d后76％的松苗即枯死了。据记载,在日本由于松材线虫为害引起的木材年损失量最高可达240万m~3 。自1981年以来,在我国湖南、贵州、云南、浙江、江苏等省都有松树枯死现象。1982年首次在南京发现松材线虫危害。以后,病情逐年加剧,到1987年已累计病死松树60万株,成为我国突出的、至今尚无防治良策的一大森林病害。     

四川马尾松木居真菌数量与松材线虫病发生的可能性分析

通过对四川马尾松枯萎林分木居真菌和线虫种类分析结果,在健康木、衰弱木和枯死木中均能分离出多种真菌,但健康木木居真菌数量较少。分离出的真菌种类主要有木霉属（Trichoderma sp．）、镰孢霉属（Fusarizn sp．）、多毛孢属（Pestalotia sp．）、砖格孢属（Steganosporium sp．）和曲霉属（Asperigllus sp．）。分离出的线虫为伞滑刃属（Bursaphelenchus sp．）线虫,未分离到松材线虫和拟松材线虫,分离出的木霉、多毛孢属、砖格孢属均可培养松材线虫,说明四川马尾松林区目前还属于松材线虫非疫区,但有发生松材线虫的可能性。     

Aseptic Bursaphelenchus xylophilus does not reduce the mortality of young pine tree

To assess the role of bacteria in pine wilt disease (PWD), aseptic M form (with a mucronated tail) and R form (with a round tail) of Bursaphelenchus xylophilus and B. mucronatus were obtained and compared, in terms of reproduction and pathogenicity, with non‐aseptic nematode. In addition, bacteria isolated from non‐aseptic nematodes and pine trees inoculated with non‐aseptic nematodes were identified. The results indicated that the bacteria associated with nematodes significantly lowered the reproduction of R form of B. xylophilus and B. mucronatus. Both the non‐aseptic and aseptic R forms of B. xylophilus induced death in all infected 7‐ to 8‐year‐old pine trees, while the non‐aseptic and aseptic M forms of B. xylophilus and B. mucronatus caused almost no plant mortality. High numbers of the non‐aseptic and aseptic R forms of B. xylophilus were distributed throughout the inoculated trees, while B. mucronatus and M form of B. xylophilus nematodes were lower in number and their distribution in stems limited within the inoculation site. Bacteria isolated from non‐aseptic nematodes were not recovered from the pine trees inoculated with these same kinds of nematodes. Two species of bacteria were both isolated from non‐aseptic B. mucronatus and from R form of B. xylophilus. Microbacterium trichotecenolyticum was common to both the control and inoculated pine trees. These results suggest that R form of B. xylophilus is the causal agent of PWD and that bacteria cannot increase the virulence of B. xylophilus and B. mucronatus.     

徂徕山病死松树中线虫的分离及鉴定

徂徕山林场地处鲁中山区的中心位置,具有重要的生态价值。近年徂徕山林场出现了松树的枯死现象,影响了徂徕山松林生态系统的健康和景观。为探究徂徕山松树死亡的原因,分析松树死亡是否与松材线虫病有关系,本研究调查了徂徕山10个林区,采集了969个样品,从线虫形态学、分子序列测定方面进行了鉴定和分析。研究显示,在徂徕山衰弱、病死木中未发现松材线虫,但是发现了大量的拟松材线虫(Bursaphelenchusmucronatus)。     

Responses of water-stressedPinus thunbergii to inoculation with avirulent pine wood nematode (Bursaphelenchus xylophilus): Water relations and xylem histology

The effect of water-stress conditioning on water relations and histological features ofPinus thunbergii Parl. inoculated with avirulent isolate ofBursaphelenchus xylophilus (Steiner and Buhrer) Nickle, pine wood nematode, were investigated. Pines were kept under 8 days cycle of severe water stress. One-half of the water-stressed pines died as a result of infection by avirulent pine wood nematode and water stress tended to induce increased susceptibility and/or decreased resistance of pines to avirulent pine wood nematode. In dead pines, the water conducting function of xylem was lost, and all of the parenchyma cells died. In surviving pines, the xylem hydraulic conductivity and the xylem water content were significantly reduced (12 to 23% and 77 to 83%, respectively) compared to controls. Safranin dye perfusion of excised axis stem segments indicated that the water conductance was limited to the very narrow peripheral area of xylem. Embolism caused by cavitation in the tracheids occurred in the central part of xylem and in that dysfunctional region of the xylem the axial parenchyma cells surrounding the epithelial cells, and ray parenchyma cells partly degenerated but the epithelial cells survived. The disruption of tracheid shape observed in surviving pines indicates that avirulent pine wood nematode temporarily disturbed cell division of the cambium. Considering the differences in responses between dead pines and surviving pines after inoculation with avirulent pine wood nematode, the death of water-stressed pines apparently resulted from death of cells, in particular the vascular cambium and the loss of xylem hydraulic function by cavitation.     

水合霉素对松材线虫病的影响

松材线虫病是松树的一种毁灭性病害。为进一步弄清细菌在病害中的作用，本文筛选了几种对细菌菌株GD1有抑菌活性的抗菌剂，在马尾松(Pinu massomiama水培1a～2a生离体松枝上测定了其对病害发生的影响。结果表明，红霉素和环丙沙星对菌株GD1均有较强的抑菌活性，水合霉素的抑菌活性较弱，叶枯宁、菌毒清、农用链霉素、青霉素钠和氯霉素均没有抑菌活性；离体松枝上的试验显示，水合霉素能减轻混合接种松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)和菌株GD1松枝的病情，而红霉素和环丙沙星无此现象，从而再次证明了细菌在松材线虫病中的重要作用。据此提出了从细菌和松材线虫两方面入手的该病防治策略。     

Response of Japanese red pine to inoculation with a blue stain fungus,Ceratocystis piceae

To confirm the pathogenicity of a blue stain fungus,Ceratocystis piceae (Münch) Bakshi to the Japanese red pine (Pinus densiflora Sieb. et Zucc.), the responses of healthy young pine trees and stressed trees which were girdled by the half-circumferential girdling technique were investigated by the fungal inoculation test. Although neither of the pine trees inoculated withC. piceae in the non-girdled treatment nor the controls died, mortality of the trees girdled and inoculated withC. piceae was 28.6%. In the pine trees inoculated withC. piceae, the mean area of the necrotic lesion of the sapwood was significantly larger than that of the controls, and the mean of the water pressure potential of the xylem decreased, regardless of the girdling treatment. TheC. piceae was reisolated from the wood pieces near the inoculation points on the inoculated trees, but not from the controls. These results suggest that under strongly stressed conditions, the Japanese red pine trees might have been killed by heavy infestations ofC. piceae carried by bark beetles. A part of this paper was presented at the 103rd Annual Meeting of the Japanese Forestry Society (1992).     

内寄生真菌Esteya vermicola对松材线虫侵染活力的测定

从不同培养基、不同测定方法、不同菌株、不同孢子浓度4个方面测定内寄生真菌Esteya vermicola孢子对松材线虫的侵染活力,结果表明:该真菌离体分生孢子对松材线虫有侵染活力;PDA固体培养比PDB液体培养所得孢子能更有效的粘附和杀死松材线虫;在WA平板上,采用浸渍法测定孢子对线虫的侵染活力比其他处理效果好;在供试的3个菌株(CUN 120806、CBS 10082和CBS 115803)中,CBS 115803菌株对松材线虫具有较高侵染活性;4个不同浓度(1×109、1×108、1×107、1×106个·mL-1)孢子对线虫的作用中,随着孢子浓度降低,孢子对线虫侵染能力也随之降低。     

松材线虫病病原与致病机理研究进展

松树是我国重要的造林树种,而松材线虫病是松树的一种毁灭性病害。近年试验表明,松材线虫病病原是松材线虫与伴生细菌。组织病理学研究看出,树脂道泌脂细胞最先受到线虫侵袭,薄壁细胞的死亡是寄主最初的组织病理学反应。松苗皮层薄壁细胞发生程序性死亡,表现出核染色质浓缩,核变形,降解,解体等细胞凋亡。纤维素酶作为松材线虫的致病物质参与早期寄主发病过程.线虫伴生细菌产生活性毒素。管胞空穴化造成输水堵塞致使受害松树死亡。松材线虫携带的细菌在致病过程中起到至关重要作用。可以认为,松材线虫病是由松材线虫和伴生细菌共同侵染引起的复合侵染病害。     

松材线虫病程中树体内线虫和细菌种群数量的动态变化

越来越多的证据证明松材线虫病是由松材线虫和线虫携带的细菌共同引起的。本文对接种松材线虫后黑松的不同发病阶段 ,树体内非接种枝上的线虫、细菌的种类及数量变化动态进行了研究 ,结果表明 ,非接种枝上 ,在病树出现少量黄色针叶时 ,能有细菌检出 ;较多黄色和褐色针叶时 ,线虫才开始出现 ,细菌开始增多 ;至发病后期 ,病树基本枯死时 ,线虫和细菌数量迅速增加。对发病过程中出现的细菌种类鉴定表明 ,发病中期 ,细菌种类比较单一 ,随着病情的发展 ,细菌不但数量迅速增加 ,而且种类也增多 ,但优势菌群为荧光假单胞菌、假单胞菌 不动杆菌、泛菌属和少动鞘氨醇单胞杆菌