氨基酸分析中的柱前衍生技术

介绍了以邻苯二甲醛、氯甲酸芴甲酯、异硫氰酸苯酯、丹酰氯、二甲胺偶氮苯磺酰氯和6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯等作为衍生试剂的柱前衍生与反相高效液相色谱法相结合分析氨基酸的原理及特点。     

柱前衍生反相液相色谱法测定饲料中氨基酸含量

采用邻苯二甲醛-氯甲酸芴甲酯(OPA-FMOC)柱前衍生反相高效液相色谱法测定饲料中17种氨基酸含量,以C18柱为分析柱,采用荧光检测器,25min内17种氨基酸得到了分离.氨基酸浓度在10-1000pmol/ul范围内,其峰面积与氨基酸浓度的线性相关系数均大于0.996,17种氨基酸的加标回收率在83.9%-109.8%范围内.试验结果表明本方法具有操作简单、灵敏度高,适用于饲料中氨基酸的测定.     

柱前衍生RP-HPLC法测定犀牛角中氨基酸的含量

[目的]建立柱前衍生法测定犀牛角中氨基酸含量的方法。[方法]犀牛角以酸水解法制备水解氨基酸样品溶液,采用柱前衍生-液相色谱法(RP-HPLC)法测定氨基酸含量。色谱条件为:色谱柱为Waters Nova-Pak C18柱(150 mm×3.9 mm,5μm),以乙腈-缓冲盐为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,紫外检测器检测波长为248 nm,柱温为37℃。[结果]17种氨基酸在0.003 4～0.191mg/ml范围内有良好的线性关系(r0.999 4),平均回收率(n=6)为97.8%。[结论]犀牛角中含有大量的氨基酸,其总氨基酸含量高达41.3%。该方法对研究犀牛角的药用价值与寻找犀牛角药用替代物有积极意义。     

柱前衍生RP-HPLC法测定狗尾草种子氨基酸含量

【目的】采用柱前衍生反相高效液相色谱(RP-HPLC)法检测狗尾草种子中游离氨基酸和水解氨基酸含量,为阐明其应用价值提供支撑。【方法】制备狗尾草种子的水解氨基酸样品溶液和游离氨基酸样品溶液,以异硫氰酸苯酯和三乙胺进行柱前衍生,建立RP-HPLC法,检测方法的精密性、稳定性、重复性。利用RP-HPLC法,采用梯度洗脱方法,检测狗尾草种子中游离氨基酸和水解氨基酸含量。【结果】21种氨基酸的检测浓度线性范围为0.001 9~2.700 0μmol/mL,相关系数R2均≥0.999 0。21种游离氨基酸的平均加样回收率在87.50%~100.20%,相对标准偏差(RSD)在0.82%~2.46%;水解氨基酸的平均加样回收率在91.10%~100.21%,RSD在0.52%~2.08%。必需氨基酸和半必需氨基酸在狗尾草21种游离氨基酸和水解氨基酸中均含有,但水解后色氨酸、天冬酰胺、组胺酰胺遭到了破坏,含量较低。【结论】建立的氨基酸测定方法稳定、快速、精密度高、线性范围宽,适合狗尾草种子中游离氨基酸和水解氨基酸的含量测定。狗尾草种子中含有丰富的游离和水解氨基酸。     

柱前衍生高效液相色谱法测定糜子发芽过程中氨基酸变化

采用柱前衍生高效液相色谱法测定了糜子发芽过程中氨基酸的变化规律。以6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)为衍生试剂,以磷酸盐缓冲液为流动相A,乙腈/水(6∶4)为流动相B进行梯度洗脱;在柱温37℃条件下用紫外检测器在波长248 nm下进行测定。结果表明,糜子中谷氨酸(Glu)含量最高,其次是亮氨酸(Leu)、丙氨酸(Ala);发芽时间为48 h时,总氨基酸含量和必需氨基酸含量达到了最大;在发芽过程中氨基酸含量增加30%以上的有甘氨酸(Gly)、组氨酸(His)、苏氨酸(Thr)、酪氨酸(Tyr),其中,组氨酸(His)的增幅最大,为51.36%;天冬氨酸(Asp)、丝氨酸(Ser)、精氨酸(Arg)、丙氨酸(Ala)在发芽过程中含量变化不显著。     

柱前衍生HPLC测定阿胶中17种水解氨基酸含量

目的:建立柱前衍生高效液相色谱法(HPLC)同时测定阿胶中17种水解氨基酸含量的方法。方法用6 mol/L盐酸溶液水解阿胶中的氨基酸,以异硫氰酸苯酯为柱前衍生试剂;用Hypersil BDS C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm),梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为30℃。结果 17种氨基酸在60 min内均可得到很好的分离,回收率为97.4%～100.1%,RSD为1.6%～3.4%。结论建立的方法可靠,可用于阿胶中17种水解氨基酸的含量测定。     

OPA柱前衍生法测定饲料中的氨基酸含量

在ＫＮＡＵＥＲ－８３０型氨基酸全自动分析仪上ＯＰＡ柱前衍生法能快速,准确地测定饲料中的氨基酸含量,色谱条件为：流量１ｍｌ／ｍｉｎ,反应时间５ｍｉｎ柱温４５℃,洗脱液为醋酸钠和甲醇混合液,采用梯度洗脱,饲料中氨基酸含量的变异系数在０．３７％～７．０３％之间,氨基酸回收率除蛋氨酸外,其余都在９５％～１０５％之间,氨基酸含量与峰面积的相关系数在０．９３２９～０．９９９７之间。     

基于柱前衍生高效液相色谱法的食药用虫草菌丝体中氨基酸含量的测定

以3种食药用虫草资源(江西虫草、戴氏虫草和古尼虫草)为研究材料,首次利用异硫氰酸苯酯柱前衍生高效液相色谱法分析其菌丝体中氨基酸成分。结果表明,参试的3种虫草的菌丝体均含有较高的氨基酸总量,尤其是江西虫草菌丝体的氨基酸总量高达19.86%。在所测定的17种氨基酸中,这3种虫草富含谷氨酸、丝氨酸和苏氨酸,其含量均超过1%,其中江西虫草菌丝体中谷氨酸的含量高达2.38%。总之,这3种食药用虫草菌丝体,尤其是江西虫草菌丝体,其氨基酸种类齐全,含量丰富,有较高的开发利用价值。     

OPA柱前衍生法测定饲料中的氨基酸含量

在ＫＮＡＵＥＲ－８３０型氨基酸全自动分析仪上,ＯＰＡ柱前衍生法能快速、准确地测定饲料中的氨基酸含量．色谱条件为：流量１ｍｌ／ｍｉｎ,反应时间５ｍｉｎ,柱温４５℃,洗脱液为醋酸钠和甲醇混合液,采用梯度洗脱．饲料中氨基酸含量的变异系数在０．３７％～７．０３％之间．氨基酸回收率除蛋氨酸外,其余都在９５％～１０５％之间．氨基酸含量与峰面积的相关系数在０．９３２９～０．９９９７之间．     

龙牙百合花氨基酸含量的柱前衍生OPA-HPLC法测定

[目的]测定龙牙百合花中的氨基酸含量。[方法]以邻苯二甲醛（OPA）与9-芴基羰酰氯（FMOC—C1）作衍生剂,利用VWD检测器可变波长检测程序,采用柱前衍生OPA—HPLC法测定邵阳龙牙百合花中的17种氨基酸含量。[结果]邵阳龙牙百合花中含有苏氨酸、丝氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、谷氨酸、甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、天门冬氨酸、丙氨酸、组氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸等17种氨基酸。其中必需氨基酸的含量为49．7mg／g,占氨基酸总量的31．20％;儿童必需氨基酸的含量为30．6mg／g,占氨基酸总量的19．20％;含量最高的是谷氨酸（28．7mg／g,占氨基酸总量的18．03％）;其次是精氨酸（27．5mg／g,占氨基酸总量的17．30％）。[结论]该方法操作简便,灵敏度高,结果准确,可靠。龙牙百合花中氨基酸的种类齐全,含量丰富,具有很高的开发利用价值。     

柱前衍生高效液相色谱法测定食品中的氨基酸含量

采用柱前衍生高效液相色谱法，测定了3种食品中天冬氨酸、赖氨酸、亮氨酸等17种氨基酸的含量．以6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯（AQC）为衍生试剂，醋酸盐-磷酸盐缓冲液、乙睛、水为流动相，梯度洗脱．AccQ^＊Tag（Waters）氨基酸分析柱为色谱柱，紫外检测．结果显示，氨基酸浓度与峰面积呈良好的线性关系，线性范围10～80μmol／L，最小检出限为0．23μmol／L，相关系数均在0．998以上，相对标准偏差在1．8％～4．9％之间，回收率在89．3％～115．8％之间．     

HPLC法同时测定6种重金属离子

研究了用高效液相色谱法同时测定6种重金属离子的方法。样品用二乙基二硫代氨基甲酸钠(NaDDTC)作柱前衍生,以Hypersil ODS2(4.6 mm×250 mm,5μm)为固定相,甲醇∶水(体积比70∶30)为流动相进行分离测定。方法的日内相对标准偏差为0.17%-1.41%,日间相对标准偏差为5.28%-9.48%,标准回收率为90.1%-107.5%。     

邻苯二甲醛衍生荧光光度法测定莲子中游离氨基酸总量

以邻苯二甲醛和β-巯基乙醇为衍生化试剂,用荧光分光光度计测定莲子中游离氨基酸总量.在荧光光度计激发波长为360nm,发射波长为420nm时,测定其回收率为99.55%～99.95%,变异系数为1.60%.莲子中游离氨基酸总量为0.95%～1.13%,变异系数为0.15%～0.51%.     

反相HPLC法测定余甘子果实中的游离氨基酸

应用反相HPLC法测定了余甘子果实中的游离氨基酸,色谱柱为爱尔兰产150mm×4．6mm,5μ RP18柱．流动相A为0．04mol／L KH2PO4（pH7．2±0．05）、B为水、C为乙腈,流速0．65mL／min,梯度洗脱,检测波长360nm,柱温40℃．结果显示,16种氨基酸标准品的线性范围为0．0156—0．2500μmol／mL,相关系数球=0．9949—0．9999．标准品在0—48h内经多次测定,保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0．03％-1．75％和0．54％-3．67％之间;回收率和回收率相对标准偏差分别在85．95％-102．18％和1．10％-6．54％之间．4种余甘子果实中检出有9种游离氨基酸,分别是天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、精氨酸、甘氨酸、苏氨酸、脯氨酸、丙氨酸和苯丙氨酸,含量为0．0042—0．5666mg／g干质量．     

高效液相色谱同时检测鱼肉组织中4种磺胺与甲氧苄啶的残留量

建立了同时测定鱼肉组织中4种磺胺(磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑)和甲氧苄啶残留量的高效液相色谱法.鱼肉组织用乙腈提取后经乙腈饱和的正己烷去脂,过HLB柱净化,甲醇洗脱,减压浓缩蒸干,流动相(乙腈+1%乙酸,体积比为10∶90)定容,用带DAD检测器的高效液相色谱仪在272 nm波长下检测,流动相采用梯度洗脱.结果显示:4种磺胺和甲氧苄啶分别在0025～10 μg·mL-1和005～20 μg·mL-1范围内呈良好线性关系,相关系数(r)为0999;4种磺胺和甲氧苄啶分别在002、010和020 mg·kg-1和004、020和040mg·kg-1 3个浓度水平下的添加回收率为752%～979%,变异系数为28%～100%(n＝6);根据3倍信噪比计算,磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑和甲氧苄啶的最低检测限分别为0006、0007、0008、0008和0019mg·kg-1.     

HPLC法同时测定凉粉草中四种成分的含量

采用HPLC法,用乙腈∶0.1%甲酸进行梯度洗脱,检测波长254 nm,流速1.0 mL/min,进样量10μL,同时测定凉粉草（Mesona chinensis Benth.）中的咖啡酸、异槲皮苷、紫云英苷和迷迭香酸4种成分含量,并进行系统适用性考察。结果显示,咖啡酸、异槲皮苷、紫云英苷、迷迭香酸分别在34.297～171.480μg/mL、11.172～55.860μg/mL、16.386～81.928μg/mL、13.394～66.970μg/mL浓度范围内线性关系良好,r分别为0.999 9、1.000 0、1.000 0、0.999 7;精密度、重复性、稳定性试验结果的RSD均小于3.00%;9次试验的4种成分相对应的平均回收率均大于95.00%,RSD均小于3.00%。     

小麦冠层光合器官不同时期对千粒重影响的研究

研究小麦冠层光合源叶和芒在不同生育时期对千粒重的影响 ,比较分析了上部叶、芒在子粒形成过程中的贡献及补偿能力的大小 ,着重讨论了不同时期冠层光合器官中旗叶、芒、倒二叶、倒三叶功能变化情况。结果表明 ,开花后小麦下部叶片光合功能衰退较快 ,冠层光合器官对千粒重起重要作用 ,其中旗叶作用最大 ,芒、倒二叶次之。     

不同能量水平限饲对肉种鸡种蛋氨基酸及脂肪酸含量影响

文章探讨不同能量水平日粮对肉种鸡种蛋氨基酸及脂肪酸含量影响。选用27周龄体重相近爱拔益加(AA)肉种鸡240羽,随机分为4组,每组设6个重复,每个重复10羽,产蛋率达5%时开始试验,对照组饲喂基础日粮,试验组饲粮能量水平分别为对照组80%、70%、50%,各组每日投料量及饲粮中粗蛋白质、氨基酸等其他营养水平均相同,40周龄结束试验,测定种蛋中氨基酸及脂肪酸含量。结果表明,(1)与对照组相比,35周龄时50%限饲组蛋黄中必需氨基酸含量显著升高(P0.05),而80%、70%限饲组有上升趋势,但差异不显著(P0.05),其中70%、50%限饲组蛋黄中苏氨酸、苯丙氨酸含量显著升高(P0.05),各限饲组蛋黄中总游离氨基酸有升高趋势,但差异不显著(P0.05);各限饲组对蛋清中必需氨基酸、总游离氨基酸含量均无显著影响(P0.05),但70%、50%限饲组蛋氨酸含量显著升高(P0.05)。(2)与对照组相比,35周龄时50%限饲组蛋黄中必需脂肪酸、不饱和脂肪酸含量显著升高(P0.05);40周龄肉种鸡70%、50%能量限饲组必需脂肪酸、饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸均显著下降(P0.05)。综上所述,35周龄时,肉种鸡能量限饲可提高种蛋中氨基酸及脂肪酸含量,40周龄时不宜过度能量限饲。     

反相HPLC法同时测定青梅中的7种有机酸

建立了用反相高效液相色谱法同时快速测定青梅中草酸、酒石酸、苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸及琥珀酸等7种有机酸的方法。采用的色谱柱为Hypersil ODS Cl8(250 mm×4.6 mm i.d.,5μm),流动相为0.01mol.L-1KH2PO4(pH 2.8),流速为0.8 mL.min-1,柱温21℃,检测波长215 nm。有机酸的回收率为75.4%~121.0%;相对标准偏差为0.78%~2.12%;检出限为0.022~1.290μg.mL-1。测定了4种不同青梅样品中有机酸的含量。