进境种牛及遗传物质的遗传缺陷病检测方法的建立与应用

本研究运用分子生物学方法,对进口荷斯坦奶牛遗传物质、进口种牛、国产牛精液等进行BLAD、CVM、DUMPS、FDS 4种主要遗传病筛查,采用的PCR-RFLP方法是对提取产物的致病序列进行PCR扩增,后均采用酶切的方法对标本进行纯合子和隐性杂合子的鉴定,本文标本来自进口52份牛精液(美国、加拿大)、国产112份牛精液标本、650份进口种牛血液样品(澳大利亚、新西兰、乌拉圭、智利等国家),通过对814份样品的筛查,共检出携带BLAD隐性有害基因的样品6份,携带CVM隐性有害基因的样品15份,携带DUMPS隐性有害基因的样品4份,未检测到携带FDS隐性有害基因的样品。基于此,我国有必要尽快建立荷斯坦牛隐性遗传缺陷监控体系并进行系谱标注,以逐步降低我国奶牛群体中遗传缺陷隐性等位基因频率。     

基于便携式荧光定量PCR仪的兔病毒性出血症病毒现场检测方法的建立及应用

为建立兔病毒性出血症病毒免疫荧光PCR检测方法,参照GenBank中兔病毒性出血症病毒基因组序列,设计特异引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了能检测兔病毒性出血症病毒的荧光PCR方法,并验证该方法的特异性、敏感性、重复性。结果表明,该方法检测兔病毒性出血症病毒灵敏度可达1.38LD_(50)·100μL~(-1),该法对兔巴氏杆菌、兔大肠杆菌、兔沙门氏菌、兔水疱性口炎病毒(RVSTV)和兔轮状病毒(RRV)的检测结果均为阴性。试验建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法可对兔病毒性出血症进行现场快速鉴别诊断,为兔病毒性出血症的诊断及防控工作奠定了基础。     

4种猪群常见病毒基因芯片检测方法的建立与应用

【目的】建立猪瘟病毒(CSFV)、高致病性猪蓝耳病病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)及猪细小病毒(PPV)的基因芯片检测方法,为这4种病的实验室诊断和流行病学调查提供一种快速、高效的病原学诊断方法。【方法】根据GenBank中CSFV、高致病性PRRSV、PCV-2、PPV的相关基因序列,设计合成相关引物,采用PCR方法得到具有荧光标记的PCR产物,然后与含有特定检测探针的芯片进行杂交,建立其基因芯片检测方法,并对该方法的灵敏性和重复性进行检测。应用建立的基因芯片检测方法,对150份临床样品进行检测。【结果】建立了针对CSFV、PRRSV、PCV-2和PPV 4种病毒的基因芯片检测方法,该方法对临床150份样品的检测结果显示,CSFV阳性样品有25份,高致病性PRRSV阳性样品有45份,PCV-2阳性样品有70份,PPV的检测结果全部为阴性,其中混合感染样品有18份。【结论】建立了对CSFV、PRRSV、PCV-2、PPV 4种猪群常见病毒的基因芯片检测方法,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。     

猪日本乙型脑炎及猪细小病毒复合PCR检测方法的建立

根据GenBank上登录的日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)与猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)参考基因序列,设计合成2对特异性引物,在建立优化单项PCR检测方法的基础上,建立了PPV-JEV复合PCR检测方法,可扩增出预期的238 bp和152 bp特异性片段。该方法敏感性高、稳定性好、特异性强,临床样品检测结果与单项PCR检测结果符合率100%,该方法适合JEV和PPV的联合检测和鉴别诊断。     

鸡ILV、IBV、NDV和AIV多重RT-PCR检测方法的初步建立

初步建立了鸡传染性喉气管炎(IL)、鸡传染性支气管炎(IB)、新城疫(ND)和禽流感(AI)的多重RT- PCR鉴别诊断方法,并对其特异性和敏感性进行了检测。结果表明,所设计的4对引物可对同一样品中的ILV、IBV、NDV和AIV进行特异性扩增,所扩增的目的片断的长度分别为620 bp(ILV)、445 bp(IBV)、344 bp(NDV)和240 bp (AIV);建立的RT-PCR检测方法能够检测出10 pg AIV、1 ng NDV和10 ng IBV的RNA及100 pg ILV的DNA,说明该检测方法特异性强,敏感性较高。本研究所建立的多重RT-PCR方法可用于上述鸡4种病毒性呼吸道疾病的快速鉴别诊断,在临床诊断和流行病学调查方面具有较好的应用前景。     

黑龙江省某牛场种公牛牛白细胞粘附缺陷病（BLAD）的调查

BLAD（Bovine Leukocyte Adhesion Deficiency）是一种遗传免疫缺陷性疾病,能够引起牛持续感染和严重影响牛生长发育,已给养牛业造成了巨大的经济损失。为了解黑龙江省家畜繁育指导站种公牛BLAD携带及其发生情况,采用RT-PCR扩增牛CD18部分基因片段后,用TaqⅠ对扩增产物进行酶切方法...     

牛病毒性腹泻病毒一步RT-LAMP快速检测方法的建立

[目的]建立一种快速、敏感、特异的检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)方法,为诊断与监测BVDV提供准确可靠工具。[方法]根据GenBank公布的BVDV序列,在其保守序列区域设计了一套LAMP引物,优化了反应时间与反应温度,建立了检测BVDV的RT-LAMP方法。[结果]该方法能在56℃等温条件下40分钟完成扩增,扩增结果可通过凝胶电泳梯形带判定。该方法具有良好的特异性和敏感性,最低能检测到3.74×100copies/μl的病毒RNA,而且与其他病毒无交叉反应。[结论]该方法能用于牛病毒性腹泻病毒的诊断与监测。     

鸭巴泰病毒一步法RT-PCR检测方法的建立

为建立鸭巴泰病毒(Batai virus,BATV)的快速检测方法,本研究基于该病毒囊膜蛋白(M)基因序列的保守区域,经优化反应条件,对检测方法的特异性、敏感性及重复性进行了测定,建立了一种用于检测BATV的一步法RT-PCR快速诊断方法。所建立的检测方法可特异性扩增出BATV M基因480bp的序列片段,其最低检测病毒量为1×10~(1.1) TCID_(50),且重复性好,对禽坦布苏病毒、鸭甲肝病毒等5种鸭常见传染病病原均未扩增出相应的片段,特异性好。以上结果表明,所建立的RT-PCR检测方法具有很好的特异性和敏感性,可用于鸭BATV感染的早期快速诊断及流行病学调查。     

猪链球菌9型荧光定量PCR检测方法的建立及应用

【目的】建立猪链球菌9型(SS9)的快速诊断和定量分析方法。【方法】根据GenBank已登录的SS9cps9H基因保守部分序列设计合成引物和TaqMan荧光探针,建立了SS9的TaqMan荧光定量PCR检测方法(Taq-Man FQ-PCR),并进行了敏感性、特异性和重复性试验;利用所建立的检测方法对河南省11例疑似猪链球菌临床样品进行了应用检测,并与常规PCR方法进行了对比。【结果】成功建立了SS9的FQ-PCR检测方法和定量标准曲线,FQ-PCR方法的检测灵敏度可达1.0拷贝/μL,特异性高且重复性良好;利用该方法对11份临床疑似猪链球菌感染组织病料进行的应用检测表明,其中有3份样品为阳性,与常规PCR方法检测的阳性符合率为100%。【结论】成功建立的SS9 FQ-PCR诊断方法,可用于临床SS9型病菌感染的快速诊断及样品中细菌含量的定量分析。     

基于环介导等温扩增技术快速检测瓜果腐霉菌

[目的]建立一种快速、准确的检测瓜果腐霉菌(Pythium aphanidermatum)的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,为诊断和防治瓜果腐霉菌引起的植物病害提供技术支撑。[方法]通过比较基因组学方法,在瓜果腐霉菌基因组上筛选有序列特异性的基因作为检测的靶标基因,设计LAMP特异性引物,建立一种基于颜色判定的快速、准确的LAMP检测方法,随后对该检测方法的特异性、灵敏度和发病组织实际检测等进行分析评价。[结果]鉴定到1个编码Trypsin蛋白酶的基因是瓜果腐霉菌特异的基因,以该序列作为靶标建立了LAMP检测方法。在扩增前加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为指示剂,在等温条件(64℃)下进行核酸扩增反应60 min,即可通过肉眼直接观察结果,HNB显示天蓝色即为阳性反应;同时,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳验证为梯形条带,也可判定为阳性反应。特异性试验中,建立的LAMP检测方法能将瓜果腐霉菌和其他病原菌区分开。灵敏度试验中,LAMP检测方法的最低检测限为100 pg·μL-1,与Real-time PCR反应灵敏度一样,是普通PCR反应灵敏度的100倍。发病组织实际检测试验中,该LAMP方法能检测出人工接种发病植株中的瓜果腐霉菌。[结论]成功建立了一种适用于基层使用的针对瓜果腐霉菌的快速检测技术,为该菌所致病害的准确诊断奠定了技术基础。     

影响小麦品质的因素及改善小麦品质的途径

基于对小麦生产的重要性、我国小麦生产及品质现状进行的分析，详细阐述了小麦品质的概念以及小麦品质的分类标准，重点说明影响小麦品质的因素和改善小麦品质的途径。     

大学生就业问题及就业辅导员工作对策

当前,大学生就业形势严峻,择业渠道不够畅通.造成大学生就业难的现状,既有社会原因,又有用人单位、学校和毕业生自身的原因.大学生就业问题越来越成为社会关注的热点问题.导致大学生就业难的原因表象是扩招,但深层原因与就业观念陈旧、就业渠道不畅、高校的培养模式与学科结构不尽合理等方面有很大关系.就业辅导员在工作中应采取怎样的对策应对就业问题.     

α-甲基苯乙烯二聚反应催化剂研究的进展

对α-甲基苯乙烯(AMS)二聚反应的催化剂研究进展进行了详细的阐述,结果表明:其催化剂的选择正向着使该二聚反应高转化率、高选择性、绿色化方向发展。     

模糊理论在线性规划问题中的运用

本文分析了资源优化问题中普遍存在的模糊性及线性规划模型这一优化手段的不足之处，把模糊理论运用于该类规划问题，使优化模型更切合实际并探讨了新模型解的实现。最后以实例进一步阐述新模型运用的合理性，对实践中的资源优化管理有一定的指导意义。     

船坞里的闲适生活

当有一天,孩子有了自己的天地,你便可以抛开身边的诸多繁杂事务,静享一段属于自己的闲适生活。位于加拿大科灵伍德的船坞小区,就是设计师Jeffrey Fisher和Deborah Fisher儿妹为这样的你倾力打造的绝佳居所。清雅大气的风格,毗邻市中心的位置,用边齐全的生活及娱乐设施,让船坞的一切都无可挑剔。     

大学物理教学资源建设的几点思考

大学物理教学资源建设以大学生素质教育为核心,运用现代教育技术开发课件,围绕大学物理的必修和选修教学模式展开,通过大学物理必修课件和物理选修课课件(理论课补充和延伸)的建设方式,实现了必修和选修理论教学的良性互动,实现了教学相长、教研相长、教学资源不断丰富的良性发展;该模式较好的缓解了大学物理内容多课时相对偏少的矛盾,并在实践中收到了良好的效果。     

白宫室内装饰探秘

作为世界上唯一经常性免费向公众开放的国家元首官邸,白宫聚集了无数目光,吸引众人前来造访。不妨随我们进行一次白宫之旅,探究其精致的室内装饰,以及其丰富巧妙的色彩运用。     

试论生态图书馆建设

本文探讨生态图书馆的选址、建筑、内外环境和人文建设等问题。     

同时检测红外测距仪加常数和周期误差方法初探

为了解决检测红外测距仪周期误差费用高的问题 ,本文提出了同时检测红外测距仪加常数和周期误差的方法 ,并对其基本原理、计算方法和检测结果的有关参数进行了分析和论述。     

典型相关在水稻单株生产力与综合性状选择上的应用

本文通过对北方40个水稻品种13个性状指标的典型相关分析，结果发现，水稻单株生产力与综合植株性状、产量构成因素之间的典型相关均达到极显著水平，相关系数分别为0．90948、0．87103，它们所包含的信息分别占总信息量的79．0％和92．7％。穗部性状与粒型的典型相关系数为0．82739，达极显著水平，所包含的信息占总信息量的62．3％。在这些性状中起主要作用的指标是经济产量(X2)、穗数(X3)、穗粒数(X4)、穗长(X7)、穗颈长(X8)、1次枝梗的比例(X9)及谷粒长度(X10)。