液体培养真菌菌丝体及发酵液的高效分离方法

为建立液体培养真菌菌丝体及发酵液的高效分离方法,以不同种属具代表性的真菌菌株(木霉属的棘孢木霉菌、毛壳属的球毛壳菌、核盘菌属的核盘菌、镰刀菌属的尖孢镰刀菌、链格孢属的链格孢菌和丝核菌属的立枯丝核菌)为例,采用高速离心法、减压抽滤法和多层纱布过滤法分别将菌丝体与发酵液分离,比较3种分离方法的分离效果。结果表明,高速离心和减压抽滤法操作步骤多、收集速度慢、耗电、成本高、对某些液体培养菌丝体收集效果差;多层纱布过滤法操作简单、分离速度快,节能、成本低以及收集的菌丝体含水量低,且不影响提取菌丝体的核酸质量。     

内生真菌球毛壳ND35对植物抗病性及防御酶活性的影响

以植物内生真菌球毛壳菌ND35菌株和病原真菌立枯丝核菌Rs-1菌株及毛白杨树组培苗为试材,分析检测了接种球毛壳菌后立枯丝核菌侵染杨树组培苗的发病情况和4种不同处理的植物产生过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性变化。结果表明:与对照相比接种球毛壳菌后的植物在一定程度上能够阻止立枯丝核菌的扩展,发病率和病情指数均有所降低,明显提高植物POD、PPO和PAL的酶活性。说明接种球毛壳菌后诱导植物产生的3种防御酶对提高植物抗病性有一定的影响。     

药用植物材料混配抑制草莓重茬病菌的初步研究

采用生长速率法,研究了Ds-100,Ds-117和Ds-148 3种药用植物材料按不同比例混配对草莓重茬病主要病原真菌——立枯丝核菌和尖孢镰刀菌的抑菌效果。结果表明,在供试的T15- ,T15- ,T15- ,T15- 和T15- 5种不同混配比例中,T15- 对立枯丝核菌和尖孢镰刀菌的抑菌率分别为85.5%和32.7%,并且在P=0.01水平下,其对立枯丝核菌的抑制作用与其他4种配比的抑菌率差异极显著,对尖孢镰刀菌的抑制作用与T15- ,T15- 和T15- 3种配比的抑菌率差异极显著。采用生长速率法,测定了T15- 不同稀释倍数对立枯丝核菌和尖孢镰刀菌的抑制作用,结果表明:T15- 稀释200,400,800倍对立枯丝核菌的抑菌率分别为70.8%,49.2%,22.1%;对尖孢镰刀菌的抑菌率分别为19.2%,13.3%,7.9%,明显低于对立枯丝核菌的抑制率。此外,测定发现T15- 对立枯丝核菌的EC50为2.2 mg/mL,T15- 稀释50,100,200倍对尖孢镰刀菌孢子萌发的抑菌率分别为59.9%,37.6%和17.0%。     

草莓根腐病病原鉴定及生物学特性研究

对吉林省几个草莓种植基地草莓根腐病菌进行研究,明确了引起吉林省草莓根腐病的病原物主要是尖孢镰刀菌(F.oxysporum)和立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kuhn).对不同培养条件下两种菌的生长量及产孢量进行测定,结果表明,尖孢镰刀菌在以蔗糖为碳源时生长最好,而立枯丝核菌生长的最适培养基碳源为淀粉尖...     

棘孢木霉菌天Q1对几种植物病原菌拮抗作用研究

本研究采用对峙培养的方法,研究了棘孢木霉菌天Q1对稻瘟病菌、尖孢镰刀菌、立枯丝核菌及核盘菌等9种植物病原菌生长的抑制作用。结果表明:棘孢木霉菌天Q1对不同病原菌都具有较好的抑制作用。对赤霉菌的抑制效率最高,为59.09%,其次是串珠菌,对核盘菌的抑制率较低;棘孢木霉菌天Q1产生的非挥发性物质和挥发性物质的抑菌实验结果表明,其产生的非挥发性物质对9种病原菌都具有一定的抑制效果,但是挥发性物质没有明显的抑制作用。     

粘帚霉(Gliocladium spp.)不同菌株对几种病原菌的抑菌作用测定

报道了粘帚霉35个菌株对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporf．sp．Vasinfectum)、立枯丝核菌(Rhiizoctonia solani)、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)、灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、辣椒疫霉菌(Phytopthora capsici)及细交链孢菌(Alternaria tertuis Nees)的拮抗作用和重寄生作用。结果表明：HL-1-1、SH-1-1、SYP-1-1、SYP-4-2、GW-2-1、STG-4-1等6个菌株对供试的6种重要的植物病原真菌均表现出较强的抗菌作用,可作为具有生防潜力的优良菌株进一步研究和利用。粘帚霉菌株菌丝与立枯丝核菌菌丝并行生长,并从菌丝上长出许多分支,缠绕在立枯丝核菌菌丝上形成许多缠绕圈,或菌丝穿过立枯丝核菌菌丝生长。     

刺五加内生放线菌对5种苹果病原真菌的拮抗作用初探

以苹果病原真菌尖孢镰刀菌、层出镰刀菌、串珠镰刀菌、腐皮镰刀菌、立枯丝核菌为靶标菌,采用皿内对峙培养法,对265株刺五加内生放线菌进行抗菌活性筛选。结果表明:供试的265株内生放线菌抗菌谱广,抗菌活性强,至少具有1种抗菌活性的菌株占菌株总数的51.0%。对层出镰刀菌和串珠镰刀菌具有抑制活性的菌株较多,分别占检测总菌株的38.9%和48.7%。对尖孢镰刀菌、腐皮镰刀菌、立枯丝核菌有抑制作用的菌株数量接近,分别占检测菌株总数的23.4%、31.7%、28.7%。对强活性菌株的PKSⅠ、PKSⅡ、NRPS、Helo、CYP功能基因筛选结果提示,菌株大多具有至少1种功能基因。10株强活性菌株系统发育分析表明,这些菌株都属于链霉菌属菌株。     

吉林地区草莓根腐病病原及生物学特性研究

通过对吉林地区几个草莓种植基地草莓根腐病菌的研究,明确吉林地区引起草莓根腐病的病原物主要有尖孢镰刀菌（F.oxysporum）、立枯丝核菌（Rhizoctonia solaniKuhn）,尖孢镰刀菌在以蔗糖为碳源的培养基上生长最好,而立枯丝核菌则在以淀粉为碳源的培养基上生长最好。并明确了该病原物对温度、湿度、光照及pH值的适应性。     

咪鲜胺和恶霉灵对水稻立枯病菌的室内毒力测定

室内采用生长速率法用咪鲜胺及恶霉灵原药对水稻立枯病的优势菌尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌和立枯丝核菌进行了毒力测定。试验结果表明:咪鲜胺的各个处理对水稻立枯病的优势菌菌丝的生长速率具有极强的毒力,其中对尖孢镰刀菌菌丝生长速率的抑制效果最明显,EC50为0.64μg/mL,对立枯丝核菌丝生长量的抑制作用最强。而恶霉灵各个处理对优势菌的产孢具有抑制作用,对尖孢镰刀菌产孢量抑制效果最明显,对串珠镰刀菌孢子萌发的抑制效果最好。     

球毛壳菌荧光标记与重寄生现象研究

    球毛壳菌是一种非常重要的生防真菌.为了从分子生物学水平研究球毛壳菌与立枯丝核菌的拮抗机制,选用GFP(green fluorescent protein)作为报告基因对球毛壳菌进行标记.通过构建和转化EGFP(Enhanced GFP)表达载体,得到氯嘧磺隆抗性的转化子.经过几轮验证筛选,包括选择性平板筛选、PCR扩增目的片段验证、Southern杂交、荧光镜检等,确认SUR基因和EGFP基因已经插入球毛壳菌的基因组并在其中表达标记.取一个确认为荧光标记转化子的菌株,进行生防特性分析.主要通过与病原真菌平板共培养、载玻片对峙培养等方法初步研究了球毛壳菌与立枯丝核菌的拮抗机理.结果发现,在对立枯丝核菌的抑制过程中,球毛壳菌的拮抗机理主要是重寄生作用.     

杨树烂皮病生防菌株X4筛选与鉴定

采用稀释法从杨树根际土壤分离到若干细菌,通过平板对峙法筛选出对杨树烂皮病病原污黑腐皮壳菌(Valsa sordida Nit)的拮抗菌株X4,其抑菌率达83.96%。菌株形态学、生理生化特征以及16S rDNA基因序列分析的鉴定结果表明：生防菌株为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。生防菌株X4还对松球壳孢(Sphaeropsis sapinea)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、腐皮镰刀菌(Fusarium solani)、交链格孢(Alternaria alternata)、希金斯炭疽菌(Colletotrichum higginsianum)、杨灰星叶点霉(Phyllosticta populea)等病原菌有抑制作用,抑菌谱比较广。贝莱斯芽孢杆菌X4具有一定的林木病害防治应用潜力,可为研发杨树烂皮病生物防治提供新途径。     

8种杀菌剂对刺五加苗期立枯病主要病原菌的室内药剂筛选

选用8种药剂,采用生长速率法对刺五加苗期立枯病主要病原菌——立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kuhn)和腐皮镰刀菌(Fusarium solani)进行室内药剂筛选。结果表明:40%甲霜·福美双WP、17%多·福ZX对立枯丝核菌和腐皮镰刀菌的菌丝生长均具有较好的抑制作用;70%噁霉灵WP、50%福美双WP对立枯丝核菌的生长均具有较好的抑制作用;50%多菌灵WP、80%代森锰锌WP对腐皮镰刀菌的菌丝生长抑制作用较好。     

滇重楼内生菌分离及其发酵液抑菌活性

为研究滇重楼内生真菌的抑菌活性,先从滇重楼块茎中分离得到98株内生真菌,对峙试验结果表明,其中有8株内生真菌对供试植物病原菌立枯丝核菌、尖孢镰刀菌和烟草黑胫病菌有一定的抑制作用;内生真菌发酵液初提物抑菌试验结果表明,3株内生真菌发酵液的提取物对供试植物病原菌有一定的抑制作用,分别为PPC-25、PPC-43、PPC-78,其他菌株的发酵液提取物对供试植物病原菌没有抑菌活性。     

等离子体处理对4种草莓病原真菌的室内毒力测定

[目的]明确等离子体处理对4种草莓病原真菌的室内抑制效果.[方法]采用菌丝生长速率法测定不同等离子体处理时间对4种草莓病原真菌(灰葡萄孢菌Botrytis cinerea、尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum、立枯丝核菌Rhizoctonia solani、胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides)的室内毒力.[结果]等离子体处理对4种常见草莓病原真菌均有很好的抑制效果,处理7 min后抑制率都可达到100.00％;对灰葡萄孢菌的抑制效果最好,半数致死时间LT50为1.670 min,对立枯丝核菌、尖孢镰刀菌、胶孢炭疽菌的LT50分别为2.673、4.204和4.668 min.[结论]等离子体技术能够杀灭草莓病原真菌,在草莓真菌病害防治上具有较大的发展潜力.     

石竹茎腐病病原菌鉴定与生物学特性研究

[目的]明确石竹茎腐病病原菌,以期更好地防治此病害。[方法]使用常规植物病理学和分子生物学方法分离和鉴定病原菌,并研究病原菌生物学特性。[结果]石竹茎腐病病原菌为立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。立枯丝核菌最适生长温度为28℃,最适pH为7~8,最适生长的碳源为麦芽糖、可溶性淀粉,最适氮源是蛋白胨;尖孢镰刀菌最适生长温度为28℃,最适pH为7~9,尖孢镰刀菌在果糖和蔗糖中生长速度最快,葡萄糖最不利于其生长,最适氮源为蛋白胨。[结论]立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)共同侵染石竹引起石竹茎腐病。这2种病原菌对环境的适应能力较强。     

鄂西北野生植物蒲公英提取物对几种真菌的抑制活性

以采自鄂西北山区的蒲公英无水乙醇提取物为供试药液,测定了其对立枯丝核菌Rhizoctonia solani、灰葡萄孢菌Botrytis cinerea、齐整小核菌Sclerotium rolfsii、终极腐霉Pythium ultimum和尖镰孢菌黄瓜专化型Fusarium oxysporum f.sp cucum-ber的抑制活性。结果表明:不同浓度的蒲公英提取物对供试真菌菌丝生长的抑制作用均随菌丝生长时间的延长而降低。蒲公英提取物对这5种真菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用均随着提取物浓度的升高而增强,且对终极腐霉、尖镰孢菌黄瓜专化型、立枯丝核菌和灰葡萄孢菌均有较好的抑制作用,而对齐整小核菌的抑制作用较弱。     

油菜内生球毛壳菌抑菌作用初步测定

平板对峙试验显示,从油菜(Brassicanapus)叶、根和种子上分离到的14株内生球毛壳菌(Chaetomiumglobosum)对油菜菌核病原菌和立枯丝核菌均有不同程度的抑制作用,其中以种子上分离到的Dyst-1和MYNS-1的抑制作用最好。Dyst-1和MYNS-1的发酵液通过高压湿热灭菌和细菌过滤器过滤灭菌后,分别对所选用的几株植物病原真菌表现出抑制作用,特别是对油菜种传病害菌核病病菌。油菜内生球毛壳菌的详细抑菌机制需进一步研究。     

滇重楼内生真菌的分离及其抗菌活性分析

为了解滇重楼内生菌的多样性及其抗菌能力,采用切块法分离内生菌,采用形态学观察法初步鉴定内生真菌,采用对峙试验法分析内生菌的抗菌活性。结果表明:从滇重楼植物中分离到98株内生真菌,经微生物学形态观察,初步鉴定归属于4个目,6个科和12个属。分别是根霉属(Rhizopus)、镰孢菌属(Fusarium)、丝核菌属(Rhizoctonia)、束丝菌属(Ozonium)、组丝核菌属(Sclerotium)、青霉属(Penicillium)、头孢霉属(Cephalosporium)、梳霉属(Kickxella)、筒孢霉属(Cylindrium)、刚毛孢属(Pleiochaete)、小单头孢霉属(Acremoniella)及孔球孢属(Gilmaniella)。对植物土传病原菌立枯丝核菌、尖孢镰刀菌和烟草黑胫病菌有抑菌效果的共有8株,其中PPC-78和PPC-43对供试病原菌的抑菌效果最强,PPC-43对立枯丝核菌、尖孢镰刀菌和烟草黑胫病菌菌丝生长的抑菌率分别为88.76%、93.67%和82.31%,而PPC-78的抑制率分别是93.55%、100.00%和95.88%。     

植物源杀菌剂的筛选

采用含毒介质法,以胶孢炭疽菌、立枯丝核菌、胶链孢属、拟茎点霉属、香蕉枯萎尖孢镰刀菌、番木瓜枯萎茄腐镰刀菌、小核菌属、拟盘多毛孢属、平脐蠕孢属、荔枝霜疫霉病菌为供试菌种,用中药材、蔬菜作物、园林植物的汁液进行抑菌试验。结果表明,蒜头原汁液对以上10种病菌菌丝的生长都有较好的抑制作用,对胶孢炭疽菌,荔枝霜疫霉病菌,小核菌菌丝生长的相对抑制率均达100%。黄连水煮液对荔枝霜疫霉菌丝生长的相对抑制率也达100%。厚朴、韭菜、葱、万寿菊也有一定的抑菌作用。     

葫芦巴根腐病病原菌的鉴定

通过田间系统观察、调查和采样,在室内进行了病原分离、鉴定和致病性测定,对葫芦巴根腐病病原菌进行了初步研究。结果表明,宁夏葫芦巴根腐病由茄镰刀菌、尖孢镰刀菌、立枯丝核菌和终极腐霉等复合病原真菌侵染引起。