3种新型鱼源真菌的分离鉴定与孔雀石绿替代药物筛选

[目的]从患病鱼类体内和体表分离鉴定出新型鱼源真菌,并用于抗真菌药物的体外药效评价。[方法]通过选择性固体培养基分离纯化鱼源真菌,经形态学和真菌ITS序列分子鉴定,采用微量肉汤稀释法测定10种渔用抗真菌药物的最小抑菌浓度(MIC)。[结果]黑鱼体表分离的真菌ZJLD001株为烟管菌(Bjerkandera adusta),鲫体表分离的真菌ZJLD002株为白囊耙齿菌(Irpex lacteus),虹鳟内脏分离的真菌ZJLD003株和ZJLD004株均为毛栓菌(Trametes hirsuta)。水霉一泼净、优力克、菌霉净、美净推荐的使用剂量大于或等于测定的MIC;海富水霉灵、水霉菌毒净、美婷、亚甲基蓝、孔雀石绿和甲霜灵的推荐剂量低于测定的MIC值。[结论]该研究首次分离到3种新型鱼源真菌;具有促进创伤愈合功能的优力克和美净等新型壳寡糖类抗真菌剂的性价比和安全性最高,可以替代孔雀石绿用于鱼类真菌病防治。     

立达霉对七彩神仙鱼卵水霉病的防治效果

[目的]探讨分析立达霉对七彩神仙鱼(Symphysodon aequfasciatus)受精卵水霉病的防治效果及其安全性,为鱼类人工孵化过程中水霉病的防治提供参考依据.[方法]采用倍比稀释法验证立达霉对水霉菌的体外抑菌效果,并利用水浴染毒法使七彩神仙鱼卵感染水霉菌,然后将其浸泡在不同浓度的立达霉溶液中,以孔雀石绿、无菌水为阳性对照和空白对照,观察不同药物处理对鱼卵发育的影响.[结果]8.0 mg/L立达霉和0.10 mg/L孔雀石绿即可明显抑制水霉菌丝生长.以8.0 mg/L立达霉分别浸泡受精36 h后和受精3h内的七彩神仙鱼卵,鱼卵的水霉菌感染率和死亡率极显著(P＜0.01)或显著(P＜0.05)降低,而孵化率明显提高.鱼卵组织切片观察发现,空白对照组的鱼卵结构较紧密,0.10 mg/L孔雀石绿组的鱼卵内部结构疏松、组织溶解破碎,8.0 mg/L立达霉组的鱼卵内部结构未发生明显变化.[结论]立达霉可有效防治观赏鱼类的水霉病,且不会对鱼卵产生明显毒害作用,生产推荐使用浓度为8.0 mg/L.     

10种农药对斑马鱼的毒性与安全评价

[目的]探究10种农药对斑马鱼的毒性与安全评价。[方法]采用半静态法在室内测定10种农药对斑马鱼的急性毒性,并根据《化学农药环境安全评价试验准则》中农药对鱼类的毒性等级划分,评价10种农药对鱼类的安全性。[结果]结果表明:有2种药剂的96hLC50<0.1 mg/L,属于剧毒级;5种药剂的96 hLC50为0.1~1.0 mg/L,属于高毒级;1种药剂的96 hLC50为1.0~10 mg/L,属于中毒级;2种药剂的96 hLC50>10 mg/L,属于低毒级。[结论]该研究为10种农药的合理使用提供了基础资料和科学指导。     

暹罗斗鱼致病性嗜水气单胞菌的分离·鉴定及药敏试验

[目的]探讨暹罗斗鱼的发病原因和病害防治方法。[方法]对暹罗斗鱼的病原菌进行分离,并通过生理生化指标测定和16S rD-NA测序对其鉴定,同时进行药敏试验。[结果]菌株DY001为暹罗斗鱼嗜水气单胞菌病的病原菌。经鉴定,确定菌株DY001为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)。该病原菌对暹罗斗鱼的半致死量(LD50)为0.04×106CFU/g。药敏试验结果表明,病原菌对阿奇霉素、奥复星、氟哌酸、复方新诺明、菌必治、甲氧苄啶和氯霉素等抗生素敏感。[结论]嗜水气单胞菌是引起此次暹罗斗鱼发病的病原菌,而药敏试验结果将为其防治提供参考。     

光唇鱼幼鱼对9种常用药物的耐受性试验

[目的]研究光唇鱼幼鱼对9种常用药物的耐受性。[方法]采用静水式试验方法,将光唇鱼幼鱼放在不同浓度的9种药物溶液中进行耐受性试验,对光唇鱼幼鱼的急性致毒效应特征和9种药物的安全浓度进行评价。[结果]光唇鱼幼鱼在9种药物溶液中1 h最高成活浓度分别为:食盐为10 000 mg/L,高锰酸钾为20 mg/L,甲醛为108 mg/L,硫酸铜为10 mg/L,氯氰菊酯为0.013 mg/L,伊维菌素为0.020 mg/L,阿维菌素为0.030 mg/L,辛硫磷为0.030 mg/L,水霉净为80 mg/L。光唇鱼幼鱼对各种药物的敏感性由高到低依次为:氯氰菊酯﹥伊维菌素﹥阿维菌素﹥辛硫磷﹥水霉净﹥硫酸铜﹥甲醛﹥高锰酸钾﹥食盐。[结论]该研究为高密度流动水体养殖条件下的鱼病防治用药提供参考。     

阿维菌素·毒死蜱对草鱼的毒性效应研究

[目的]探讨阿维菌素、毒死蜱2种药物对草鱼的毒性效应及相互关系。[方法]以健康活泼的草鱼为试验对象,用阿维菌素、毒死蜱分别对其进行单一药物的急性毒性和2种药物组合和联合毒性试验。[结果]阿维菌素、毒死蜱、2种药物混合对草鱼24、48、72、96h的LC50分别为：阿维菌素0.54、0.49、0.17、0.10 mg/L;毒死蜱0.29、0.21、0.12、0.05 mg/L;阿维菌素与毒死蜱混合药1.22、1.08、0.99、0.86 mg/L;其对草鱼的安全浓度（SC）分别为：0.010、0.005、0.086 mg/L。药物的毒性大小依次为：毒死蜱〉阿维菌素〉混合药。[结论]阿维菌素和毒死蜱混合药的不同浓度对草鱼的生长有显著影响,浓度越高毒性作用越大,低毒性强度的阿维菌素对毒死蜱具缓解作用。     

55种中草药对广东乌龟水霉病致病菌的抑制作用

[目的]从55种抗真菌中草药中筛选出能有效抑制由患病广东乌龟体表分离出的水霉菌（Saprolegnia）的药物。[方法]采用琼脂平板培养法筛选对水霉菌有抑制作用的中草药品种,并进一步测定有效中草药的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。[结果]55种中草药中有五倍子、黄连、黄芩、苦参、射干、川楝子、使君子、乌梅等20种有抑菌效果。其中黄连、川楝子和乌梅3种中草药MIC〈3.13 mg/ml,MBC≤3.13 mg/ml,抑菌效果最佳。[结论]黄连、川楝子和乌梅可作为水霉菌的有效抑制药物应用于广东乌龟的养殖业中。     

亚硝酸盐对文昌鱼的急性毒性效应

[目的]研究亚硝酸盐对文昌鱼的急性毒性效应。[方法]通过急性毒性试验,研究亚硝酸盐对茂名海域文昌鱼的急性毒性。[结果]在水温(25±1)℃条件下文昌鱼在含亚硝酸盐的水体中96h LC50为262 mg/L。文昌鱼在含亚硝酸盐水体中的安全浓度为26.2mg/L。当亚硝酸盐浓度达210.52 mg/L时,第28天开始有文昌鱼出砂。当亚硝酸盐浓度达215.36 mg/L时,96 h开始有文昌鱼死亡。[结论]文昌鱼出砂率在相同时段随着亚硝酸盐浓度的增加而升高,相同亚硝酸盐浓度条件下文昌鱼出砂率随着时间的延长而增加。相同时段文昌鱼存活率随着水体中亚硝酸盐浓度的增加而降低,相同亚硝酸盐浓度条件下文昌鱼存活率随着时间的延长而降低。     

复方新诺明对南美白对虾、梭鱼和三疣梭子蟹的毒性效应

[目的]探讨复方新诺明对3种水生动物的毒性效应。[方法]用复方新诺明分别对南美白对虾仔虾、梭鱼苗和三疣梭子蟹稚蟹进行室内急性毒性试验,设置空白对照组和3个平行组,统计复方新诺明对3种水生动物24、48、72和96 h的死亡个数、半致死浓度（LC50）、95%可信限和安全浓度。[结果]复方新诺明对南美白对虾、梭鱼和三疣梭子蟹的24 h的半致死浓度分别为1 143.32、1 320.57和915.17 mg/L,48 h的LC50分别为962.36、1 119.60和623.27 mg/L,72 h的LC50分别为844.63、977.54和514.34 mg/L,96 h的LC50分别为793.36、880.63和442.30 mg/L。复方新诺明对以上3种水生动物的安全浓度分别为204.58、248.15和86.73 mg/L。3种水生动物对复方新诺明敏感性依次为三疣梭子蟹稚蟹〉南美白对虾仔虾〉梭鱼苗。[结论]该研究为3种水产动物的规模养殖和鱼病防治提供合理用药依据。     

仙茅地下茎段组织培养研究

[目的]为仙茅的快速繁殖提供借鉴和依据。[方法]以仙茅无菌地下茎段为外植体,在蔗糖浓度为20 g/L,琼脂用量为6.5 g/L,pH值为5.8,温度为25℃的光照条件下,设3组培养基（A愈伤组织诱导培养基MS＋6-BA 0-1.0 mg/L＋NAA 0-1.0 mg/L,B丛生芽诱导培养基MS＋6-BA 0.5-1.5 mg/L＋NAA 0.2-0.8 mg/L,C生根培养基MS＋IAA 0-0.5 mg/L）进行组培试验。[结果]最适合仙茅的愈伤组织诱导培养基为MS＋6-BA 0.2-1.0 mg/L＋NAA 0.1-0.6 mg/L;丛生芽分化培养基为MS＋6-BA 0.8-1.5 mg/L＋NAA0.2-0.5 mg/L;生根培养基为MS＋IAA 0.1-0.3 mg/L。仙茅的愈伤组织诱导率为88%-93%,丛生芽诱导率为93%-96%,生根诱导率为92%-96%。[结论]该研究为仙茅地下茎段的组织培养提供了试验参考和理论依据。     

兰州百合鳞茎再生繁殖体系的建立

[目的]建立兰州百合鳞茎快繁体系,并测定丛芽与鳞茎的淀粉含量,为系统研究兰州百合鳞茎离体再生过程中淀粉的代谢奠定基础.[方法]以兰州百合鳞片为外植体,探讨不同消毒剂组合、激素与蔗糖用量对鳞茎诱导培养过程的影响.[结果]随着75％乙醇（10～30 s）与0.1％升汞消毒时间（7～10min）的延长,外植体鳞片污染数不断下降,但诱导芽数表现为先上升后下降的趋势,以75％乙醇消毒30 s＋0.1％升汞消毒10 min组合的消毒效果最好,外植体污染率和芽诱导率分别为12.33％和91.00％.使用1000倍多菌灵处理10 min后,再使用75％乙醇30 s ＋0.1％升汞7～13 min组合进行消毒,可明显降低鳞片污染率3.00％～5.00％（绝对值）.在MS＋0.03 mg/L NAA＋30.0 g/L蔗糖＋5.0 g/L琼脂培养基中添加6-BA 0.5～1.0 mg/L,可显著提高平均芽诱导数;在MS＋5.0 g/L琼脂培养基中添加30.0～60.0 g/L蔗糖,对外植体芽诱导无明显影响;培养基MS＋1.0 mg/L 6-BA＋0.03 mg/L NAA＋30.0 g/L蔗糖＋5.0 g/L琼脂是外植体芽诱导的最适培养基.MS＋0.50 mg/L 6-BA＋0.03 mg/L NAA＋30.0 g/L蔗糖＋5.0 g/L琼脂为适宜增殖培养基,芽增殖系数达最高,为3.67.在MS培养基中添加60.0～90.0 g/L蔗糖可明显促进鳞茎的形成,以添加90.0 g/L蔗糖处理的鳞茎重量最高（99.30mg）.小鳞茎的淀粉质量分数比丛芽增加62.34％.[结论]以鳞片为外植体建立的兰州百合鳞茎再生繁殖体系具有可行性;在丛芽至小鳞茎形成阶段淀粉含量明显升高,小鳞茎的形成与淀粉含量升高密切相关.     

红蛇果接穗组织培养体系的建立

[目的]建立红蛇果接穗组织培养体系。[方法]于早春取红蛇果接穗两年生苗半木质化茎段作为外植体,通过消毒、萌芽、增殖、生根过程建立组织培养体系。[结果]最适宜的萌芽培养基为MS+6-BA(1.0 mg/L)+IBA(0.1 mg/L),其萌芽率可达93.33%,添加PVP(0.5 g/L)和VC(100 mg/L)可以有效地防止褐化。将萌发后的芽转入MS+6-BA(1.2~1.6 mg/L)中,可以进行高效增殖的同时抑制玻璃化情况的发生,增殖倍率可以达3.79。最适宜红蛇果接穗顶芽生根的培养基为1/2MS+IBA(1.0 mg/L),生根率为34.17%。[结论]该研究可为提供大量的红蛇果组培苗以及之后的组培微嫁接提供技术基础。     

镧对鲤鱼遗传毒性和外周血细胞数量的影响

[目的]为了评估稀土元素对鱼类的长期潜在影响。[方法]利用半静态致死法研究了镧对鲤鱼的急性毒性。将鲤鱼暴露于0.01、0.10、2.00、5.00mg/L的La3+溶液中4个月,用来研究镧对鲤鱼外周血细胞数量及红细胞微核和核异常的影响。[结果](1)La3+对鲤鱼24、48、72、96h的半致死浓度分别为13.20、11.90、11.90、11.49mg/L;96h的安全浓度为1.149mg/L。(2)0.01、0.10mg/L组红细胞微核率、总核异常率,0.1mg/L组核异常率均显著低于对照(P<0.05),5.00mg/L组核异常率显著高于对照(P<0.05)。(3)各La3+处理组较对照组红细胞数显著增多(P<0.01)。0.01mg/L组白细胞数较对照组也显著增多,5.00mg/L组白细胞数却显著低于对照(P<0.05);[结论]镧属低毒物质,在La3+的长期暴露下,镧能使血细胞数量发生变化,较低浓度的镧不具遗传毒性。     

蝴蝶兰原球茎诱导因素初探

[目的]探讨不同培养基配方诱导蝴蝶兰原球茎的效果及其诱导因素。[方法]以蝴蝶兰(f001和f006)试管苗根尖和叶为外植体,以MS和KC为基本培养基,分别添加不同浓度的6-BA、NAA和活性炭,各设置16个处理组进行原球茎诱导,研究其对诱导蝴蝶兰原球茎效果的影响。[结果]在KC+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+AC 0.3%的培养基中,蝴蝶兰f006根段原球茎状体的诱导率可达20%;f001根段的诱导培养基配方采用KC+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+AC 0.2%,其原球茎的诱导率达17%,f001叶片的诱导培养基配方采用KC+6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+AC 0.1%,其原球茎的诱导率达10%。[结论]该研究中所用的6-BA和NAA激素和活性炭浓度在MS和KC培养基上对蝴蝶兰原球茎的诱导影响均不显著;不同外植体在不同培养基中其适宜的外源激素浓度与组合也不同。     

蓬莪术的离体快繁研究

[目的]探索蓬莪术的离体快繁技术。[方法]以蓬莪术嫩叶、块茎和根为外植体,接种在以MS为基本培养基,外加不同浓度激素组合的培养基上进行愈伤组织诱导、增殖和分化培养;以幼芽为外植体,进行幼芽的增殖、生根培养和移栽等。[结果]诱导蓬莪术叶、块茎和根的愈伤组织形成的最适培养基为MS＋2,4-D1.0 mg/L＋6-BA0.5～1.0 mg/L＋NAA0.3 mg/L,其中蓬莪术叶诱导率最高,达96%;愈伤组织增殖和分化培养还有待进一步研究。幼芽最适增殖培养基为MS＋6-BA3.0 mg/L＋NAA0.1 mg/L＋KT1.0 mg/L,其增殖倍数达3.5以上;而生根培养基以1/2 MS＋NAA1.0 mg/L＋6-BA0.5 mg/L为最佳,生根率达100%,其移栽成活率达85%以上。[结论]该研究结果为蓬莪术的快速繁殖及工厂化生产奠定了基础。     

虎雪兰与朱砂兰、蕙兰正反交育种及种子无菌萌发与增殖研究

[目的]研究虎雪兰与朱砂兰、蕙兰正反交育种及种子无菌萌发与增殖.[方法]以虎雪兰、朱砂兰、蕙兰‘绿春兰’为亲本,采用正反交杂交法进行育种试验得到果实,对成熟的种子进行无菌萌发试验,并对种子萌发获得的小苗进行增殖研究.[结果]朱砂兰为母本获得杂交种子无菌萌发最适培养基为：1/2MS ＋0.5 mg/L BA ＋0.2 mg/L NAA ＋3％花宝1号＋0.05％碳粉;最佳增殖及生长培养基为：1/2MS＋1.0 mg/L 6-BA ＋0.5 mg/L NAA ＋0.5 mg/L KT ＋3％花宝4号＋0.05％碳粉.蕙兰‘绿春兰’为母本获得种子萌发最适培养基为：1/2MS＋ 1.0 mg/L 6-BA ＋0.5 mg/L NAA＋ 3％花宝1号＋0.05％碳粉;最佳增殖及生长培养基为1/2MS＋ 1.5 mg/L 6-BA ＋0.5 mg/LNAA ＋0.5 mg/L KT＋3％花宝4号＋0.05％碳粉.[结论]该方法为虎雪兰的种质资源栽培提供了理论依据.     

中草药复方注射剂治疗仔猪腹泻的试验研究

[目的]探讨中草药复方注射剂对仔猪腹泻的治疗效果。[方法]提取中草药有效成分,制备中草药复方注射剂。用不同剂量(0.25、0.50和1.00 ml/kg)的中草药复方注射剂对人工感染的仔猪腹泻进行治疗试验。[结果]经过3 d治疗后,3个剂量组均有明显的治疗效果,治愈率可达60%~95%,极显著高于感染对照组,剂量以0.5 ml/kg为佳。将制备的复方注射剂和临床用的硫酸庆大霉素、诺氟沙星、头孢噻呋混悬、硫酸黄连素和博落回注射剂对人工感染的仔猪腹泻进行疗效对比试验,结果表明复方注射剂的治疗效果最好,治愈率达98.0%,明显优于其他注射剂。[结论]该中草药复方注射剂是临床上治疗仔猪腹泻的有效药物。     

西地碘粉的急性毒性研究

[目的]研究西地碘粉对小鼠的经口急性毒性。[方法]选用清洁级ICR小鼠60只,采用寇氏法进行急性毒性试验,观察小鼠西地碘粉急性中毒症状,并测定西地碘粉经口给药对小鼠的LD_(50)。[结果]小鼠经口给药后的急性中毒症状主要包括:给药后15 min,高剂量组小鼠出现精神沉郁,被毛粗乱无光,并逐渐转入抑制,反应迟钝、不食、麻痹。0.5~1.0 h后有小鼠出现呼吸困难,伴随脖颈伸直、食欲废绝;3 h后开始出现死亡,小鼠死亡前出现惊厥、抽搐、震颤等神经症状。急性死亡发生于给药后3~24 h。中毒死亡后剖检发现中毒症状主要表现为对肝脏的损伤,其次是肺和心脏。根据各剂量组死亡率,计算出西地碘粉对小鼠的急性经口LD_(50)为4 972.75 mg/kg.,其LD_(50)95%可信限为4 382.77~5 642.16 mg/kg。[结论]西地碘粉对小鼠的经口LD_(50)介于501~5 000 mg/kg,属于低毒性药物。     

白玉龙火龙果不同外植体的离体培养

【目的】研究白玉龙火龙果子叶、下胚轴及子叶节的不定芽诱导及茎段增殖技术,为白玉龙火龙果的品种改良及快繁育苗提供技术支持。【方法】以白玉龙火龙果种子培育的无菌苗为材料,采用正交试验设计分析不同培养基、不同植物生长调节剂与浓度及其组合对白玉龙火龙果子叶、下胚轴及子叶节不定芽诱导及茎段增殖与生根的影响。【结果】白玉龙火龙果子叶、下胚轴及子叶节均能直接诱导不定芽发生。其中,16个正交处理均能诱导子叶节不定芽发生,其最优诱导培养基为WPM+0.50 mg/L TDZ+0.50 mg/L CPPU+0.05 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA,诱导率为87.1%~100.0%;子叶仅1个处理未能诱导出不定芽,最高诱导率为36.0%,其最优诱导培养基为1/2MS+0.50 mg/L TDZ+0.05mg/L CPPU+2.00 mg/L 6-BA+0 mg/L NAA;下胚轴仅5个处理能诱导出不定芽,最高诱导率仅3.0%,其最优诱导培养基为1/2MS+0.05 mg/L TDZ+2.00 mg/L CPPU+1.00 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA。茎段去顶处理有利于腋芽的诱导萌发,去顶处理的最大增殖系数为4.2,不去顶处理的最大增殖系数为3.1,其最优增殖培养基为WPM+0.50 mg/L 6-BA+0.05 mg/L IBA。NAA处理能促进茎段生根,适宜的生根培养基为1/2MS+0.1~0.5 mg/L NAA,生根率达100.0%。【结论】不同基本培养基、植物生长调节剂与浓度及其组合均能诱导白玉龙火龙果子叶、下胚轴和子叶节不定芽发生及茎段芽增殖和不定根产生。其中,不定芽诱导以子叶节最易诱导发生,其次为子叶,下胚轴较难;茎段芽增殖和不定根诱导均较容易。