猪胸膜肺炎放线杆菌致病性生物Ⅰ型PCR诊断方法的建立

根据已发表的猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)apxⅣ毒素基因序列的保守区域设计1对特异性引物,建立检测致病性APP 1~12血清型标准菌株的PCR方法。在双盲试验中,血清1型(2株)、3型、5型和7型临床分离株与致病性APP 1~12血清型标准菌株一样,均能扩增出预期大小为876 bp的apxⅣ片段,可检出最低活菌数为2×102cfu.mL-1,最低检出DNA含量为9 pg.μL-1。检测疑似传染性胸膜肺炎感染猪的10份病变肺组织样品,阳性6份,与细菌分离鉴定结果一致。而副猪嗜血杆菌1~15型(缺失8型)、猪放线杆菌、猪源多杀性巴氏杆菌、猪霍乱沙门氏菌、奇异变形杆菌、猪源支气管败血波氏菌、猪丹毒杆菌的PCR检测结果都为阴性。结果表明:该PCR方法可用于致病性APP生物Ⅰ型的快速特异性检测和诊断。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌LAMP诊断方法的建立及耐药性调查

为建立快速诊断猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)的方法和耐药情况,根据Gen Bank中的APP apx IVA基因,设计合成2对引物,通过环介导等温扩增技术(LAMP)扩增条件的优化,建立了APP LAMP诊断方法,同时对分离到的APP进行耐药性分析。结果显示,建立的LAMP诊断方法最低核酸检测量为2 pg/μL,对猪源大肠杆菌、猪源沙门氏菌、猪源支原体、副猪嗜血杆菌、猪源多杀性巴氏杆菌的扩增结果均为阴性,扩增反应30 min内完成,结果肉眼可见。分离得到的31株APP,耐药性较强。结果表明,建立的方法可满足基层现场快速检测需要,对分离得到的31株APP耐药性分析表明,APP耐药性较严重。     

猪传染性胸膜肺炎的发生与防冶

猪传染性胸膜肺炎,又叫猪嗜血杆菌病、猪嗜血胸膜肺炎,是由胸膜肺炎放线杆菌引起的一种以呼吸系统为主的接触性传染病。该病的主要特征是肺炎和纤维性胸膜炎。 一、病原 本 病 病 原 为 猪 胸 膜 肺 炎 放 线 杆菌,为革兰氏阴性小球杆菌,并具有多形性,有荚膜,无运动,不形成芽胞     

猪放线杆菌性胸膜肺炎的诊治

猪放线杆菌性胸膜肺炎是由猪胸膜肺炎放线杆菌引起的一种伴有胸膜炎的出血性坏死肺炎．可发生于仟何年龄的猪只，呈世界性分布。     

间接ELISA检测胸膜肺炎放线杆菌血清1型抗体的研究

进行了胸膜肺炎放线杆菌血清1型荚膜多糖的提取制备实验,并以该抗原作为诊断抗原建立了检测胸膜肺炎放线杆菌血清1型抗体的间接ELISA方法。此抗原与猪巴氏杆菌病、猪布氏杆菌病、仔猪副伤寒等阳性血清无交叉反应;与胸膜肺炎放线杆菌血清2型、3型、4型、6型、7型、8型、9型、10型标准阳性血清也无交叉反应。可用于猪群感染血清1型胸膜肺炎放线杆菌的诊断和监测。     

胸膜肺炎放线杆菌的PCR诊断方法研究

采用胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,App)外膜脂蛋白Om/A基因序列合成了1对特异性引物,建立了用于检测App的PCR方法.结果表明:经过PCR扩增,3株App分离株均能扩增出长约950 bp的预期DNA片段,而大肠埃希氏杆菌(Escherichia coli)、沙门氏菌(Salmonella sp.)、支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)、葡萄球菌(Staphylococcus sp.)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)、变形杆菌(Proteus sp.)和链球菌(Streptococcus sp.)等与猪病有关的8种病原菌均为阴性;App DNA最低检出浓度可达55.0 ng/mL,且试验结果与传统的生化反应鉴定结果完全一致,符合率达100%,证明此方法特异性和敏感性强,可用于猪传染性胸膜肺炎的快速诊断.     

猪传染性胸膜肺炎的防治

猪传染性胸膜肺炎也叫猪噬血杆菌胸膜肺炎,以胸膜炎和肺炎症状为主要特征。在欧洲、美国、阿根廷、加拿大、南美、墨西哥、澳大利亚、日本、韩国及我国均有发生,对养猪业威胁很大。病原菌为胸膜肺炎放线杆菌,革兰氏染色阴性,兼性厌氧,主要寄生于猪呼吸道。不同年龄、不同品种、不同性别的猪均有易感性,但仔猪比成猪易感陛强,尤其三月龄仔猪最为易感,     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌变异株的分离与鉴定

对江苏泰兴某猪场疑似猪传染性胸膜肺炎病料进行实验室分离培养,成功分离到1株猪传染性胸膜肺炎放线杆菌,并对其进行生化特性、双抗夹心ELISA鉴定。为进一步分析该分离株的血清型,针对ApxIVA和ApfA保守基因设计2对检测引物,PCR结果表明:该分离株未扩增出预期大小的片段,说明该分离株很有可能是1株猪传染性胸膜肺炎放线杆菌变异株,其血清型还有待进一步鉴定。     

复合PCR鉴定胸膜肺炎放线杆菌和多杀性巴氏杆菌方法的建立及初步应用

在已经建立的胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌的单项PCR诊断方法的基础上,通过对扩增条件和引物的筛选,成功地建立胸膜肺炎放线杆菌(App)、多杀性巴氏杆菌(PM)复合PCR诊断方法,利用1次PCR反应,即可同时扩增App的342bp和PM的457bp的特异性片段。检测灵敏度分别达9.7pgDNA/1.4×103OCFU和16pgDNA/2.3×103OCFU,用建立的方法检测临床分离的23株可疑菌株,App阳性8株,PM阳性2株,与其它鉴定方法检测结果相符,表明该方法的建立能够对这2种疾病进行临床鉴别诊断。     

猪传染性胸膜肺炎的诊断和防治

<正>猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起猪的一种高度传染性呼吸道疾病,又称为猪接触性传染性胸膜肺炎。以急性出血性纤维素性胸膜肺炎和慢性纤维素性坏死性胸膜肺炎为特征,急性型呈现高死亡率。一、病原猪胸膜肺炎放线杆菌为革兰氏染色阴性的小球杆状菌或纤细的小杆菌,有的呈丝状,并可表现为多形态性和两极着色性。有荚膜,无芽孢,无运动性,有的菌株具有周身性纤细的菌毛。本菌对外界抵抗力不强,对常用消毒剂和温度敏感。     

二温式PCR检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌方法的建立与应用

为了探索简便、快速确诊猪传染性胸膜肺炎的方法,根据猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)apx IV基因序列,设计合成1对特异性引物,建立聚合酶链反应(PCR)检测APP的方法。采用该方法对APP和其他6种猪病病原核酸进行检测,结果只对APP扩增出与预期大小相符的422bp DNA片段,而对其他6种猪病病原核酸的扩增结果为阴性。该PCR最低可检出10pg的APP DNA。对送检的46份可疑病猪组织进行检测,结果有19份样品为阳性,27份为其他病原感染。     

猪胸膜肺炎放线杆菌16SrDNA基因的克隆及序列分析

为了阐明猪胸膜肺炎放线杆菌16S rDNA基因的遗传变异情况,选择猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)的16S rDNA基因设计引物,应用聚合酶链反应(PCR)扩增APP的16S rDNA基因的部分序列,将该产物克隆到pMDI8-T载体上,重组质粒通过菌落PCR鉴...     

Cloning, Expression of apxI Gene of Actinobacillus pleuropneumoniae and Development of ELISA

Based on the published nucleotide sequence of the apxICA of Actinobacillus pleuropneumoniaein Genbank(S4074), a pair of primers were designed. A 3 640 bp(4 687 -8 326 bp)gene fragment was ampli-fied by PCR from the isolated strain of A. pleuropneumoniae serovar 1. Then, it was cloned into pMD18-T,identified by both restriction endonuclease and sequence analysis, and inserted into pET-28a expression vectorto yield the expression plasmid. SDS-PAGE result indicated expression of apxICA in BL21 (DE3), Westernblot analysis showed the protein's immunogenicity. Using the expressed protein, ELISA was established to de-tect serum antibody against ApxI. The feature of ELISA to detect highly virulent A. pleuropneumoniae strainsinfection was proved by primary clinical application.     

一例猪传染性胸膜肺炎的诊治

猪传染性胸膜肺炎是严重危害现代养猪业的一种呼吸道传染病,广泛流行于全国各地。在内蒙古包头市一养猪场分离培养出1株猪传染性胸膜肺炎放线杆菌,并通过治疗试验发现氟苯尼考和强力霉素对该菌株治疗效果好。对猪传染性胸膜肺炎的病因进行了分析,并提出了控制疫情的有效措施。     

鲁西地区猪胸膜肺炎放线杆菌流行病学调查

1材料与方法 1．1材料 1．1．1病料及鼻拭子。疑似传染性胸膜肺炎猪的肺病料186份以及545份无临床症状健康猪鼻拭子均来自鲁西地区的22个猪场。     

猪PRRSV、PCV2、大肠杆菌与沙门氏菌四重混合感染的报道

应用RT-PCR、PCR和细菌分离等方法,对陕西某规模化养猪场发生的仔猪渐进性消瘦、呼吸困难和母猪繁殖障碍为主要特征的疾病进行了流行病学调查和病原分离鉴定。结果表明,该猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和2型猪圆环病毒(PCV2)感染相当严重,从出现胸肺粘连的病猪实质脏器中可分离到致病性大肠杆菌和沙门氏菌,未分离到胸膜肺炎放线杆菌。该猪场此次疫情主要是由于猪PRRSV、PCV2、大肠杆菌和沙门氏菌四重混合感染而引起。     

猪胸膜肺炎放线杆菌毒素I基因的克隆、表达及其ELISA检测方法的建立

 根据胸膜肺炎放线杆菌S4 0 74菌株毒素I的序列 ,设计了 1对引物 ,从本室自己分离的菌株中扩增了猪胸膜肺炎放线杆菌毒素I的结构基因 (apxICA) ,扩增的DNA片段大小为 36 4 0bp(4 6 87～ 832 6bp) ,将其克隆到pMD18 T载体中 ,酶切鉴定和序列测定后 ,进一步将其插入pET 2 8a中构建了原核表达载体 ,SDS PAGE和Westernblotting分析表明 ,该基因在大肠杆菌BL2 1(DE3 )中获得了表达 ,而且表达的蛋白质具有免疫学活性。利用表达的蛋白作为     

Cloning and Expression of Actinobacillus pleuropneumoniae Gene Coding for TbpA and Development of an Indirect TbpA-ELISA

This study presents the cloning and expression of gene encoding transferrin-binding protein A from Actinobacillus pleuropneurnoniae in Escherichia coli expression system and the development of an indirect TbpA-ELISA. The gene coding TbpA was amplified from the A. pleuropneumoniae serotype 2 genome using polymerase chain reaction and cloned to pET-28b expression vector under the control of strong, inducible T7 promoter. The recombinant plasmid was expressed in E. coli BL21 （DE3）. The expressed fusion protein was analyzed using SDS-PAGE and Western blotting. The diagnostic potential of recombinant TbpA （rTbpA） was evaluated through an antibody-detection indirect ELISA based on the purified rTbpA. The TbpA antibodies were detectable in mice on day 7 after vaccination with purified rTbpA protein or infection with A. pleuropneumoniae serotype 10 with the TbpA-based ELISA. In addition, the TbpA-ELISA was able to detect 12 serotyping rabbit antisera postinoculation （PI） with A. pleuropneumoniae 12 serotypes experimentally. The comparable result was obtained by detecting the 117 clinical serum samples using, respectively, the TbpA-ELISA and indirect hemagglutination test （IHA） based on multiplex antigen. The result indicates that the TbpA-ELISA was the more sensitive method compared with the Mix-IHA method because of its consistent presence in A. pleuropneumoniae serotypes. In conclusion, the conserved TbpA of A. pleuropneumoniae can be used for the development of a cross-serotype diagnostic method for the detection of antibodies against A. pleuropneurnoniae.     

胸膜肺炎放线杆菌ApxIA N端基因的克隆与原核表达

[目的]为猪接触传染性胸膜肺炎的诊断和基因工程疫苗的研制提供理论依据。[方法]以胸膜肺炎放线杆菌（APP）血清10型菌株为材料,采用PCR技术对其ApxIA的N端基因进行扩增,将扩增产物转入克隆载体和表达载体中进行克隆和表达,用重组表达质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,利用免疫印迹分析鉴定ApxIAN端基因表达产物的免疫活性。[结果]ApxIA N端基因PCR扩增产物与标准10型ApxIAgene（D16582）的同源性为99.7%。NcoI和HindⅢ双酶切鉴定结果表明,目的基因已成功转入原核表达载体pET-32a中。含重组质粒的大肠杆菌BL21经IPTG诱导后表达了相对分子量为779 kDa的目的蛋白,该蛋白分子量与标准ApxIA蛋白（Marker）相同。[结论]SDS-PAGE电泳和免疫印迹检测结果表明,ApxIAN端基因在表达载体中得到高效表达,且表达产物具有免疫活性。