土壤拮抗细菌的分离与抗植物病原真菌活性初步研究

为了分离筛选出土壤中对植物病原真菌具有拮抗作用的细菌,以4种土传病害病原菌为诱导菌株,采用土壤颗粒撒布法,从不同生态区农田土壤样本中分离得到55株拮抗细菌菌株。测定了部分拮抗菌株及发酵滤液对植物病原菌的拮抗作用。结果表明:分离获得的细菌菌株对病原真菌均表现出一定程度的抑制作用,其中对菜豆根腐病菌(Fusarium solani)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum)菌丝抑制率达60%以上的拮抗菌株,分别有1、12和8株。9株拮抗菌发酵滤液对大豆菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、水稻稻瘟病菌(Pyricularia grisea)、玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)、小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)、水稻恶苗病菌(Fusarium moniliforme)和马铃薯早疫病菌(Alternaria solani)6种植物病原菌表现出较高的抑菌效果,其中YS7菌株发酵产物对玉米大斑病菌、小麦根腐病菌、水稻恶苗病菌均表现较强的抑菌活性,对玉米大斑病菌抑菌圈直径最大达到了56.2mm。从抗菌谱上看,27株拮抗菌株代谢产物对4种以上的拮抗对象表现有抑菌活性,表明拮抗菌株代谢产物具有较为广谱的抑菌效果。     

云南榧树内生真菌TNF53的分子鉴定及抑菌活性研究

为探明菌株TNF53的分类地位及其抑菌活性,采用试剂盒法、滤纸片扩散法和对峙培养法对从云南榧树叶片上分离得到的内生真菌TNF53进行分子鉴定及其抑菌活性研究。初步鉴定,TNF53为炭疽菌(Colletotrichum),该菌粗提物对三七丝核病菌、辣椒炭疽病菌、辣椒镰刀病菌、水稻稻瘟病菌和白菜黑斑病菌均表现出抑菌活性,其中对三七丝核病菌的抑菌活性最明显。以上结果表明该菌对植物病原真菌具有广谱抗性。     

一株蓖麻根际活性菌LX6的抑菌活性测定及其分子鉴定

对蓖麻根际菌株LX6的抗菌活性进行了测定。结果表明,该菌株对多种植物病原真菌具有明显的抑制作用,表现出广谱抗菌活性。其中对三七根腐病菌(Cylindrocarpon destruans)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、玉米弯孢病菌(Curvularia lunata)和禾谷镰刀病菌(Fusarium graminearum)的抑菌效果均达50%以上。通过对LX6菌株的形态特征、染色反应、培养性状、生理生化特征试验以及16S rDNA鉴定,该菌株为枯草芽孢杆菌。     

核桃炭疽病高效生防菌株鉴定及抑菌活性

在对土壤有益微生物的分离、筛选中获得4株对核桃炭疽病菌具有较强抑制活性的拮抗细菌(编号分别为PF-1,PF-2,Bs-03,Bf-02)。通过对菌株的形态特征、染色反应、培养性状、生理生化特征、染色反应、培养性状、生理生化特性等试验项目,初步鉴定Bf-02为坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus),Bs-03为枯草芽孢杆菌(Bacil-lus subtilis),PF-1为幼虫芽孢杆菌(Bacillus lacivae),PF-2为短芽孢杆菌(Bacillus brevis)。采用平板对峙培养法测定4株拮抗细菌对核桃炭疽病菌抑菌活性,4株拮抗细菌对核桃炭疽病菌具有较强的抑制活性,抑菌率均达到83%以上,抑制活性最强的是PF-2,抑菌率为88.47%,与其它3株拮抗细菌的抑菌率在P<0.05水平上具有显著性差异。其次为PF-1,抑菌率为86.11%,Bs-03和Bf-02的抑菌率在P<0.05水平上无显著性差异。     

丛生盔形珊瑚共附生放线菌NLG-3的抑菌活性及鉴定

【目的】探究丛生盔形珊瑚共附生放线菌NLG-3对植物病原菌的抑菌活性,对其分类地位进行鉴定,为丛生盔形珊瑚共附生放线菌的开发利用提供依据。【方法】采用平板对峙法测定NLG-3对12种植物病原真菌的抑菌活性;采用滤纸片法测定NLG-3发酵液乙酸乙酯粗提物对5种病原细菌的抑菌活性;通过改变pH、温度及光照条件,测定该菌株发酵液的稳定性;采用几丁质平板培养法测定该菌株产几丁质酶的能力;通过基因扩增检测该菌株是否含有非核糖体多肽合成酶(NRPS)和聚酮合成酶(PKS)基因;结合菌株形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析对该菌株进行分类鉴定。【结果】菌株NLG-3具有广谱抑菌活性,对供试病原真菌均有不同程度的抑制作用,其中对香蕉炭疽病菌(Colletotrichum musae)和胶孢炭疽病菌(C.gloeosporioides)的抑菌率均在85%以上。NLG-3发酵液乙酸乙酯粗提物可以明显抑制蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)的生长,1 mg/mL NLG-3发酵液乙酸乙酯粗提物对蜡样芽孢杆菌的抑菌圈直径达(2.20±0.11) cm。NLG-3发酵液在中性(pH=7)条件下抑菌活性突出,经40℃及以上高温处理其活性丧失,光照对其抑菌活性无影响。NLG-3能产生几丁质酶,分解培养基中的几丁质。该菌株具有合成酶基因PKS-Ⅱ和NRPS,经初步鉴定该菌株为白刺链霉菌(Streptomyces albospinus)。【结论】NLG-3抑菌活性较好,具有潜在防治热带植物病害的应用价值。     

放线菌菌株AH-1的分离鉴定与抑菌活性研究

为筛选具有农用抑菌活性的微生物,从采自安徽黄山山区的土壤中分离得到一株具有抑制真菌活性的菌株AH-1。通过对其形态和培养特征、生理生化特性和16SrDNA序列分析,确定其为卡那霉素链霉菌。室内活性测定结果表明,该菌株发酵液具有广谱、较强的抗植物病原真菌活性,其对小麦根腐病菌和苹果褐腐病菌的菌丝生长抑制率高达94.4%和95.7%。抑制孢子萌发生测结果表明,AH-1菌株发酵液抑制玉米大斑病和马铃薯干腐病菌孢子萌发的EC50分别为15.81mg/L和10.17mg/L。推测,该菌株发酵液中可能含有广谱农用抑菌活性物质,值得深入研究。     

拮抗放线菌F1发酵液抑菌谱及稳定性分析

对拮抗放线菌菌株F1发酵液的抑菌谱及稳定性做了研究。抑菌活性实验表明:菌株F1发酵液对供试17种植物病原真菌和7种病原细菌都有较强的抑制活性,在供试的植物病原真菌中,对番茄灰霉病菌和李干腐病菌的抑制作用最强,抑菌圈直径分别为41.04mm和40.12mm;病原细菌中,对丁香假单胞菌流泪致病变种的抑制作用最强,抑菌圈直径可达22.15mm;稳定性实验结果表明:菌株F1发酵液对紫外线、热和酸碱较稳定,在pH为6～10条件下,均能保持较强的抑菌活性,但不耐强酸、强碱;当温度低于60℃时,处理30min和60min,抑菌活性几乎没变化,仍能保持较强的抑菌效果,但高于80℃时,抑菌活性明显降低。表明该菌株发酵液具有广谱抑菌活性和较强的稳定性,具有一定开发价值。     

1株碱蓬内生芽孢杆菌的分离及抑菌活性测定

为进一步探究内生细菌的生防机制,采用NA固体倾注法培养从碱蓬健康组织中分离的菌株,并对分离菌株的个体形态、菌落特征和生长特性进行初步研究,同时采用平板对峙法对其抑菌活性进行了测定.结果表明:从碱蓬健康组织中分离出1株内生芽孢杆菌(EB0901);该菌的生长最适温度为35℃,初始pH6～8时出现生长高峰,以pH为7时生长最好;在NaCl浓度为0.5%时生长最佳,但在10%以上时仍可生长;对供试的9种植物病原真菌菌丝生长均有一定的抑制作用,对玉米大斑病菌、辣椒菌核病菌、平脐孺孢病菌、辣椒炭疽病菌的抑菌能力较强,抑菌率在60%以上,显著高于其他5种植物病原真菌(P＜0.05),其中,对玉米大斑病菌的抑菌活性最强,抑菌率高达64.11%.碱蓬内生芽孢杆菌是一种具有明显抑菌活性的内生细菌,值得进一步开发利用.     

胡杨内生真菌分离及其抑菌活性研究

从健康胡杨的叶、皮、枝、干、根分离获得182株内生真菌,经形态观察分类鉴定属于4目5科25属。采用两点对峙培养拮抗试验、孢子萌发试验和人工接种试验,对杨树烂皮病菌(Cytospora chrysosperma)、松苗立枯病菌(Fusarium oxysporum)、豆角炭疽菌病菌(Colleotrichumsp.)、杨灰斑病菌(Coryneum populinum)进行抑菌活性测定。结果表明,所获内生真菌菌株对病原真菌菌丝生长和孢子萌发均存在不同程度的抑制作用,其中,青霉属(Penicilliumsp.)和木霉属(Trichodermasp.)真菌的菌株抑菌效果表现最明显。青霉菌和木霉菌可迅速对病原菌菌落包围、覆盖,从而使植物病原菌生长受到抑制。孢子萌发试验中,青霉菌培养3d时的滤液可对病原菌孢子萌发产生抑制作用,表现出一定的抑菌活性。     

台湾相思甲醇提取物抑菌活性研究

研究台湾相思(Acacia confusa Merr.)甲醇提取物及不同提取部位抑菌活性。采用超声波辅助提取法对台湾相思成分进行提取,用菌丝生长速率法测定提取物对11种植物病原真菌的抑菌活性,用液体培养基稀释法和滤纸片法测定提取物对14种动物病原细菌的抑菌活性;采用液-液萃取法对抑菌活性成分进行初步分离,测定各萃取部位的抑菌活性。结果表明,台湾相思甲醇提取物具有广谱抑菌活性,在10.0 g/L浓度下,对8种植物病原真菌和9种动物病原细菌有抑制活性。其中对甘蓝黑斑病菌(Alternaria oleracea)、玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)和甘蔗凤梨病菌(Ceratocystis paradoxa)的抑菌率均达89.55%以上,对蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)的最低抑制浓度为1.0 g/L;台湾相思对植物病原真菌和动物病原细菌均有广谱抑制作用,活性部位主要在正丁醇、乙酸乙酯部位。