木薯嫩叶染色体的制片方法

采用改良苯酚品红压片法,对华南124多倍体木薯品种的嫩叶染色体标本制备方法进行了探讨,比较了0．002mol·L-1的8-羟基喹啉3种温度3种时间的预处理效果、不同的解离方法以及取样部位对制片效果的影响。结果表明,于上午9：00．10：00摘取1．5～2cm长的嫩叶,用0．002mol·L“的8-羟基喹啉于4℃下预处理4h,再置于1mol·L-1盐酸溶液中,于25℃下解离1h,挑取嫩叶中部叶肉用改良苯酚品红染色,然后进行压片观察,能获得分散良好、清晰的染色体图像。     

文心兰染色体的制片技术

以文心兰根尖为材料,采用常规制片法,对染色体制片的取样时间、预处理液、固定液、解离时间、染色液及染色时间进行了研究。结果表明：文心兰组织培养苗培养温度为25℃;适宜的取样时间为5～6月的上午10：00;材料放入1g·L^–1的秋水仙素＋0.002mol·L^–1的8-羟基喹啉混合液中室温预处理4h的效果最好,用卡诺氏液固定12～24h,可获得较多的细胞分裂相,1mol·L^–1的盐酸60℃水浴锅中恒温解离8min的效果较好,用改良的苯酚品红染色制片效果最好。     

百合根尖染色体制片技术研究

以卷丹百合根尖为试材,对其染色体制片技术的取样时间、预处理液、解离时间、染色剂等方面进行了试验研究,并对3个居群的卷丹百合染色体数目进行了观察。结果表明,根尖取样时间以上午8:30~9:30为佳,用0.1%秋水仙碱溶液4℃下预处理24小时,经卡诺固定液固定6h后,在1mol/L盐酸60℃下恒温水浴中解离8 min,改良卡宝品红溶液染色压片镜检,能取得良好的制片效果。卷丹染色体数目观察表明,3个卷丹居群的染色体数目均为2n=3x=36。     

用于菊花品种核型分析的根尖压片技术研究

根尖压片技术是研究植物中期染色体数目和形态的一种重要方法。以2个大菊品种的根尖为材料,以典型中期分裂相的数目、中期染色体的分散程度、聚缩程度和中期染色体的清晰性为衡量制片效果优劣的标准,通过对比不同预处理药剂、取材时间、预处理温度、预处理时间长短以及解离时间条件下的制片效果,得出如下结论：当根长至1 cm时,在9：00~10：00取根,用饱和对二氯苯溶液在4℃条件下预处理4 h,然后用卡诺固定液固定22~24 h,用1 mol/L的HCl60℃下解离10 min,能够得到数量较多、染色体分散良好、染色体形态清晰以及染色体长度适中的中期分裂相。     

天山雪莲根尖染色体制片影响因素研究及组型分析

对天山雪莲的根尖进行染色体常规压片，旨在为其系统分类、遗传育种及分子生物学研究提供依据。分析不同取材时间、预处理和酸解时间对天山雪莲染色体制片的影响，每处理随机挑选1 000根尖细胞进行观察，比较中期细胞和适宜核型分析的中期细胞所占比例。结果表明,10:00取样，用0.002 mol/L 8 羟基喹啉与1 g/L秋水仙素按等体积混合0 ℃预处理24 h，1 mol/L盐酸58 ℃解离7 min制片所得染色体分散效果最佳。核型公式为2 n=2 N=20 m+16 sm，染色体相对长度组成为2 n=32=8 L+6 M2+6 M1+12 S，核型不对称系数(As.k)为60.998 %，属于2B类型，核型对称性程度高，说明天山雪莲在进化中处于趋向于原始类型。     

药用植物刺五加根尖压片技术研究

[目的]研究药用植物刺五加根尖的压片技术。[方法]以刺五加幼苗根尖为试材,通过压片试验研究取材时间、预处理液浓度、预处理时间、固定和保存、解离时间和染色条件对根尖压片效果的影响。[结果]最佳取材时间为9：30～10：30和13：30～14：30;用0．10％秋水仙素处理2．5和3．0h的材料的中期和前中期细胞增多;固定根尖2．0～4．0h对后续操作没有显著影响;60℃下解离10min以上根尖的细胞膜破裂较多,解离8min以下的根尖的细胞壁没有破碎,镜下观察细胞呈方形,无膨胀。室温下解离15min以上和12min以下的解离效果都不理想。室温下用1mol／L盐酸解离根尖15rain,然后用改良的石炭酸品红染液进行染色,通常染色10min左右即可达到较好的染色效果。[结论]该研究为刺五加的染色体核型分析提供了技术支持。     

黄芩根尖预处理方法的优化及其核型分析

为确定黄芩有丝分裂中期分裂相所在高峰期,探讨黄芩根尖的最佳预处理方法,采用不同取样时间和方法对黄芩根尖进行预处理,观察黄芩染色体收缩程度、分散度、着丝点清晰度以及染色体所处分裂时期。结果表明黄芩有丝分裂中期在8∶30、12∶00和16∶00左右达最高峰。用0.002 mol/L 8-羟基喹啉对黄芩根尖进行离体处理3 h,所得染色体分散度较高,收缩长度适宜,为最佳处理方法;采用非离体处理4 h,染色体收缩程度不明显,分散度较低,但可显示一定的带型。故用0.002 mol/L 8-羟基喹啉离体处理3 h的预处理方法对黄芩进行核型分析,核型公式为2n=2x=18=10m 6 sm 2 st,染色体基数为9。     

木薯根尖染色体的观察技术

[目的]探索制作木薯二倍体根尖压片技术,为多倍体的鉴定提供参考。[方法]以木薯品种华南124的根尖为试材,在恒温水浴中用1 mol/L HCl溶液处理,进行细胞解离,并进行11~15 min的时间梯度试验以寻找最佳解离时间。通过木薯根尖染色体的解离观察试验,探讨了木薯根尖染色体(二倍体)的观察方法。[结果]木薯根尖的最佳取材时间在雨后或头天浇水第2天上午9∶00~10∶00。解离时间梯度试验表明,解离13 min可达到木薯的最佳解离效果。通过比较4种染色试剂(I-IK染液、改良苯酚品红、番红染液和醋酸洋红)的染色效果选出的最佳试剂为改良苯酚品红。[结论]该研究为木薯多倍体的直接鉴定提供了新方法。     

玉米染色体常规制片技术中关键因子处理效应及优化

利用五因素二次回归旋转组合设计研究玉米染色体常规制片技术中5个关键因子(取材时间、根尖长度、α-溴萘水溶液预处理时间、解离时间和α-溴萘水溶液的体积分数)及其处理效应.回归分析结果表明,除根尖长度外,其余4个处理因子对染色体制片效果有极显著影响.此外,基于回归方程的统计选优方法获得了比较符合实际的各处理因子的适宜范围,即取材时间8:00,根尖长度1.49～1.81 cm,97.62%～99.38%的α-溴萘水溶液预处理4.16～4.66 h和60℃1 mol/L HCl解离11.25～11.55 min,将取得较好的玉米染色体制片效果.     

中国沙棘染色体的染色和制片技术

以中国沙棘的茎尖为材料,进行不同的取样时间、预处理、固定、解离时间处理后,压片观察染色体。结果表明:早上09:00～10:00取生长旺盛的茎尖组织,用8-羟基喹啉预处理材料1.5～2.5h,卡诺固定液固定2～3h置于60℃恒温水浴酸化15～20min,用改良的卡宝品红染色15min,制出的玻片染色体清楚,效果极佳。     

大麻染色体制片技术

[目的]探究大麻染色体的制片技术。[方法]对大麻染色体制片技术的预处理液、解离时间、染色时间等进行试验研究,并对其进行染色体数目观察。[结果]研究表明:用大麻根尖在常温下用0.003%的8-羟基喹啉溶液预处理2 h或用饱和对二氯苯处理1.5 h,经卡诺固定液固定30 min后,在1∶1的1 mol/L HCl和45%醋酸60℃下恒温水浴中解离30 s,地衣红染液染色8 h压片镜检,能取得良好的制片效果。大麻染色体数目观察表明,大麻染色体数目2n=2x=20。[结论]该研究为大麻细胞学方面的深入研究提供了资料。     

芝麻染色体常规制片技术关键因子的优化研究

为了探索最佳的染色体制片方法,以芝麻活体种子根尖为材料,研究根尖预处理方法、解离时间、取材长度和染色方法等关键因子对芝麻染色体制片的影响.结果表明,预处理方法为40 mg/L的放线茵酮溶液处理3h、饱和对二氯苯溶液处理4h或0.002 mol/L 8-羟基喹啉溶液处理3h;取材长度为0.5～1.0 mm;在V无水酒精∶...     

简易压片法观察水稻有丝分裂和减数分裂行为

[目的]建立一套简单易行的染色体压片技术,获得水稻染色体资料。[方法]采用朱微的植物染色体及染色体技术中的压片法,并在此基础上作了进一步改进。细胞有丝分裂观察：①材料准备。种子浸泡24h后。置于培养皿中,于25℃暗培养箱中生根培养。②固定。当嫩根长至1～2cm时,于9：00～11：00用卡诺固定液（酒精：醋酸=3：1）固定2～24h。再用70％酒精清洗后置于70％酒精中保存备用。③解离。将固定好的材料取出放人解离液（无水乙醇：37％的浓盐酸=1：1）中室温下解离5～10min。解离时间根据温度的不同而不同,在试验中做好调整。④染色。彻底洗去解离液的根尖置于解剖镜下,找出分生区（一个解离良好的材料分生区在解剖镜下是不透明的,而成熟区和根冠部分则是透明的）,用刀片将分生区切为2～3部分,使其细胞更易着色。然后在载玻片上滴卡宝品红染色液染色10rain。⑤压片。⑥镜检取像。细胞减数分裂观察：①取材。幼穗当剑叶的叶枕距为0左右时,处于减数分裂期。于8：00～11：00采集水稻幼穗,用卡诺氏固定液固定24h（置于4℃冰箱内）,再用70％酒精清洗2—3次后,保存于70％酒精中备用。②制片。取1朵颖花的3～6枚花药置于洁净载玻片上,用刀片或解剖针将花药横向切断,用镊子挤压花药,使花粉母细胞从花药中逸出,再用镊子清除药壁等残渣。滴1滴卡宝品红染液于花药上,染色5min。之后压片。③观察取像。先在低倍镜下寻找具有分裂相的花粉母细胞,然后依次转换到高倍镜观察减数分裂各时期染色体的行为和形态特征。最后用油镜观察染色体分裂行为并取像。[结果]水稻有丝分裂包括间期、前期、中期、后期、末期5个时期,中期的染色体缩至最短,是观察与研究染色体的好时期。水稻减数分裂包括减数分裂Ⅰ、减数分裂Ⅱ2个过程,其中在减数分裂Ⅰ过程中发生了染色体复制,减数分裂Ⅱ过程中仅发生了细胞分裂。[结论]改进后的水稻染色体压片技术能够获得准确的染色体资料,可为育种和遗传操作提供依据。     

春石斛根端染色体制片技术的优化

为优化春石斛染色体制片技术体系,以春石斛组培苗根为材料,研究根端长度、预处理方法和酸解时间对制片的影响,结果表明,春石斛根端染色体制片时取根尖长度为1.0cm,在8-羟基喹啉和饱和对二氯苯的混合液中预处理4h,用1mol/L的盐酸在常温(25℃)下解离18min时制片效果佳,染色体形态清楚,易于观察。     

树型金银花染色体制片优化及核型分析

以树型金银花茎尖为材料,比较材料的不同采集时间、预处理方法、解离时间和染色方法对树形金银花茎尖染色体制片的影响。结果表明,取材时间为上午10:00-11:00、预处理方式为饱和对二氯苯处理3～4 h、解离采用1mol/L HCl在60℃下13min、染色液以改良石碳酸品红染色10min染色体制片效果最佳。核型分析结果表明:染色体核型公式为2n=18=8m+8sm+2st,其中第9对染色体具随体,染色体相对长度组成为2n=18=4L+8M2+4M1+2S,属于"2B"型,核型不对称指数为64.47%,属于由对称向不对称演化的过渡型,表明树型金银花是较野生型金银花进化类型。