卷叶贝母多倍体鳞茎诱导方法研究

[目的]利用组织培养技术快速诱导生成卷叶贝母（Fritillaria cirrhosaD.Don）多倍体鳞茎。[方法]用一定浓度的秋水仙素溶液浸泡经预分化培养的卷叶贝母紧密愈伤组织团块,再经过诱导分化培养获得多倍体鳞茎。[结果]用浓度为1.2 g/L的秋水仙素溶液浸泡处理卷叶贝母紧密愈伤组织团块24 h后,接种在MS＋6-BA 1.0 mg/L＋NAA 0.3 mg/L的分化培养基上培养,其多倍体鳞茎的诱导率最高为83.3%,细胞染色体数为2n=4x=48,总生物碱含量为0.249%。[结论]用组织培养技术获得优质高产卷叶贝母多倍体鳞茎的方法是可行的。     

山东桔梗多倍体诱导与鉴定

在离体培养条件下,比较了单用不同浓度秋水仙素和0．2％秋水仙素与不同浓度二甲基亚砜（DMSO）混用对山东桔梗愈伤组织诱导多倍体的效果。结果表明：用0．2％秋水仙素和2％DMSO浸泡山东桔梗愈伤组织16h,多倍体诱导率最高,达43．3％。桔梗多倍体植株叶颜色深、有皱褶,叶片大且厚,茎秆粗壮,节间距长。经显微鉴定,多倍体叶气孔增大,但单位面积气孔数目减少。     

川贝母多倍体诱导条件的优化及含量测定

采用正交试验法考察秋水仙素浓度、浸泡时间、二甲基亚砜体积分数、处理温度对川贝母(Fritillaria cirrhosa)愈伤组织多倍体诱导的影响.以多倍体诱导率为指标,用正交试验表L9(34)进行试验,筛选最佳诱导条件.在考察的因素中,对川贝母多倍体诱导率影响的大小次序依次为秋水仙素浓度＞浸泡时间＞二甲基亚砜体积分数＞处理温度.多倍体诱导条件的最优组合是秋水仙素浓度为900 mg/L、浸泡时间为48h、二甲基亚砜体积分数为4％、处理温度为20℃,在此条件下,其诱导率可达94.3％;细胞染色体鉴定结果为四倍体染色体数为2n=4x=48,诱导后的愈伤组织为多倍体;对野生、组培二倍体、组培多倍体川贝母鳞茎进行有效药用成分生物碱总含量测定,其中组培多倍体生物碱总含量最高为0.657％.     

宁夏枣树多倍体诱导初报

以灵武长枣、中宁圆枣为试验材料,在田间利用TDZ诱导枣树愈伤组织和芽再生,结合诱变剂秋水仙素诱导枣树多倍体。结果表明:不同浓度TDZ处理灵武长枣和中宁圆枣,在浓度为4 mg/L时,愈伤组织等级最高。同浓度秋水仙素处理灵武长枣和中宁圆枣,在浓度为0.05%时,枣树诱变率最高分别为3.33%、4.33%。田间利用TDZ诱导枣树愈伤组织和芽再生,结合诱变剂秋水仙素诱导枣树多倍体,在枣树培育多倍体育种上值得推广应用。     

秋水仙素浸泡法对黑果腺肋花楸多倍体的诱导及初步鉴定

以黑果腺肋花楸组培苗茎尖、叶片和继代愈伤组织为材料,探索秋水仙素不同浓度和不同处理时间对不同外植体诱导的愈伤组织的存活率、再生芽数、增殖系数和多倍体发生的影响;并对秋水仙素处理后不同外植体诱导产生的再生植株,经3次继代培养后生长30d的植株的染色体倍性进行镜检。结果表明:不同外植体的存活率和出芽率随秋水仙素浓度的增高和处理时间延长而降低;其中,黑果腺肋花楸愈伤组织的存活率高于茎尖和叶片。经秋水仙素处理后,3种外植体均能诱导多倍体发生;处理浓度和时间的增加有利于提高染色体加倍率,但外植体的死亡率随之增加。当愈伤组织在秋水仙素浓度为2 000mg/L,处理24h时,叶片愈伤组织增殖系数为2.4,存活率为52%。以植株矮化和茎秆粗壮为依据筛选的再生植株中鉴定出47株假定多倍体,但大多为混倍体(嵌合体)。叶片诱导的愈伤组织,经1 500mg/L秋水仙素浸泡处理24h后,诱导再生的生根植株中获得1株整株均一加倍的四倍体植株。     

氟乐灵对萱草多倍体的诱导

采用浸泡和混培2种方法对萱草的愈伤组织和不定芽进行多倍体诱导探索。结果表明,2种试材在2种诱导方法下均能够获得多倍体;以愈伤组织作为外植体时,多倍体的诱导以氟乐灵浓度0.007%混培处理5 d的效果最好,成活率可达50%,诱导率达到35.74%;以不定芽作为外植体时,萱草多倍体的诱导以氟乐灵浓度0.01%浸泡处理6 h的诱导率最高,可达21.75%,成活率为26.67%。氟乐灵可以取代秋水仙素作为萱草多倍体诱导的有效试剂。     

花蕾型金银花同源四倍体的诱导和鉴定

[目的]为选育金银花优良品种提供材料。[方法]以当年生银翠蕾嫩枝茎段为外植体,进行愈伤组织和不定芽培养,对获得的不定芽采用秋水仙素浸泡法和培养基中添加秋水仙素法诱导多倍体,并进行染色体鉴定。[结果]染色体观察结果表明,7:30 a.m.取材,用0.2%的秋水仙素溶液浸泡3 h,用1.0 mol/L盐酸溶液在60℃下处理18 min的材料中,中期细胞多,染色体分散和着色均较好,而且可以看到清晰的点状染色体。染色体鉴定结果表明,秋水仙李浓度对多倍体诱导率有显著影响,用0.4%秋水仙李浸泡16 h的诱导率为50.0%,在秋水仙李浓度为1.0 g/L的培养基中培养8 d的诱导率为43.8%。[结论]该研究为金银花同源四倍体的诱导与鉴定提供了一定的试验依据。     

秋水仙素对金达苜蓿染色体加倍效果的影响

【目的】获得金达苜蓿四倍体的纯合体,为不同倍性苜蓿遗传特性研究及不同倍性间实现基因的流动奠定基础。【方法】以金达苜蓿(Medicago sativa L.cv.Jinda)种子(2n=16)为材料,利用秋水仙素结合组织培养,研究了秋水仙素不同质量浓度(0.02,0.07,0.12mg/mL)、不同处理时间(1,3,7d)对金达苜蓿愈伤组织诱导效果及染色体加倍效果的影响,并从形态学和根尖染色体观察对变异株进行倍性鉴定。【结果】秋水仙素质量浓度和处理时间2个因素对金达苜蓿诱变效果均有一定程度的影响,随着秋水仙素质量浓度的升高、处理时间的延长,愈伤组织的诱导率和分化率均下降,成苗率则规律不明显,其中0.07mg/mL秋水仙素处理3d的诱导效果最好,愈伤组织的诱导率达到60.5%,愈伤组织分化率为33.63%,诱变幼苗成苗率为24.1%。倍性鉴定结果表明,获得的变异植株为四倍体与二倍体的混倍体。【结论】0.07mg/mL秋水仙素处理3d是获得多倍体变异幼苗的最佳条件,获得了四倍体和二倍体的混倍体。     

水稻花药培养的影响因素研究

为更好地研究水稻单倍体育种和转基因技术，加速水稻育种进程，以10份寒地水稻品种为试验材料，采用单因素试验方法，研究培养基的琼脂浓度、激素配比、马铃薯水提取液附加物添加及培养方式等因素对水稻花药培养愈伤组织诱导率的影响，优化寒地水稻品种花药组织培养条件。结果表明：10个品种花药组织培养，愈伤组织诱导率差异明显；在琼脂浓度为0．75％左右时，愈伤组织的诱导率达到最高；培养基中激素配比为KT（2mg·L^-1）＋IAA（1mg·L^-1）时诱导效果最佳；培养方式研究中，在双态培养方式下花药愈伤组织诱导率最好，其次为液态培养，再次为固态培养；培养基中添加马铃薯水提取液各处理间差异不显著。     

黄花菜圆球茎经秋水仙素处理后再生苗加倍效果观察

将黄花菜叶片、花葶、花梗外植体进行组织培养,诱导获得的愈伤组织,分割、继代培养于6BA2mg/1的MS培养基上,逐步形成圆球茎。在无菌状态下,以浓度0.05%的秋水仙素浸泡、棉花覆盖,或者用浸有加入2%二甲基亚砜的0.02%～0.05%秋水仙素溶液的棉花覆盖圆球茎,经24h处理后,除获得黄花菜多倍体试管苗外,还获得以下结果:(1)来源于叶片、花葶的圆球茎的多倍体苗染色体数目比较稳定(2n=4x=44),而来源于花梗的圆球茎的多倍体苗染色体数目类型较多:(2)用多倍体试管苗叶片培养形成的圆球茎,以及分化多倍体苗的圆球茎继代培养可再生大量的多倍体苗,为快速繁殖黄花菜多倍体苗提供了有效途径;(3)在多倍体苗的形态上明显表现出多种类型,为选择提供了机率。     

东方百合Tiber多倍体诱导及其快繁研究

在离体培养条件下,比较了不同浓度、不同处理时间的秋水仙素对东方百合的诱变效果。结果表明：浸泡法以0．02％的秋水仙素处理15h的诱变效果最佳,变异率达到13．3％。混培法以添加0．05％的秋水仙素处理15d效果最佳,变异率达到6．7％。对多倍体植株进行组织快繁,最佳增殖培养基为Ms＋BA 1．0mg/／L＋NAA0．1mg／L,增殖倍数达到1．5,生根培养基1／2MS＋IAA0．2mg／L,生根率为100％。     

白花蛇舌草组织培养物多糖的提取与含量测定

采用分光光度法测定并比较白花蛇舌草野生植株及其组织培养物中的多糖含量.结果表明,白花蛇舌草野生植株中的多糖含量为3.517%、试管苗中的多糖含量为3.041%、愈伤组织中的多糖含量为4.825%.白花蛇舌草野生植株与试管苗的多糖含量相当,愈伤组织中的多糖含量较野生植株的高.为通过细胞大量培养技术提取白花蛇舌草免疫多糖提供科学依据.     

用秋水仙素对马铃薯一单倍体和双单倍体染色体加倍的研究

本文报道了用双单倍体的实生籽和一单倍体无性系试管苗,按常规方法和改良方法对染色体加倍的试验结果。试验表明:在无菌条件下,用0.2～0.3％的秋水仙素浸种12～48小时后,再用组织培养的方法在无菌条件下培养处理实生苗的改良浸种法,与常规方法相比能有效克服秋水仙素对根的毒害作用,提高处理苗的成活率,从而大大提高加倍频率(加倍频率最高达70.96％);对一单倍体无性系,采用秋水仙素浸试管苗切段后再用组织培养使之分化苗的改良方法也能有效地提高加倍频率(最高达70％)。而常规的幼芽处理法在干旱地区是无效的。     

高秆野生稻(Oryza alta L.)叶片组织培养中通过胚状体获得再生植株

高秆野生稻叶片可诱导出胚性和非胚性2种愈伤组织。胚性愈伤组织在合适的分化培养基上可不断形成胚状体,进而大量获得再生植株,再生植株以绿苗为主,未见绿白嵌合苗。源于不同脱分化培养基的胚性愈伤组织具有相似的胚状体形成和植株再生能力。诱导胚性愈伤组织以N6培养基添加NAA1 mg/L、2,4-D2 mg/L和ZT0.5 mg/L效果最好,形成胚状体并分化植株以MS培养基添加NAA2 mg/L和IAA0.5 mg/L为佳。     

蜡梅的离体培养与植株再生

以蜡梅种子无菌苗子叶作为外植体,以改良MS和MS作为基本培养基,添加不同激素组合,筛选出诱导蜡梅愈伤组织产生和分化的最佳培养基,建立蜡梅的再生体系.试验结果表明,改良MS＋6-BA 1.0 mg/L＋NAA0.5 mg/L＋KT 0.5 mg/L＋IBA 0.2 mg/L＋2.4-D 0.2 mg/L能诱导蜡梅愈伤组织的产生和分化,再生植株在改良MS＋6-BA 1.0 mg/L＋NAA 0.1 mg/上增殖系数最高,能达到2.7.1/2 MS＋NAA 0.1 mg/L能有效促进蜡梅生根,生根率在70%以上,而在未添加NAA的1/2 MS中生根率为10%.     

油桃组织培养及再生材料的原生体制备研究

以油桃茎段为试验材料进行组织培养,诱导不定芽的增殖和进行愈伤组织诱导,获得茎段、叶片、愈伤组织等大量无菌材料,给原生质体制备及后续细胞融合工作提供了可重复性的试验材料.初始培养的最适培养基为:MS+1.5mg/L BA+0.1mg/L IBA,诱导率达82.9%;诱导不定芽增殖的最适培养基配方为MS+1.5mg/L BA+0.2mg/L IBA;诱导愈伤组织的最佳培养基配方为MS+1.5mg/L 2.4-D+0.5mg/L NAA+0.3mg/L BA.原生质体制备以嫩叶为分离原生质体的最佳材料,而最佳的分离酶组合为纤维素酶1%+果胶酶2%,在此条件下,原生质体的产量和活性分别为9.2×107个/g和80.4%.     

半夏的组织培养与快繁试验

以传统中药半夏的小块茎为外植体进行组织培养，对适合不定芽分化增殖、生根的培养基进行了研究。结果表明，利于愈伤组织诱导的培养基为MS＋6-BA2．0mg／L＋NAA0．2mg／L，利于不定芽增殖的培养基为MS＋6-BA2．0mg／L＋NAA0．5mg／L，利于生根的培养基为MS＋NAA0．5mg／L。试验表明，应用本项组织培养技术大批量生产优质半夏种苗是可行的。     

葡萄胚珠诱导成苗的研究

通过对葡萄几个品种胚珠愈伤组织的诱导、再分化,以胚状体发生途径实现植株再生。结果表明:以葡萄的胚珠为外植体,在附加不同浓度的2,4-D与6-BA的MS、B5和NN-1969培养基上培养,愈伤组织诱导以NN+2,4-D0.5mg/L+6-BA1.0mg/L培养基最佳,诱导率为84.1%,胚性愈伤组织诱导率为79.5%;将胚性愈伤组织置于含NAA0.03mg/L和6-BA0.5mg/L的NN培养基中,胚状体诱导率为6%～15%;胚状体在无激素MS培养基中的成苗率为0%～20%。     

Somatic Embryogenesis and Plant Regeneration from Leaflets of Fritillaria ussuriensis M.

A method for the production of somatic embryos and subsequent plant regeneration for fritillaria ussuriensis M.is described.Whole leaflet explants,derived from plantlets grown in vitro,formed light yellowith embryogenic calli within one month of culture in the dark.Somatic embryogenesis was obtained after a 28d incubation on MS induction medium supplemented with 2mg/L 2,4-D 0.5mg/L BA,0.5mg/L KT and 500mg/L CH followed by transfer to a second N medium containing 0.5mg/L KT and 100mg/L CH.Somatic embryos were transferred to MS medium with 0.1mg/L NAA placed in the light for regeneration ,After two weeks,mature somatic embryo developed into whole phantlet.     

基因枪法获得GNA转基因小麦植株的研究

 以小麦品种京 411作为基因枪转化的靶材料 ,取其未成熟胚诱导愈伤组织 ,经过 10 d左右培养后 ,用含有雪花莲凝集素 (Galanthus nivalis agglutinin ,GNA)和 bar基因的质粒 p BI12 1- 2轰击 80 0个胚性愈伤组织 ,在含有4mg/ L Basta溶液的培养基上进行筛选 ,分化及生根培养 ,获得 6 7棵再生植株。田间涂抹 Basta溶液 (5 0、75 m g/ L)检测和接麦蚜实验 ,提取转基因植株基因组 DNA,用扩增 GNA基因的引物经 PCR扩增 Southern杂交 ,结果表明利用基因枪转化已从 T2 代获得了 8株含有编码 bar/ GNA基因的转基因植株。