接种密度、培养基中蔗糖和活性炭浓度对生物反应器内大花蕙兰原球茎增殖的影响

为了探明生物反应器内大花蕙兰原球茎增殖生长的影响因素,为大花蕙兰种苗生产中大量培养繁殖材料提供理论依据,以大花蕙兰茎尖诱导的原球茎为外植体,研究了接种量、蔗糖浓度、活性碳浓度对5 L气升式反应器内原球茎增殖和生长的影响。结果表明,大花蕙兰原球茎在5 L反应器内增殖时,接种量为20 g的处理原球茎鲜重显著优于10 g和30 g接种量处理;添加蔗糖30 g/L处理对大花蕙兰增殖生长有促进作用;活性炭浓度0.25 g/L处理原球茎的生长良好,高于0.25 g/L抑制原球茎的生长,增殖系数为7.5。利用5 L气升式生物反应器培养原球茎,接种量为20 g、蔗糖浓度为30 g/L、活性炭浓度为0.25 g/L时,大花蕙兰原球茎增殖较快,生长较好。     

海巴戟天愈伤组织诱导及细胞悬浮培养试验

以海巴戟天叶脉作为外植体,在B5 培养基上诱导出淡黄色、疏松愈伤组织,通过增殖后接种到液体培 养基中,建立细胞悬浮培养体系,并对影响细胞悬浮培养的培养基种类、接种量、pH 值、蔗糖含量等因素进行了研 究。结果表明院B5 + 1 mg/L 2,4-D + 0.1 mg/L 6-BA 能诱导出淡黄色、质地疏松的愈伤组织;较佳愈伤组织增殖培养 基为B5 + 2 mg/L NAA + 0.2 mg/L KT;细胞在B5 + 2 mg/L NAA + 0.2 mg/L KT 培养基中悬浮培养,接种量60 g/L（细 胞鲜重）、蔗糖4%、pH 值5.8、100 r/min、27益下暗培养,海巴戟天悬浮细胞比生长速率为0.0836 d-1,总蒽醌含量 367.8 mg/L,培养周期27~30 d。     

培养基及培养条件对除虫菊细胞生长的影响

以MS、ER、MG-5、B5、H、1/2MS、M9、NT及White为基本培养基,分析不同类型培养基对除虫菊细胞生长的影响,并以MS为基本培养基进行接种量、培养时间、pH、碳源、蔗糖质量浓度、不同蔗糖和葡萄糖组合以及光照条件试验,探讨除虫菊细胞生长的最佳培养条件。结果表明:适合除虫菊悬浮细胞培养的培养基为MS培养基,细胞接种量为8~12g/L、培养时间为20~25d,pH为5.8,采用自然散射光,单独使用蔗糖作为碳源时,质量浓度为30~40g/L有利于除虫菊细胞的生长。以蔗糖作为碳源时,添加25%的葡萄糖,除虫菊细胞的增长量可以提高12%。     

人参不定根生物反应器培养及其动态学研究

利用5 L气球型气升式生物反应器研究蔗糖和氧化锗浓度对不定根生长和人参皂苷合成的影响,结果表明,当MS+IBA 5 mg/L培养基中加入蔗糖50 g/L时,每个反应器可收获不定根34.5 g(干重),皂苷生产量达到61.1 mg/L,显著好于蔗糖30和70 g/L处理;培养基中加入氧化锗30或60μmol时,促进不定根...     

用微载体系统培养PK15细胞生产猪圆环病毒2型

研究了生物反应器、转瓶、方瓶3种不同培养系统生产PCV2,对转瓶不同参数下的病毒效价情况进行了比较和优化,最终确定培养参数为:以1∶10稀释种毒后接种、接种24 h的PK15细胞、5～7 mg/mL微载体浓度和维持液低糖DMEM+2 g/L水解乳蛋白(LH)的培养方式效果最为理想;采用微载体和反应器系统生产PCV2,病毒效价可达105.0 TCID50/mL以上.     

PK-15细胞在微载体悬浮放大培养及PCV2增殖工艺研究

为建立在生物反应器内微载体逐级放大培养PK-15细胞和增殖PCV2技术。采用分批式培养方法,研究了PK-15细胞在微载体胰酶消化放大悬浮培养及猪圆环病毒2型(PCV2)增殖工艺。结果表明,5 g/L的微载体和高糖DMEM下,采用4.0×105cells/m L的初始接种密度及培养至第2天进行换液操作工艺可以获得最佳的PK-15细胞生长效能。胰酶消化转移将PK-15细胞从1 L反应器放大至3 L反应器,微载体上细胞贴附均匀、生长旺盛,培养3 d细胞密度可达34.3×105cells/m L。采用感染复数为0.1的接毒比例,细胞接毒后在微载体上传至第3代收获毒液可获得最高的PCV2增殖效价107.25TCID50/m L。为PCV2疫苗的生物反应器规模化生产奠定了基础。     

海南粗榧细胞悬浮培养体系的建立

以海南粗榧愈伤组织进行悬浮培养,考察了培养基、维生素、蔗糖浓度、pH值、接种量对海南粗榧细胞悬浮培养体系建立的影响,并利用HPLC技术检测海南粗榧悬浮细胞和培养基中生物碱的含量.结果表明:海南粗榧悬浮细胞系培养的最适条件:MS为基本液体培养基、添加蔗糖35 g/L+VB1 10 mg/L、接种量6％、初始pH值5.5～7.0;发酵过程中每5d调节pH值至6.0,有利于细胞的生长和产物的合成;细胞的生长呈“S”型曲线,细胞生长周期为30 d,产物含量在培养25 d时达到最大;细胞活力呈先急剧上升后缓慢下降的趋势.     

生物反应器在金线莲扩繁中的应用

[目的]研究在自动化低成本的生物反应器下内大量扩繁金线莲的简单方法。[方法]把金线莲丛状芽培养在不同环境条件的3L球形生物反应器中,加入花宝（20-20-20）1g/L＋（6.5-4.5-19）1g/L培养基,添加蛋白胨2g/L、蔗糖3%和颗粒活性炭0.5g/L,比较b凝胶培养基与不同条件下生物反应器（浸没式、接触式和潮汐式）培养的金线莲丛生芽的生长情况。[结果]植株生长（干重、茎高、叶数、根数和根长）在接触式生物反应器中结果相对较好。当外植体数目在60～90个、通气量在0.06vvm时测试结果（鲜重、茎长、叶数、叶面积和根数）最好,再生苗拥有良好的根系且在温室容易驯化成功。[结论]利用生物反应器扩繁金线莲是一种新的有效途径。     

分泌抗IBDV单抗的杂交瘤细胞在新型5L细胞反应器中连续培养的研究

能稳定分泌抗IBDV单抗的杂交瘤细胞,直接从方瓶中接种进入已改装的新型5L细胞反应器,接种浓度不少于3×10~8个细胞/L,细胞在pH7.10、DO55、50～70r/min、37℃的培养条件下生长良好;在保持反应器内的葡萄糖浓度不低于1;,.0g/L的情况下,平均每天可生产单抗3L左右,产物的平均OD值为0.368,持续周期达30d左右。     

生物反应器在金线莲扩繁中的应用研究

[目的]研究在自动化、低成本的生物反应器内大量扩繁金线莲。[方法]把金线莲丛状芽培养在不同环境条件下的3 L球形生物反应器中,通过加入花宝(20-20-20)1 g/L+花宝(6.5-4.5-19.0)1 g/L培养基,同时添加蛋白胨2.0 g/L、蔗糖3%和颗粒活性炭0.5 g/L,比较了凝胶培养基与不同条件下生物反应器(浸没式、接触式和潮汐式)培养的金线莲丛生芽的生长情况。[结果]植株生长(干重、茎高、叶数、根数和根长)在接触式生物反应器中相对较好。当外植体数目在60～90个、通气量在0.06 vvm时测试结果(鲜重、茎长、叶数、叶面积和根数)最好,再生苗拥有良好的根系且在温室易驯化成功。[结论]利用生物反应器扩繁金线莲是一种新的有效途径。     

长春花生物碱类药物研究概述

长春花生物碱是目前应用较广的抗肿瘤类药物之一,然而,因其在植物体内含量甚微而影响其市场化.本文首先简要地介绍了长春花的起源,生长习性及其药用价值与作用机理,然后较为详尽地对上世纪80年代以来,长春花体内生物碱的提取及细胞工程、遗传工程、化学合成和生物合成长春花生物碱等方面作了较为全面的综述.最后,对长春花生物碱的前景作了展望.     

栽培因子影响长春花生物碱含量的研究进展

长春花为重要的抗癌药用植物,综述长春花栽培过程中,土壤水份、温度、光照等环境因子和施肥、喷施外源激素、喷施生物碱合成前体物质、刈割、采收等人为因子对长春花药用生物碱含量的影响。     

长春花大田栽培技术

通过育苗、移栽、田间管理以及采收等一系列田间实验,掌握长春花的生长发育、需水、需肥和病虫害发生规律,提出较为有效的栽培方法,基本达到在长春花栽培过程中＂可控、安全、优质＂的目标。为长春花的大面积种植提供技术参考。     

人为采收后长春花中长春碱含量的动态变化

采用超声提取和高效液相色谱法,对人为采收后的野生长春花中长春碱含量的动态变化进行了比较分析。分析结果表明：人为采收在干扰长春花生长发育的同时也影响到长春碱的合成与积累。采收后20d与采收前相比,长春花各部位的生物量降低,长春花叶片和茎中的长春碱含量也有所降低。采收后20～40d,长春花不同部位的生物量均呈上升趋势;采收后40～60d,长春花各部位的生物量增加相对稳定。采收后40d时,长春花根、叶片和茎中长春碱含量均显著高于采收前;采收后60d时,长春花不同部位长春碱含量略低于采收前。人为采收后长春花单株长春碱总量也有所降低。长春碱的这种动态变化可能与其对外界干扰的拮抗作用有关。     

长春花高效快繁技术研究

[目的]建立长春花高效的组织培养与无性快繁体系。[方法]以长春花种子为外植体,分别用1．1％有效氧的次氧酸钠溶液和0．196HgCl2溶液对长春花种子进行消毒,以MS为基本培养基,通过添加不同浓度的6-BA、IBA和N从,对脱毒后的长春花试管苗进行增殖和生根培养试验,确定长春花种子的最佳消毒时间,筛选长春花快繁的最佳培养基。[结果]用1．1％有效氯的次氯酸钠消毒长春花种子的最佳消毒时间是30min,种子发芽率达96．7％;最适宜的增殖培养基为MS＋0．40mg／L6-BA＋0．05mg／LIBA,外植体的增殖敷最多,且长势旺;诱导生根的最佳培养基为1／2MS＋0．10mg／L1BA＋0．10mg／LNAA,试管苗生根率达100％。[结论]次氯酸钠是长春花种子最好的消毒剂,最适宜的增殖培养基和生根培养基分别为MS＋0．40mg／L6-BA＋0．05mg／LIBA和I／2MS＋0．10mg／LIBA＋0．10mg／LNAA。     

干旱胁迫对长春花光合特性及可溶性糖的影响

为了探讨干旱胁迫对长春花的生长繁殖、光合特性及可溶性糖的影响,测定不同土壤湿度下的长春花幼苗叶片的净光合速率、蒸腾速率、气孔导度、糖含量等生理指标及叶片数、株高、花数等形态指标。结果表明:轻度干旱胁迫下(土壤体积相对含水量55%～60%),其生理及形态方面均没有发生明显的变化;重度干旱胁迫下(土壤体积相对含水量30%～35%),长春花的营养生长及生殖生长均受到明显的抑制,净光合速率、蒸腾速率、气孔导度显著下降的同时,水分利用率明显升高,这表明长春花具有强抗旱性;中度干旱下(土壤体积相对含水量40%～45%)使长春花由营养生长向生殖生长过渡,蔗糖的积累起到了促进作用。中度和重度干旱胁迫下,可溶性糖含量大量积累提高了植株的渗透势,其中蔗糖和葡萄糖为主要的渗透调节物质。     

人工复合群落对南方红豆杉生物量及紫杉醇质量分数的影响

在不同立地条件下构建了以喜树(Camptotheca acuminata)为建群种、以南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)为伴生种、以长春花(Catharanthus roseus(L.)G.Don)为地被种的人工复合群落,并以传统人工搭建遮阴网作对照。研究表明:从3月份新枝叶萌发至12月份枝叶停止生长,3种立地条件下单种群落和复合群落南方红豆杉生物量及其枝叶中紫杉醇质量分数差异显著,对于南方红豆杉生物量,陡坡复合群落缓坡复合群落平地复合群落平地单种群落;紫杉醇质量分数在5月份、8月份和11月份都出现峰值,其中紫杉醇质量分数最高值都出现在5月份。5月份和11月份,紫杉醇质量分数峰值:陡坡复合群落缓坡复合群落平地复合群落平地单种群落;8月份,紫杉醇质量分数峰值陡坡复合群落缓坡复合群落平地单种群落平地复合群落。南方红豆杉枝叶紫杉醇质量分数季节变化与太阳辐射、温度和降雨量呈正相关,与湿度呈负相关,但相关性均不显著。     

Utilizing the γ-Irradiated Sodium Alginate as a Plant Growth Promoter for Enhancing the Growth, Physiological Activities, and Alkaloids Production in Catharanthus roseus L.

Sodium alginate is a polysaccharide that is largely obtained from the brown algae (Sargassum sp.).It has been used as a wonderful growth promoting substance in its depolymerized form for various plants.The aim of this study was to find out the effects of various concentrations of γ-irradiated sodium alginate (ISA),viz.,deionized water (control,T0),20 (T1),40 (T2),60 (T3),80 (T4),and 100 ppm (T5) on the agricultural performance of Catharanthus roseus L.(Rosea) in terms of growth attributes,photosynthesis,physiological activities,and alkaloid production.The present work revealed that ISA applied as leaf-sprays at concentrations from 20 to 100 ppm might improve growth,photosynthesis,physiological activities,and alkaloid production in C.roseus L.significantly.Of the various ISA concentrations,80 ppm proved to be the best one compared to other concentrations applied.     

不同钙效应剂对长春花光合特性的影响

研究了细胞质膜钙通道阻断剂氯化镧(LaCl3)、胞内IP3通道阻断剂肝素(Heparin)、胞内CaM活性抑制剂三氟啦嗪(TFP)对长春花光合作用的影响,结果发现:Ca2+通道阻断剂处理后长春花叶片净光合速率(Pn)、PSII最大量子产量(Fv/Fm)、PSⅡ实际量子产量(Yield)、电子传递速率(ETR)、光化学淬灭系数(qP)均下降,非光化学淬灭系数(qN)及Chla、Chlb、Chla+Chlb含量上升,表明Ca2+通道阻断剂对长春花的光合作用有较大影响,且不是通过加速叶片光合色素降解或抑制其合成来实现抑制叶片的光合能力;其中Heparin处理的长春花叶片相关参数变化幅度最大,表明胞内钙库通过IP3通道释放的Ca2+在长春花叶片光合作用过程中发挥了更积极的作用.     

外源氮对盐胁迫条件下长春花生长和氮代谢途径的影响1）

以药用植物长春花（ Catharanthus roseus （ L．） G．Don）为对象,研究不同形态外源氮供应条件下,长春花生长发育与体内氮代谢响应盐胁迫的变化特点。结果表明,无盐胁迫条件下,不同形态氮源供应对长春花生长影响不显著,但硝态氮与氨态氮混合供应的情况下,硝酸还原酶（ NR）和谷氨酰胺合成酶（ GS）的活性及游离氨基酸总质量分数显著高于其他氮源条件下的;在盐胁迫条件下,硝态氮和氨态氮混合供应显著增加了叶片生物量积累,同时,NR活性也显著提高。总体上,混合氮源供应可以减少盐胁迫对长春花的伤害。这种作用可能与氮代谢过程中关键酶活性的增加有关,特别是与氨代谢有关的酶有关,适量的氨离子可以节省植物代谢硝态氮的能量。