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相似文献
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1.
应用聚全酶链反应(PCR)对畜型和禽型两个融合基因HBsAg/LHRH的5’端分别作了改造,切去了融合基因起始密码ATG前一段非编码序列61个碱基,将改造后的融合基因插入pBluescripe 11 KS^+质粒中。琼脂糖凝胶电泳以及序列分析均表明改造和克隆成功。将改造后的融合基因克隆到含T7Promoter强启动子的表达载体pET15b中,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,在E.coliDE  相似文献   

2.
应用聚合酶链反应(PCR)对畜型和禽型两个融合基因HBsAg/LHRH的5′端分别作了改造,切去了融合基因起始密码ATG前一段非编码序列61个碱基,将改造后的融合基因插入pBluescripe11KS+质粒中。琼脂糖凝胶电泳以及序列分析均表明改造和克隆成功。将改造后的融合基因克隆到含T7Promoter强启动子的表达载体pET15b中,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,在E.coliDE3中表达,表达量占菌体总蛋白的10%,以兔抗LHRH抗体进行Western-blot检测,出现阳性反应带。用抗HBsAg抗体作ELISA检测,结果稀释1×10-6时仍为阳性反应。  相似文献   

3.
利用低融点琼脂糖凝胶电泳,回收牛生长激素cDNA全序列,克隆于原核表达载体PT77-7中T7启动子下游,转化大肠杆菌E.coliDH5α,经分离,酶切分析,获得6个牛生长有质粒PTGH1-6,选取其中两质粒PTGH11-2,转化E.coliK83=pG1-2,42℃诱导30min,收集,破裂菌体,SDS-PAGE电泳检测,于22KD处有一特异性蛋白带,经ShamadzuCS930扫描测定,其表达量  相似文献   

4.
用EcoRI酶切PR5B4质粒,采用“V”字形内槽电洗脱法回收约0.804Kb牛冠状病毒基因工程抗体4H12/1D4单链基因片段,并将其插入载体质粒PET-17b的EcoRI位点构成重组质粒PET-D4,将重组质粒转化DH5α感受态细胞,在IPTG的诱导下表达,细菌裂解物经SDS-PAGE电泳筛选,发现含PET-D4细菌经诱导新增一条约28KDα蛋白带,该蛋白带与设计基因工程抗体的大小相符,经光密度扫描,表达量约占菌体总蛋白的14%  相似文献   

5.
学融合表达系统是Invitrogon公司近年来发展的以E.coli硫氧还蛋白作为融合伴侣的融合表达系统。其重组质粒的诱导表达需在E.coliGI系列菌株中进行。本文对载体质粒pTrxFus及其携带编码hARLBD基因的重组质粒pTrxAR在E.colicG1724株中的质粒孕育量与生长培养条件的关系进行了研究。结果表明,菌株在平板RM培养基上的活化生长时间及菌体液体培养时的温度对其质粒孕育量影响极  相似文献   

6.
本文报道采用反转录酶—聚合酶链式反应,体外扩增芜菁花叶病毒(TuMV)外壳蛋白基因及其克隆,并在大肠杆菌中获得表达的结果;从抗州市郊区感病的油菜上分离到一株致病力极强的芜菁花叶病毒分离物,提纯后,经50ng/mL蛋白酶K和0.5%SDS处理,苯酚/氯仿和氯仿抽提两次,酒精沉淀,获得了纯化的病毒RNA,该RNA与oligo(dT)_(15)退火后,在AMV反转录酶的作用下合成了单链cDNA,然后加入用以扩增TuMV-CP基因的上下游引物,35个循环后,得到了一条长约0.85kb的片段,将该片段克隆到pUC18质粒的SalⅠ限制性酶切位点,分析了限制性酶切图谱,分析表明该片段含有EcoRⅠ和XbaⅠ以及引物设计时带人的McoⅠ三个酶切位点,该片段克隆到大肠杆菌(Escherichiacoli)原核表达载体pKK233-2质粒的NcoⅠ和HindⅡ位点后,经IPTG诱导,以该病毒的抗血清为第一抗体,Westernblot检测该基因的表达产物,结果表明该基因的表达产物为TuMV-CP蛋白,因而认为所获得的扩增片段确为芜菁花叶病毒外壳蛋白基因。  相似文献   

7.
用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ,从克隆载体pUTSⅡ中切出一个0.988kbTSPGⅡ基因,经EcoRI和BstXI酶切鉴定,同时表达载体也用相同的酶进行酶切,经琼脂糖凝胶电泳,分别回收TSPGⅡ基因和pSV·SPORTⅠ表达载体,用T4DNA连接酶定向连接,转化大肠杆菌感受态细胞,挑取重组子,经EcoRⅠ,BstXⅠ和HindⅢ酶切鉴定,构建了重组表达质粒pSV·TSⅡ.  相似文献   

8.
PuPR为含有编码人孕激素受体(hPR)激素结合区(LBD)基因(631-933氨基酸)的pUC19重建质粒,在其宿主Escherichia coli(BL21)中,经1mmol/L的IPTG诱导,该转化的细菌产生一C端为6×His结尾的蛋白质,分子量45KD。该表达产物可利用Ni-NTA HRP在ng水平用Westem印迹检测,并可通过亲和层析的方法,利用His-binding resin(Ni  相似文献   

9.
人雄激素受体LBD基因融合表达产物的分离制备   总被引:2,自引:1,他引:1  
利用硫氧还蛋白事例表达系统,将编码人雄激素受体(hAR)激素结合区(LBD)的基因(编码hAB584-918氨基酸)插入质粒pTrx Fus中trxA基因的3′端,重组后的质粒pTrxAR导入E.coli GI724中,经Trp诱导,该转化的菌株表达一融合蛋白。通过制备包含体,再利用制备型SDS-PAGE或Sephadex G-200柱层析都可较好地纯化分离该融合表达产物(达到SOS电泳单点纯),  相似文献   

10.
番茄双抗TMV和CMV基因工程的研究   总被引:4,自引:1,他引:3  
在TMV外壳蛋白(CP)基因的5′和3′端分别合成寡聚核苷酸引物P1和P2,并分别引入ClaI和BamHI位点,采用PCR技术扩增TMVCP基因,用ClaIBamHI消化后重组到pBlue scriptKS+中,并将该基因与CMVCP基因重组在同一个表达载体pE3上获得双价CP基因表达载体pETC2,转化番茄,获得再生植株。通过点杂交、PCR检测和Southern杂交,证实2、12和13号为转TMV和CMVCP基因的工程植株。工程植株在温室中表现正常,比对照植株表现出明显的抗性。  相似文献   

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观察测量屠宰肉尸452头,其中440头为有无腹股沟深淋巴结的形态学观察;10头为后躯被检淋巴结的形态学观察;2头为管道注射,观察引流区。结果:1.猪有腹股沟深淋巴结,在统计230头,460例肉尸中,有24头存在,占10.43%。腹股沟深淋巴结平均重0.88±0.38克,平均大小为2.82±0.70×1.64±0.36×0.47±0.13厘米;汇集股部内侧和下腹部的淋巴液,注入髂内侧淋巴结。2.髂内侧淋巴结平均重1.87±0.71克,平均大小为3.19±0.80×1.38±0.42×0.55±0.18厘米;输入管数为5—6条,管外径为0.09±0.04厘米,输出管数为1—3条,管外径为0.24±0.10厘米。3.髂内侧淋巴结收纳腘浅淋巴结,腹股沟浅淋巴结和髂下淋巴结引流区的淋巴液和部分盆腔内脏的淋巴液。管辖范围广,位置恒定,淋巴结较大,浅在胴体脏面,易找到,不破坏商品,不影响商品的外观,是屠宰肉尸后躯被检的主要淋巴结。  相似文献   

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