宁强矮马与哈萨克马GHR外显子10的部分序列遗传变异

为宁强矮马、哈萨克马的分子系统学地位和生长机制的研究提供分子水平的科学依据,对宁强矮马、哈萨克马和其他动物生长激素受体基因外显子10序列进行分析,通过PCR扩增宁强矮马和哈萨克马的生长激素受体基因外显子10,并进行测序,用DNAMAN软件对不同动物的生长激素受体(GHR)基因外显子10序列进行比对分析,并以生长激素受体...     

宁强矮马微卫星遗传多样性研究

采用8个微卫星标记对12匹宁强矮马的遗传多样性进行了分析，结果表明，在6个微卫星位点上存在遗传多态性，COR059有8个等位基因，ICA40有5个等位基因，AHT040有8个等位基因，UM016有9个等住基因，UM002有6个等位基因，TKY21有5个等位基因，各位点平均有效等住基因数4.93、平均多肽信息含量为0.743、平均杂合度0.78，数据表明宁强矮马保持了较为纯净的原始基因库，对宁强矮马这一濒危物种进行资源评价、保护和开发if,0用研究提供了分子水平的理论依据。     

宁强矮马线粒体DNA D-loop区的遗传多样性

【目的】研究宁强矮马线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）D-loop区的遗传多样性及其母系起源进化,为其遗传资源保护提供理论数据。【方法】采用PCR和测序技术分析12匹宁强矮马mtDNA D-loop区的600 bp核酸序列,并基于mtDNA D-loop区序列将宁强矮马和NCBI公布的其它马种进行系统树构建。【结果】宁强矮马群体存在9种单倍型,检测到34处SNP位点,占所分析位点总数的5.67%,各单倍型间的遗传距离为0.002—0.035,单倍型多样性为0.978±0.054,核苷酸多性为0.01988±0.00818。聚类分析表明宁强矮马分布在4个支系中,与胡克尔马、设特兰马、德保马、蒙古马和车巨马亲缘关系较近,与纯血马、云南马和韩国济州岛本土马的亲缘关系较远。【结论】宁强矮马具有比较丰富的遗传多样性,在进化的历史过程中受到其它马种的影响较大。     

中国矮马群体mtDNA Cytb基因遗传多样性及系统进化研究

【目的】利用线粒体细胞色素 b（mtDNA Cytb）基因为标记,从分子水平探讨中国5个矮马136个样本的遗传多样性和系统进化研究,为中国矮马的开发利用以及生物多样性保护提供基础资料。【方法】对矮马样本mtDNA Cytb基因进行PCR扩增和测序,运用现代生物信息学方法进行数据处理。【结果】共检测到27个单倍型,40个多态位点,约占分析位点总数的3.51%。云南矮马具有最高的单倍型多样度（Hd）（0.869）,最低的为四川矮马（0.740）,核苷酸多样度（Pi）最高的为贵州矮马（0.00435）,最低的为宁强矮马（0.00227）,各群体间的遗传多样性相差不大。系统发育树和NETwork图中每一分支均含有5个矮马群体的信息。【结论】5个矮马群体总体上具有较高的遗传多样性,其中云南、贵州及德保矮马的遗传多样性相对较高,四川和宁强矮马相对较低;系统发生关系分析说明中国5个矮马群体存在基因交流,具有多重母系起源。     

宁强矮马生长激素基因（GH）的遗传变异分析

 【目的】通过分析不同动物和中国几个地方马种生长激素基因序列,为宁强矮马起源和矮化形成机制的研究提供分子水平的试验依据。【方法】通过PCR扩增宁强矮马生长激素基因并进行测序,用DNAMAN软件对不同动物的生长激素基因序列进行比对分析。【结果】马品种间29个位点发生遗传变异,编码区11个位点发现遗传多态现象。以蒙古马生长激素氨基酸序列为标准,宁强矮马仅在1 765位点的变异导致氨基酸发生改变。以生长激素的mRNA序列为基本数据进行聚类分析,宁强矮马和德保马67的同源性为100%,与百色马的同源性为99.8%,与蒙古马的同源性为99.7%。【结论】马属动物生长基因序列与猪和狗的同源性较高,宁强矮马1 765位的G→A可能影响到宁强矮马的生长发育。     

雷州黄牛GAD1和GHR基因的多态性分析

利用PCR-RFLP技术分析了61头雷州黄牛的谷氨酸脱羧酶1(GAD1)基因3′端片段和生长激素受体(GHR)基因第10外显子片段的多态性。结果表明,雷州黄牛群体在该2个基因位点均存在核苷酸变异多态性。在GAD1基因3′-UTR区,雷州黄牛的等位基因以B型占绝对优势,基因频率为0.9344,等位基因A的频率为0.0656;基因型频率以BB型占优势,占到牛个体数的87%。等位基因和基因型频率分布态势与国外品种海福特牛和西门塔尔牛相同,基因和基因型频率大小也与海福特牛和西门塔尔牛相近。在GHR基因第10外显子位点,雷州黄牛的等位基因频率与南阳黄牛和利木赞接近,而基因型频率差异较大,雷州黄牛以杂合AB基因型占绝对优势,达到0.95。这可能是取样或基因型影响出栏牛的收购等级,AB基因型牛可能具有较高等级的原因所致。     

蒙古族传统相马术理论及其改进性研究

[目的]将内蒙古传统相马术和现代分子生物学技术相结合,找出一种更为科学简便的相马方法。[方法]对试验马COMT基因位点单个基因的多态性与性格性状关联性进行研究,并从分子生物学角度探讨马的性格遗传特点。[结果]电泳检测表明:COMT基因第2外显子的PCR产物与Marker DL2000相比,其位点在250 bp下方。PCR-SSCP分析结果表明:马基因组DNACOMT基因第2外显子存在单核苷酸多态性,所检测的30个个体中,发现2种基因型,即AA和AB型。测序结果表明:COMT基因的第2外显子161位置存在一个多态位点。COMT基因第2外显子多态性与马的竞争性有显著相关性,与其它性格没有显著相关性,AB型马的竞争性比AA型强。[结论]该研究为马的鉴定提供了新的技术支持。     

牛生长激素受体基因遗传变异研究

以南阳牛、南阳牛、中国西门塔尔牛为试验动物,利用PCR-SSCP和PCR-RFLP技术研究了GHR基因上第8外显子、第9外显子、5’端、第3外显子的遗传变异。结果表明在GHR基因第8外显子、5’端既没发现PCR-SSCP多态,又没发现HaeⅢ、HindⅢ、PstⅠ、SpeⅠ、MspⅠ、RsaI酶切多态;在GHR基因第9外显子、第3外显子也没检测到PCR-SSCP多态。     

马MxA基因第12外显子多态性检测研究

[目的]建立检测马MxA基因第12外显子多态性的快速、准确方法。[方法]采用错配聚合酶链反应（mismatchPCR）对马MxA基因第12外显子进行扩增，对PCR产物进行限制性片段长度多态性分析（RFLP），鉴定MxA基因cDNA第1790位核苷酸点突变，并对PCR产物进行核苷酸序列分析。[结果]马MxA基因第12外显子区域存在AA、AB、BB3个基因型；位于cDNA序列第l790位点的碱基发生变异（由汕c），引起了MxA蛋白编码区第562氨基酸由色氨酸变成半胱氨酸的变异；使用mismatchPCR—RFLP法所得PCR产物特异性序列，与RFLP分析结果相符。[结论]采用mismatch PCR—RFLP对马MxA基因12外显子的多态性进行检测操作简单，结果准确。     

马MxA基因第13外显子的多态性研究

[目的]研究4个品种马MxA基因第13外显子的多态性。[方法]根据GenBank中已公布的MxA基因序列设计引物,利用PCR技术从三河马、锡尼河马、乌审马和巴尔虎马血液基因组DNA中扩增MxA第13外显子基因片段,利用PCR-SSCP方法检测该基因片段多态性并进行测序。[结果]只有乌审马MxA基因第13外显子存在多态性,第2 018位点发生了突变,鸟嘌呤（G）→腺嘌呤（A）,由此导致氨基酸发生改变,由谷氨酸（G lu）→丙氨酸（A la）。[结论]该研究为探讨马MxA蛋白基因抗病毒作用奠定了基础。     

宁强矮马考察报告

宁强矮马,产于陕西宁强县嘉陵江的西北部,秦岭南坡区的深山峡谷之中。它占当地马匹总数不到10％,体高106cm以下,属乘(驮)用型马种。     

贵州矮马与伊犁马生长激素基因5’侧翼区的结构特征

为了摸索贵州矮马生长发育的调控机制,探明贵州矮马与伊犁马生长激素基因5’侧翼区的结构特征,以4～5龄的贵州矮马和7～8龄的新疆伊犁马为研究对象,采用直接测序法从两种马基因组中克隆了生长激素(GH)基因5’侧翼区的DNA序列,并进行生物信息学分析。结果表明:1)从基因组中克隆的711bp片段为GH基因5’侧翼区序列;2)两个马品种的GH基因5’侧翼区中都存在TATA box、CAATbox、GC box和Octamer位点等真核生物启动子结构;3)从伊犁马GH基因5’侧翼区中检测到1个位于30bp处的突变位点发生了G→C颠换,由此新增了1个转录因子upstream stimulatory factor(USF)结合位点;4)从贵州矮马和伊犁马GH基因的5’侧翼区序列中发现了MZF1、CdxA、Nkx-2、AML-1a和c-Myc等19种共58个转录因子的结合位点。结论:克隆的711bp基因序列中存在大量的转录调控元件。     

应用血清LDH同工酶对宁强矮马亲缘关系的分析

检测宁强矮马和中型马血清,用聚丙烯酰胺凝胶电泳,一般可获5条LDH同工酶酶带。薄层自动扫描仪扫描、计算酶谱曲线活力区带的百分含量,经t检验差异均不显著(P>0.05)。将5个马种血清LDH同工酶活力区带百分含量,采用标准化欧氏平方距离的最小非类似值,以最短距离法聚类,西南马系统的4个马种在4.0197值时聚为一类(宁强矮马和中型马为0.2296,建昌马和安宁果下马为3.2315),而伊吾马在13.659值时才与西南马聚为一类。     

紫云县贵州矮马资源评价

对贵州省紫云县境内现存的贵州矮马数量及分布进行了调查。全县12个乡镇中,贵州矮马存栏1 421匹,其中公马611匹,母马810匹;其毛色以骝毛和栗毛为主。雌雄矮马的体高、体长、胸围、头长和颈长没有明显差异,但雄性个体的管围明显较粗。雄性矮马的红细胞数量较多但体积较小,血小板和中间细胞数量较高,血清总胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇水平较雌性的低;雌性矮马妊娠时血小板数量和低密度脂蛋白水平代偿性下降,但中性粒细胞数量和CO2结合能力升高。雄性矮马与雌性矮马的使役能力没有明显差别。目前贵州矮马混养、无序买卖及疾病预防不足是其死亡率高、体高上升的重要原因。     

贵州矮马、西南马和伊犁马刺豚鼠信号蛋白基因的多态性

为了探索贵州矮马、西南马、伊犁马刺豚鼠信号蛋白(Agouti signaling protein,ASIP)基因与马品种毛色之间的关系,采用缺口PCR技术分析了141份贵州矮马、西南马、伊犁马的ASIP基因型,并进行克隆测序。结果表明,扩增出的793 bp和385 bp 2个片段为ASIP基因,793 bp片段中缺失一段11 bp的核苷酸,定义为a基因型,385 bp片段结构完整,定义为A基因型;3个马群体中A等位基因在骝毛中占优势;但aa基因型对应的毛色只有小部分为黑毛,绝大部分为栗毛、骝毛和复色毛,与已知的aa基因型决定黑毛的规律不相符,说明aa基因型可能不是中国马品种黑毛的决定基因型。     

中国西南地区芥菜型油菜资源遗传多样性分析

 【目的】研究中国西南地区丰富的芥菜型油菜资源遗传多样性，为芥菜型油菜资源的保护和育种利用提供有益的数据。【方法】选取以西南地区为主的73份芥菜型油菜资源，分别进行14个随机引物RAPD标记多态性分析结果的聚类分析和15个主要植物学性状量测数据的聚类分析。【结果】RAPD标记多态性分析结果的聚类分析显示为3大类，共15个亚类：四川盆地资源为第1大类，含川东、川南、川北和重庆来源等6个亚类；盆周及盆周高原和云南部分资源为第2大类，分川东南、川西南和川西北来源等4个亚类；云贵高原及长江两岸为第3大类，以贵州、云南来源的资源为主，分贵阳周边、金沙江流域和云南中部来源等5个亚类。植物学性状量测数据的聚类分析显示为4大类，共14个亚类：第1大类以川东南、重庆和云南来源的资源为主，分3个亚类；第2大类以川南、川北、云南和贵州来源的资源为主，分4个亚类；第3大类以贵州、四川来源的资源为主，分4个亚类；第4大类以川西北来源的资源为主，含3个亚类。【结论】西南地区芥菜型油菜资源间差异明显，具有丰富的遗传多样性；RAPD标记多态性分析结果和植物学性状量测数据的聚类分析结果，显示分类主要遵循地域和生态环境规律，可分清芥菜型油菜资源间的亲缘关系和遗传距离远近；在分子水平上，分类结果可能更深入和准确可靠。