葡萄病毒病研究进展与方向

国内已报道的葡萄扇叶病、卷叶病、茎沟病与栓皮病、斑点病等六种病毒病在我国各葡萄产区分布广泛,其中对扇叶病、卷叶病研究较多。在同等栽培条件下,感染扇叶病毒的植株,平均萌芽率、生产量和株产均明显低于正常植株;而感染卷叶病毒的蛇龙珠在植株上较无病株小1/3,穗重减少41.     

吐鲁番地区葡萄病毒病调查

1991和1992年春秋两季在吐鲁番地区葡萄产区进行葡萄病毒病普查并采样电镜观察及酶联免疫吸附法(ELISA)检测证实,葡萄扇叶病毒病和卷叶病毒病在吐鲁番地区的主要葡萄产区均有发生。调查中还发现一些类似病毒病的症状如葡萄脉坏死病、叶耳突病、斑点病、星状花叶病、缩叶病等。葡萄病毒病是影响葡萄生产的最主要因素之一,须加强检疫和防治。     

葡萄卷叶病的研究进展

葡萄卷叶病(Grapevine leafroll disease)是葡萄上的一种重要的病毒病,现已研究表明,引起该病的病毒不止一种,目前国际上承认的已有5种(GLRaVI-III),其中葡萄卷叶伴随病毒III(GLRaV-III)是最主要的一种,它分布最广,造成的经济损失最大,而且也是这几种病毒中唯一具有自然介体的病毒.本文根据生产实际,系统阐述了目前关于葡萄卷叶病毒病原、检测和脱毒技术的研究进展.     

医用抗病毒剂脱除葡萄病毒的初步研究

以携带葡萄(Vitis spp.)斑点病毒(GFkV)、沙地葡萄茎痘伴随病毒(GRSPaV)、葡萄病毒A(GVA)、葡萄卷叶伴随病毒-1(GLRaV-1)、葡萄卷叶伴随病毒-2(GLRaV-2)、葡萄卷叶伴随病毒-3(GLRaV-3)和葡萄卷叶伴随病毒-6(GLRaV-6)等病毒的8个葡萄品种试管苗样品为材料,采用不同质量浓度的医用抗病毒剂利巴韦林注射液进行脱毒处理。结果发现,葡萄植株的死亡率较高,设置的4个质量浓度处理中,只有加入25 mg/L利巴韦林注射液处理的试管苗样品获得了再生植株。对分离成活的茎尖进行RT-PCR检测,结果表明,获得的5个葡萄品种的9株再生植株中,只有维多利亚的2株检测带有GRSPaV,其余均不带有所检病毒。     

葡萄病毒病的发生与防治

葡萄病毒病主要的有4种,即葡萄扇叶病、葡萄卷叶病、葡萄栓皮病、葡萄茎痘病.我区葡萄病毒病以扇叶病和卷叶病为主,发生重的也有扇叶病和卷叶病回合发生.葡萄扇叶病毒病严重发生时可减产20%～80%,甚至导致植株死亡.葡萄卷叶病毒病一般减产20%左右,含糖度降低20%或更多.     

葡萄卷叶病毒主要检测技术比较

葡萄卷叶病(GLRaV)是葡萄上的一种重要病毒病害。本文主要阐述了该病的病原、分布及近些年来各种检测技术在该病检测中的应用情况,分析了各种检测技术的优势和不足及如何在该病检测中对各种方法做合理的搭配应用,优势互补,提高效率。     

西红柿黄曲病毒的防治妙法

<正>番茄黄化曲叶病毒病主要由烟粉虱传播,番茄植株感染病毒后,初期主要表现生长迟缓或停滞,节间变短,植株明显矮化,叶片变小变厚,叶质脆硬,叶片有褶皱、向上卷曲,叶片边缘至叶脉区域黄化,以植株上部叶片症状典型,下部老叶症状不明显;     

雁北地区马铃薯主要病毒种类的检测

采用先进的酶联免疫吸附测定法,对雁北地区4个马铃薯主要产区的17个品种(系)进行了病毒检测。检测对象为马铃薯主要病毒PVX、P'VY和PLRV(卷叶病毒)。检测结果,其发病率分别为75.2％、35.8％和38.1％。这说明本区在脱毒和引种过程中,应以防治PVX、PVY和PLRV为重点,并建立相应的良种繁育体系。     

草莓无病毒苗的培育

草莓植株非常容易受病毒的感染,在生产实践中经常发现植株逐渐矮化,产量降低,果实变小,品质变劣等现象,这些都是由于病毒的侵染造成的.据调查,我国草莓产区主要品种已受到草莓斑驳病毒、草莓轻型黄边病毒、草莓镶脉病毒、草莓皱缩病毒等病毒感染.目前,草莓病毒病还没有药剂可以防治.国内外的实践均表明,通过组织培养获得无病毒苗是防治草莓病毒病的主要措施.     

云南马铃薯病毒种类及脱病毒种苗筛选技术体系

应用电子显微镜(负染色观察、免疫电镜、细胞病理)、血清学(DAS-ELISA、TAS—ELISA)的方法,对采自云南省马铃薯产区的2 000多份马铃薯病毒病样品及试管苗、微型薯样品进行了检测鉴定。检出的病毒种类有马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯卷叶病毒(PLRV)、马铃薯M病毒(PVM)、番茄斑萎病毒(TSWV)、类烟草脆裂病毒(TRV like)、类马铃薯帚顶病毒(PMTV like)7种,其中PVX、PVY、PLRV是主要毒源。研究了PVY对合作88、PVX对中甸红产量的影响,随着种薯带毒率增加,产量显著下降。应用电子显微镜、TAS—ELISA技术建立了脱病毒核心种苗的检测筛选技术体系。制备了PVY的TAS—ELISA快速检测试剂盒,应用于生产用种苗、种薯的检测。     

A sensitive SYBR Green RT-qPCR method for grapevine virus E and its application for virus detection in different grapevine sample types

To develop a rapid and high-sensitivity method for detection of grapevine virus E(GVE), a SYBR Green based real-time fluorescence quantitative RT-PCR method(RT-qPCR) was established. This method could be used to detect GVE specifically, and the sensitivity was about 100 times greater than conventional RT-PCR. An excellent linear correlation(R2=0.997) and a high amplification efficiency(E=97.5%) were obtained from the standard curve of this method. Reproducibility tests revealed that the coefficients of variation in the intra-and inter-assay results were 0.31–1.03% and 0.82–2.62%, respectively, indicating a good reproducibility. The RT-qPCR method could be used to detect GVE in a wide range of grapevine sample types. The detection rates of RT-qPCR for nearly all sample types from different positions and seasons were higher than conventional RT-PCR. The detection rates in spring, summer, autumn and winter increased gradually. Samples in autumn and winter were best for detection, and the detection rates of most samples were 80–100%, which were 10 to 40% higher than conventional RT-PCR. In general, old petioles and branches were the best tissues for GVE detection. The detection rates of these samples in each season were all 100%, which were 20 to 40% higher than conventional RT-PCR. The second highest rates were in the old leaf, with detection rates for RT-qPCR of 80–100% in all seasons, which were 20 to 40% higher than conventional RT-PCR. GVE could be difficultly detected in young leaves by conventional RT-PCR, and the detection rates were only 0–50%, while by RT-qPCR the rates could increase to 0–80%. A total of 33 out of 363 samples(belonging to 68 cultivars) from 20 regions in China were detected to be positive by RT-qPCR(9.1%), which was more than twice the rate of the conventional RT-PCR(3.9%).     

葡萄卷叶伴随病毒1号河北和辽宁分离物CP基因序列分析

为获得葡萄卷叶伴随病毒1号(Grapevine leafroll-associated virus 1,GLRaV-1)中国分离物的分子信息,提高其检测可靠性,本研究从河北怀来和辽宁兴城地区带有明显卷叶症状的葡萄样品中提取的叶柄韧皮部总RNA,采用RT-PCR克隆了GLRaV-1的河北(GLRaV-1-HB)和辽宁分离物(GLRaV-1-LN)的外壳蛋白(coatprotein,CP)基因,并进行了序列分析。结果表明:GLRaV-1-HB和GLRaV-1-LN的CP基因核苷酸同源性为90.7%,由此推导的氨基酸同源性为93.8%;与已报道的国外3个GLRaV-1分离物的CP基因全序列相比,其核苷酸与氨基酸序列同源性分别为90.0%～96.0%和92.9%～97.5%。以CP基因序列构建的进化树表明,现有的5个分离物可分为3组,其中本研究得到的GLRaV-1-HB和GLRaV-1-LN,分别与巴西分离物(GLRaV-1-PS,GenBank登录号为GQ332536.1)和伊朗分离物(GLRaV-1-IR-S7,FJ952151.2)为一组;澳大利亚分离物(GLRaV-1-AUS,AF195822.1)单独为一组。     

Elimination of grapevine fleck virus and grapevine rupestris stem pitting-associated virus from Vitis vinifera 87-1 by ribavirin combined with thermotherapy

Vitis vinifera 87-1 plants infected by grapevine fleck virus(GFkV) and grapevine rupestris stem pitting-associated virus(GRSPaV) were used as the plant materials for virus elimination treatment. This study evaluated the effects of ribavirin at different concentrations(15 and 25 μg mL~(–1); R15 and R25, respectively), thermotherapy(37°C; T), and the combination of ribavirin and thermotherapy(R15+T and R25+T) on eliminating viruses from grapevine plants in vitro. Both R15 and R25 had phytotoxic effects and weakened plant growth. Thermotherapy positively affected the growth of grapevine plants. Plant height was significantly greater in T, R15+T, and R25+T than in CK, R15 and R25. The proportion of dead plants after T, R15+T, and R25+T was 51.4, 11.4, and 8.6%, respectively. The survival rates of regenerated plants after all treatments were 68.0%. Ribavirin concentration and treatment time were related to the regeneration of shoot tips and elimination efficiencies of the two viruses. The survival rates of plants after R15+T for 30, 40, and 50 days were 97.3, 90.7, and 74.4%, respectively. The elimination rates of GRSPaV from plants in the three time quantum were 55.6, 84.6, and 93.8%, respectively. The elimination rate of GFkV was 23.9% higher in R25(35/44) than in R15(25/45), and that of GRSPaV was 7.0% higher in R25 than in R15. The combination of thermotherapy and chemotherapy was found to have a positive effect on the eradication of GFkV and GRSPaV, and R25+T for 50 days was able to completely eliminate the two viruses from in vitro grapevines.     

马铃薯卷叶病毒的RT-PCR快速检测

根据马铃薯卷叶病毒的外壳蛋白基因序列,设计合成了一对寡核苷酸引物。从感染马铃薯卷叶病毒(PLRV)的马铃薯叶片中提取出病毒RNA,进行cDNA合成并运用RT-PCR技术进行体外扩增,得到一条长度约627bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致,而对照未得到任何产物。从而建立了快速灵敏的PLRV检测方法,为PLRV的防治及检测提供了有效手段。     

绿盲蝽卵的染色方法及其在棉花和苜蓿上的分布

为了明确绿盲蝽在棉花和苜蓿植株上的产卵特性,采用改进的酸性品红染色法,调查了绿盲蝽在棉花和苜蓿植株不同部位上的产卵情况。结果表明:绿盲蝽在棉花植株上的产卵部位与其趋嫩特性密切相关,主要产卵部位是嫩叶和腋芽,其次是幼蕾和嫩叶柄,这4个幼嫩部位上的产卵量占棉花植株总卵量的79.57%,而在其他部位上的产卵量较少;但是在苜蓿植株上,绿盲蝽的主要产卵部位是刚收割后的新茬和嫩尖,2个部位的产卵量分别占苜蓿植株总卵量的43.90%和25.30%,并且在旧茬上也有11.59%的产卵量,而在嫩叶上产卵量却很少(仅占总卵量的0.91%)。绿盲蝽在植株上的产卵部位与其趋嫩习性有关,但也会因寄主种类的不同而存在差异。     

24-表油菜素内酯对葡萄叶片抵御霜霉菌侵染的影响

【目的】研究外源24-表油菜素内酯(24-epibrassinolide,EBR)处理对霜霉菌侵染葡萄叶片的影响,为探究葡萄霜霉病的致病机理提供参考。【方法】试验以欧亚种酿酒葡萄(Vitis vinifera.L)赤霞珠(Cabernet Sauvignon)叶片为材料,在霜霉菌侵染离体葡萄叶片的初期,研究不同浓度的EBR处理(0.1、0.5和1.0 mg·L~(-1) EBR)对葡萄叶片霜霉病发病率和病情指数、霜霉菌菌丝生长、孢囊梗的形成、气孔周围孢子数量、葡萄叶片气孔开度和内源激素含量的影响及相互关系。【结果】EBR各处理均显著抑制了接种霜霉菌0.5 h后葡萄叶片气孔开度,以及接种后1 d和2 d病菌菌丝的发育。0.5和1.0 mg·L~(-1) EBR处理均显著抑制了接种霜霉菌0.5 h后叶片气孔周围的游动孢子数量和3 d后菌丝体在侵染区域的覆盖面积;接种4 d后,EBR各处理均显著抑制了霜霉菌孢子囊数量以及叶片发病率与病情指数,且0.5 mg·L~(-1)和1.0 mg·L~(-1) EBR处理降低发病率和病情指数的幅度最大,发病率分别比CK降低51.4%和45.0%,病情指数分别降低71.2%和62.9%。总体而言,0.5 mg·L~(-1)和1.0 mg·L~(-1) EBR处理抑制霜霉菌生长发育较为显著,且二者之间无显著性差异。0.5 mg·L~(-1) EBR处理的叶片脱落酸(ABA)、茉莉酸(JA)和水杨酸(SA)含量与CK之间均存在显著差异,气孔孔径与SA含量,ABA含量与JA含量呈显著正相关。【结论】EBR处理提高了葡萄叶片抵御霜霉菌侵染的能力,可能与其抑制病菌发育,改变寄主内源激素含量,从而促进气孔关闭等因素有关。     

镉胁迫对葡萄砧木5BB和99R组培苗生长的影响

利用组织培养技术,研究了不同质量浓度镉(Cd)(0、1、3、5mg/L)对2个葡萄砧木品种(5BB和99R)的生长特性及Cd积累规律的影响。结果表明,随着Cd质量浓度的增加,2个葡萄砧木品种的生物量、株高、根系长度和表面积均呈现下降的趋势,且99R的下降幅度明显高于5BB。随着Cd质量浓度的增加,2个葡萄砧木品种Cd含量明显增加,在试验设置的Cd质量浓度条件下,5BB地上部和根系Cd含量均低于99R。2个葡萄砧木品种对Cd胁迫的反应虽然总体趋势一致,但5BB的生物量、株高和根系形态指标的下降幅度明显低于99R,表明5BB比99R具有较强的耐Cd特性。     

根施褪黑素对NaCl胁迫下葡萄内源褪黑素及叶绿素荧光特性的影响

【目的】研究NaCl胁迫下内源褪黑素(melatonin,MT)及其关键代谢物的响应以及施加外源MT对NaCl胁迫下葡萄叶片的光抑制缓解作用,为MT的应用提供参考。【方法】以一年生盆栽‘威代尔’葡萄(Vitis vinifera cv.Vidal Blanc)为试材,进行100 nmol·L~(-1) NaCl和100 nmol·L~(-1) NaCl+MT处理,测定不同处理植株、不同器官内源MT、MT合成前体物质5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)和MT的主要代谢产物2-羟基褪黑素(2-Hydroxymelatonin,2-OHMel)的含量,分析根施MT对NaCl胁迫下叶片叶绿素荧光特性及内源MT代谢的影响。【结果】受NaCl胁迫后,植株不同器官的内源MT、5-HT及2-OHMel与清水对照相比有明显的时空变化,胁迫7 d时以根系的MT含量最高,其次是嫩梢,成叶中的最低;随着胁迫时间的延长,根系中的MT含量大幅度下降,而嫩梢中的5-HT含量增加。根施外源MT后与单纯的NaCl胁迫相比,显著提高了前期成叶中的5-HT含量以及后期新根中的MT含量,嫩梢和成叶中2-OHMel的含量。NaCl胁迫后快速叶绿素荧光曲线(OJIP)形状发生明显改变,最大荧光(Fm)及叶片最大光化学效率(Fv/Fm)显著下降了31.6%和11.6%,非光化学淬灭(NPQ)显著升高,光系统I(PSI)和光系统II(PSII)的线性电子传递速率ETR(I)和ETR(II)均显著下降;而根施MT后,叶片Fm和Fv/Fm的分别升高了12.9%和7.3%,OJIP曲线中K点和J点分别下降了23.6%和11.3%,增加了叶片对光能的利用效率,线性电子传递速率明显提高。【结论】NaCl胁迫严重抑制葡萄叶片光系统活性,但促进了植株中褪黑素的合成;根施MT缓解了光系统活性的抑制程度,促进MT在植株各器官中的代谢和分配,缓解NaCl胁迫对葡萄叶片光合作用的伤害程度。