莲藕多酚氧化酶的催化特性检测

本试验以冰浴研磨离心法制备莲藕多酚氧化酶酶液,用分光光度法系统的研究了pH值、温度、底物浓度、抑制剂对酶活性的影响.结果表明,以邻苯二酚为底物,莲藕多酚氧化酶的最适pH为7.0,最适温度为20℃;KM为0.18mol/L,Vmax为0.900OD/min;抗坏血酸和硫脲为强烈抑制剂;莲藕多酚氧化酶具有底物专一性.     

澳洲青苹多酚氧化酶特性的研究

以邻苯二酚为底物,对澳洲青苹中的多酚氧化酶进行了探讨。分别研究了pH值、温度、底物浓度及抑制剂等因素对多酚氧化酶活性的影响,结果表明:澳洲青苹多酚氧化酶最适pH值为6.5;最适温度为35℃;90℃处理3min,多酚氧化酶活性基本被抑制;添加浓度为125mg/kg抗坏血酸或者浓度为600mg/kg的柠檬酸或者浓度为50mg/kg的亚硫酸氢钠后,多酚氧化酶活性分别为对照的36%,38%和23%。澳洲青萍多酚氧化酶的米氏方程参数为:Km=0.137mol/L,Vmax=0.460U/min。     

有机相中脂肪酶催化合成乙酸芳樟酯的研究

[目的]以乙酸酐和芳樟醇为底物,采用脂肪酶催化法合成乙酸芳樟酯。[方法]通过考察不同种类的脂肪酶对该反应的催化效果,研究不同种类固定化载体对该脂肪酶活性的影响,探讨固定化后的脂肪酶在有机相中催化合成乙酸芳樟酯的条件。[结果]获得了一种对该反应催化效率较高的脂肪酶Novozym 435,得出其最佳固定化条件,确定了固定化后的脂肪酶在有机相中催化合成乙酸芳樟酯的最佳反应条件:异辛烷为最佳有机溶剂,以摩尔比为1∶1.5的芳樟醇和乙酸酐为底物,底物浓度为0.5 mol/L,在45℃下振荡反应24h,此条件下乙酸芳樟酯的收率较高。[结论]该反应体系的建立为今后工业生物催化法合成乙酸芳樟酯奠定了良好的基础。     

红毛丹果皮多酚氧化酶的酶促动力学研究

[目的]通过对红毛丹果皮多酚氧化酶的酶促动力学研究,寻找影响其催化活性的环境因素。[方法]以红毛丹果皮为试验材料,以邻苯二酚为底物,研究不同温度、不同pH、以及EDTA、Vc、亚硫酸氢钠、柠檬酸4种抑制剂和底物浓度对其多酚氧化酶活性的影响。[结果]红毛丹果皮多酚氧化酶的最适温度为40℃,最适pH值6.8;EDTA、Vc、NaHSO3、柠檬酸对多酚氧化酶活性表现出较好的抑制效果,其中EDTA的抑制效果较其他3种抑制剂强。[结论]利用低温、一定浓度的EDTA、Vc、NaHSO3、柠檬酸等试剂可抑制红毛丹果皮多酚氧化酶的催化活性,延长红毛丹果实的贮藏和运输时间,抑制其褐变;该研究结果为开发利用红毛丹果皮多酚氧化酶提供了理论依据。     

漆酶对苹果酚类物质的催化特性

【目的】研究白腐菌漆酶对苹果多酚类物质的催化特征,为开发新型具有生物活性的色素物质提供理论依据。【方法】采用单因素和正交组合试验确定白腐菌漆酶对苹果多酚酶促氧化的最佳条件,并对氧化产物的稳定性进行分析;然后对酚类氧化产物进行HPLC分析,初步确定产物组分,最后分析了苹果多酚及其氧化产物对.OH和DPPH.的清除作用。【结果】①漆酶对苹果多酚的最佳酶促氧化条件为:反应温度55℃,pH 5.5,苹果多酚质量浓度2.5 mg/mL,漆酶浓度3.5 U/mL。②氧化产物在363 nm处有最大吸收峰,对温度和光照不敏感,随着pH增大颜色加深。③HPLC分析表明,模式底物儿茶酚、表儿茶素、儿茶素分别能产生2,2,4种氧化产物。④抗氧化活性研究表明,质量浓度较高时,苹果多酚氧化产物对.OH和DPPH.的清除作用强于苹果多酚,且在一定质量浓度范围内呈现量效关系。在氧化产物质量浓度为500μg/mL时,对.OH的清除率最高,达85.42%;在氧化产物1 000μg/mL、反应时间为60 min时,对DPPH.的清除率最高,达94.32%。【结论】优化了漆酶催化苹果多酚氧化的工艺条件,苹果酚类物质经漆酶催化氧化后形成了新的可溶性、光热稳定性的有色产物,高质量浓度下产物的抗氧化活性较原提取物增强。     

不同树脂载体固定化多酚氧化酶的研究

[目的]研究树脂作为多酚氧化酶的固定化载体的可行性。[方法]以树脂为固定化载体,对多酚氧化酶进行固定化研究。[结果]通过单因子试验确定了固定化处理的条件：取50 mg多酚氧化酶,加入到10 g树脂载体中,吸附固定化2 h后,再用浓度0.04%的戊二醛溶液交联1 h。以确定的固定化处理条件对11种树脂的固定化效果进行了比较试验,筛选出最佳的多酚氧化酶固定化树脂载体D152。与其他固定化方法效果的比较结果表明,在固定化效率相近的情况下,以树脂D152为载体的固定化酶的单位酶活性更高,而且机械强度也更强。[结论]以筛选出的树脂载体D152作为固定化载体,制备固定化多酚氧化酶,不仅固定化效果好,而且单位酶活性高。     

海藻酸钠固定化果糖基转移酶的催化特性及其合成低聚果糖的研究

果糖基转移酶是酶法生产低聚果糖的关键催化剂，固定化酶具有催化特性稳定、重复使用及节省用酶成本的优势，开展固定化果糖基转移酶催化特性的研究对其工业化应用提供数据依据。以海藻酸钠为载体，采用包埋法固定化果糖基转移酶，探究其最适催化温度、热稳定性，最适反应pH及pH稳定性、酶催化动力学等催化特性，并对固定化果糖基转移酶催化合成低聚果糖的应用进行初步研究。结果表明：海藻酸钠包埋法固定化果糖基转移酶的最适催化温度为50℃,pH值为5.0,酶学动力学米氏常数K_m值为0.03 mg·mL^-1,采用该固定化酶以蔗糖为底物可制得48.03%纯度的低聚果糖。海藻酸钠固定化果糖基转移酶相对游离酶具备更好的与蔗糖底物的亲和性、更佳的温度与pH稳定性，具备更好的工业应用潜力。     

石榴果皮中多酚氧化酶测定最佳试验条件的确定

以陕西天红蛋石榴品种为试材,对石榴果皮中的多酚氧化酶(PPO)活性测定的最佳试验条件进行了初步研究,确定了其催化邻苯二酚氧化后产物的最高吸光度值,并分别研究了底物浓度、pH值、温度、反应后放置时间以及酶抑制剂浓度等条件对PPO活性的影响。结果表明:以邻苯二酚为底物时,底物浓度宜大于20mmol/L,其最适波长为420nm,最适pH值为6.8,最适温度为50℃,反应时间不宜超过20min,反应完成后在20min后测定PPO的活性最为稳定。抑制剂NaHSO4的有效抑制浓度为0.8mmol/L。     

固定化酶法制取茶黄素的工艺条件初探

本文探讨固定化多酚氧化酶氧化儿茶素制取茶黄素（TFs）的最佳反应条件，初步确定了酶法生产高纯度茶黄素的四个重要因素pH值、通气量、底物浓度和反应时间的最佳参数范围，即酶与浓度为0．1％的底物按1：1．25（Active unit／ml）pH=5．0，37℃=水浴通氧20L／min，加金属辅酶的情况下，反应2小时得率最高，最高得率可达30％以上。     

台湾青枣多酚氧化酶特性的研究

采用分光光度法,对台湾青枣多酚氧化酶(PPO)的催化特性、最适波长、最适反应时间、最适温度、最适pH值、热稳定性等性质进行了研究,同时研究了抗坏血酸、柠檬酸、L-半胱氨酸3种添加剂对台湾青枣多酚氧化酶活性的影响,以寻求在果品的保鲜以及果肉初加工过程中抑制PPO活性的各控制手段与果品加工的有机结合方法,为防止褐变提供有效、合理的措施。实验结果表明:以邻苯二酚为反应底物时,台湾青枣多酚氧化酶催化氧化产物的最适波长为420 nm,最佳反应时间为20 min,最适反应温度为30℃,最适pH值为6.8。90℃水浴处理5 min该酶已基本失活。3种抑制剂对该酶均表现出不同的抑制效果。单一抑制剂对台湾青枣多酚氧化酶酶促褐变抑制效果的强弱次序为:L-半胱氨酸>抗坏血酸>柠檬酸。其中L-半胱氨酸的有效抑制浓度为0.100 0%。     

核桃壳多糖的含量测定

[目的]测定核桃壳多糖的含量。[方法]以葡萄糖为对照品,采用苯酚-硫酸法在490 nm测定核桃壳中多糖含量。[结果]最佳显色条件为5%苯酚1.0 ml,浓硫酸6.0 ml,反应温度65℃,反应时间为30 min,平均回收率为101.9%,RSD为1.98%,线性范围10～90μg/ml。[结论]该方法简便、准确、重现性好,适用于核桃壳多糖的含量测定。     

Fenton氧化预处理天然气净化检修废水的研究

[目的]探讨采用Fenton氧化预处理天然气净化检修废水的效果。[方法]对天然气净化检修废水进行Fenton试剂氧化预处理,研究了pH、H2O2浓度、n(H2O2)/n(Fe2+)比例、反应温度以及反应时间对COD去除率的影响,确定了反应的最佳条件,并考察了Fenton氧化前后检修废水的生物可降解性。[结果]Fenton氧化试验最佳反应条件为:H2O2投加量0.3 mol/L,n(H2O2)/n(Fe2+)=20∶1,初始pH值为3.0,温度70℃的条件下反应40 min。在此条件下,COD由18~22 g/L下降到3 852~4 708 mg/L,去除率可达78.6%。Fenton氧化预处理后废水的可生化性得到了大大提高,其作为UASB的预处理,效果非常显著。[结论]从环境经济角度分析,Fenton氧化与UASB联合处理后废水不仅处理效果好、成本低,而且控制了污水排污总量,具有广阔的应用前景。     

蒽酮-硫酸法测定芝芪菌质中的多糖含量

[目的]用蒽酮-硫酸法测定芝芪菌质中的多糖含量。[方法]研究确定蒽酮-硫酸法测定芝芪菌质中多糖含量的最佳检测条件,测定3批芝芪菌质的多糖含量。[结果]当加入6 ml、0.05%的硫酸蒽酮溶液,在水浴中加热20 min,冷却20 min时芝芪菌质中多糖含量测定条件最优。[结论]3批芝芪菌质多糖的平均含量为0.991 3%。     

丰水梨多酚氧化酶氧化茶多酚的研究

[目的]提高茶黄素生产的经济效益,降低生产成本.[方法]采用单因素试验探索了茶多酚与丰水梨质量比从1∶1～1∶50的反应比例条件,10～25℃的温度条件,3.5 ～6.5的pH条件,以及20 ～60 min的反应时间对多酚氧化酶氧化茶多酚的影响.采用正交试验,研究了酶与底物质量比、温度、时间、pH4个因素对丰水梨多酚氧化酶（PPO）氧化茶多酚形成茶黄素的影响.[结果]单因素试验结果显示,经组内比较,反应比例1∶40、反应温度20℃、pH 5.5、反应时间40 min下所得产物,用高精度测色仪检测,a值最大,红色最深.正交试验结果表明,4个因素对茶多酚的氧化均有显著影响.其中,对茶多酚氧化的影响程度依次为质量比＞时间＞pH＞温度,最佳组合为茶多酚与酶源质量比1∶40,温度20℃,pH 5.5,氧化时间40 min,茶多酚的转化率为45.70％.[结论]该研究可为寻求低成本的茶黄素生成途径提供依据.     

UV协同Fenton试剂氧化法处理水中1,4对苯二酚及其动力学研究

[目的]研究UV/Fenton法降解水中1,4对苯二酚的最佳工艺条件及其动力学。[方法]采用UV/Fenton法处理1,4对苯二酚模拟废水,考察了nH2O2∶nFe2+、反应时间、H2O2用量、初始pH、紫外光强对1,4对苯二酚降解效果的影响,并初步探讨了1,4对苯二酚的降解动力学规律。[结果]UV/Fenton法降解1,4对苯二酚的最佳工艺条件:nH2O2∶nFe2+为5∶1,反应时间为60 min,H2O2投加量为3.5ml/L,初始pH为3,紫外光强度为500 W。在此条件下,浓度为1 000 mg/L的1,4对苯二酚的COD和浓度去除率分别可达93.19%和87.75%。UV辐射和Fenton氧化对1,4对苯二酚的降解具有协同效应。UV/Fenton法对1,4对苯二酚的降解符合准一级反应动力学方程,其表观速率常数为0.005 1 min-1。[结论]该研究为1,4对苯二酚污染治理提供了新途径。     

反相高效液相色谱法同时测定碧螺春茶中4种儿茶素类化合物及咖啡因含量

[目的]建立同时测定碧螺春茶叶中没食子儿茶素(GC)、表没食子儿茶素(EGC)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表儿茶素没食子酸(ECG)及咖啡因(CAF)含量的高效液相色谱法。[方法]以碧螺春茶为样本,探索出新的样品提取方法和色谱分离条件。[结果]色谱条件为:Shimpack C18色谱柱(150.0 mm×4.6 mm,5μm);乙腈-0.2%冰乙酸体系为流动相进行梯度洗脱;紫外检测器,检测波长为280 nm;流速为1.0 ml/min;进样量5μl;柱温为30℃。在优化条件下,GC、EGC、CAF、EGCG、ECG 5种成分的进样量分别在0.177 5～1.065 0、0.125 0～0.750 0、0.535 0～3.210 0、0.342 5～2.055 0和0.370 0～2.220 0μg范围内与色谱峰面积的线性关系良好(r=0.999 3～0.999 9);加标回收率在98.60%～100.19%;RSD均小于1%。[结论]该方法简便、快速、准确,可用于碧螺春茶中茶多酚类成分及咖啡因的质量控制,同时也适用于其他绿茶的质量鉴定与评价。     

氧化处理对黄酒中物质含量的影响

[目的]研究氧化处理对黄酒中总酸、总酚、总酯含量的影响,加快黄酒氧化并为促进黄酒陈化提供参考。[方法]以古南丰黄酒为研究对象,研究双氧水、超高压2种处理方式对黄酒中物质含量的影响。[结果]通过对模拟体系进行研究,发现铁离子、多酚对黄酒氧化-酯化有作用;双氧水作为氧化剂,酒中双氧水浓度18 mg/L,50℃下作用5 h,黄酒中的总酚含量降到0.775 g/L,总酸含量降到4.75 g/L,总酯含量升高到35.12 mg/L;双氧水协同超高压处理黄酒的较适宜操作条件为:酒中双氧水浓度达18 mg/L,压力300 MPa,保压20 min,此条件下黄酒中的总酚含量降到0.783 g/L,总酸含量降到4.68 g/L,总酯含量升高到42.58 mg/L。[结论]研究可为开发实用化的黄酒陈化工艺拓展思路。     

固定化漆酶酶促合成茶黄素工艺的研究

[目的]探索固定化漆酶酶促合成茶黄素的工艺。[方法]采用D152树脂固定化漆酶体外酶促氧化茶多酚合成茶黄素。通过单因素试验研究反应温度、pH、酶浓度、反应时间和通氧量对合成茶黄素的影响,在此基础上进行茶黄素的酶促氧化合成反应,之后测定茶黄素产量。[结果]采用树脂载体D152固定化得到的固定化漆酶,在重复使用5次后,固定化漆酶催化活性约为原始催化活性的70%;在重复使用10次后,酶催化活性仍然可以保留48%左右。固定化漆酶促氧化的最佳条件为：反应温度60℃,最佳pH 5,底物浓度2.0g/L,通氧量20 L/min和反应时间1.5 h。[结论]采用树脂载体D152可有效固定漆酶。与游离漆酶氧化法相比,固定化法能有效提高漆酶的稳定性和利用效率,反应产物也更易于纯化。     

农产品中痕量钒的测定研究

[目的]建立一种测定痕量钒（V）的新方法。[方法]在柠檬酸介质中，利用KBrO，氧化柠檬黄褪色反应测定痕量钒。首先绘制吸收曲线，选择测定波长，然后研究反应的最佳条件包括柠檬酸用量、KBrO，溶液和柠檬黄溶液用量以及反应的温度与时间，确定线性范围及检出限，测定表观活化能，并研究共存离子的影响。[结果]选择测定波长为430nm。在柠檬酸介质中，钒对KBrO，氧化柠檬黄具有强烈的催化作用。反应的最佳条件为柠檬酸用量3．5mg／L,KBrO3，溶液2．5ml，柠檬黄2．5mg／L，反应温度93℃。反应时间16min。测定痕量钒方法的线性范围为0～40μg／L，方法检出限为3．8rig／ml，RSD为2．36％。[结论]采用该方法测定农产品中痕量钒具有灵敏度较高、抗干扰离子能力强、操作简便的特点。     

亚麻RAPD-PCR体系的优化及引物的筛选

[目的]优化亚麻RAPD反应条件，筛选亚麻RAPD引物。[方法]DNA条带扩增采用PCR技术，条带的分离采用琼脂糖凝胶电泳法，成像利用紫外成像系统。[结果]试验优化亚麻RAPD反应条件：25出反应体系中，含10×Buffer，Mg^2＋ （1mmol／L），Taq酶1U，Genome DNA 50ng．dNTP 0．25mmol／L．RAPD primer1．5μmol／L。PER反应程序为：94℃预变性4min；97℃变性40s，37℃退火1min，72℃延伸90s，40个循环；72℃延伸10min。试验利用3个有代表性的亚麻品种从70条引物中筛选出12条多态性好，重复性高的引物。[结论]该试验筛选出12条引物，并优化了亚麻RAPD反应条件，为亚麻的分子鉴定奠定了基础。