人参内生菌的分离及拮抗菌株的筛选

利用研磨法和组织块法对我国吉林省5个不同地区来源的健康人参植株分别进行了内生细菌和内生真菌的分离,并采用菌体初筛和发酵液复筛相结合的方法,筛选了对6种人参主要病害病原菌具有抑菌活性的内生菌株.结果显示:在人参根、茎、叶不同器官中共分离获得152株内生细菌和46株内生真菌,初筛后得到对2种以上病原菌有抑菌活性的内生细菌16株,内生真菌3株,复筛后对4种以上病原菌具有抑菌活性的内生细菌2株,内生真菌1株,还发现了对灰霉病菌具有明显抑制作用的菌株3株.     

银杏内生真菌及发酵液粗提物抗肿瘤活性研究

为了筛选有抗肿瘤活性的银杏内生真菌及次生代谢产物,采用MTT法,用105株银杏内生真菌发酵液的乙酸乙酯粗提物分别对A549肺癌细胞与Hep G2肝癌细胞进行抗肿瘤活性的检测。结果显示:有12株内生真菌对A549细胞表现出一定的抑制,有11株内生真菌对Hep G2细胞表现出一定的抑制,经过梯度浓度筛选,其中菌株G-04-05对A549和Hep G2细胞都显现出了较高抑制作用,对其活性成分值得进一步的探索和研究。     

雷公藤内生真菌的分离鉴定及抗肿瘤活性菌株筛选

目的:从雷公藤根(Tripterygium wilfordii)茎及叶中分离鉴定内生真菌,并对其发酵产物进行体外抗肿瘤活性筛选。方法:采用微生物纯化方法分离雷公藤植物的内生真菌,根据菌落形态和显微特征对菌株进行分类鉴定。选用HCT-8(人结肠癌细胞)、Bel-7402(人肝癌细胞)、BGC823(人胃癌细胞)、A549(人肺癌细胞)为指标,采用MTT法对发酵产物进行体外抗肿瘤活性筛选。结果:从雷公藤不同器官中分离得到64株内生真菌,经形态观察鉴定为3目,5科,11属。其中5株内生真菌发酵产物对不同肿瘤细胞具有显著选择性细胞毒作用。结论:雷公藤内生真菌种类多样,具有很好的研究和应用价值。     

月季内生真菌分离及抗黑斑病活性菌株的筛选

[目的]分离并筛选具有抗黑斑病活性的内生真菌。[方法]从陕西省西安、咸阳、宝鸡、渭南4个地点采集各种类型的健康月季品种,从茎和叶组织中分离内生真菌并通过转接2～3次进行纯化,采用改良的打孔法筛选对黑斑病病原菌有拮抗作用的内生真菌。[结果]共分离获得月季内生真菌67株,其中咸阳采集的样品内生菌的定殖率和分离率最高;月季的茎段内生真菌的定殖率和分离率明显高于叶片。从67株内生真菌中筛选出3株具有抗黑斑病活性的内生菌菌株,并且全部来自宝鸡。[结论]为进一步筛选生防真菌的候选菌株及环境友好型真菌生物防治奠定了基础。     

酸枣内生真菌的分离及抑菌活性测定

为明确酸枣内生真菌的多样性和抑菌活性特征,采用组织分离法对酸枣植物内生真菌进行了分离,并采用平板对峙法对从酸枣植株不同部位分离的内生真菌进行筛选,用生长速率法测定了内生真菌发酵液的抑菌活性。研究结果表明:从酸枣体内分离的40株内生真菌中,25株具有一定的抑菌活性,占分离总数的62.5%。其中,SZJ-2、SZJ-5和SZJ-8菌株对梨黑斑病菌等具有较强的抑制活性,抑菌率在30.6%~70.7%之间,表明所分离的3株内生真菌抑菌活性较好,且能产生多类抗菌物质,具有进一步开发应用的价值。     

雷公藤属内生真菌研究（Ⅱ） 昆明山海棠内生真菌的分离鉴定及抗肿瘤活性菌株筛选

为从昆明山海棠根及茎中分离鉴定内生真菌,并对其发酵产物乙酸乙酯提取物进行体外抗肿瘤活性筛选,采用微生物纯化方法,从昆明山海棠植物中分离得到内生真菌, 根据菌落形态和显微特征对菌株进行分类鉴定。选用Bel-7402（人肝癌细胞）、A549（人肺癌细胞）、BGC823（人胃癌细胞）、HCT-8（人结肠癌细胞）为指标,采用MTT法对发酵产物进行体外抗肿瘤活性筛选。结果表明,从昆明山海棠不同器官中分离得到37株内生真菌,经形态观察鉴定为2目、4科、8属。其中3株内生真菌发酵产物对不同肿瘤细胞具有显著选择性细胞毒作用。研究结果为国内首次从昆明山海棠植物中分离得到内生真菌,昆明山海棠内生真菌种类多样,具有潜在的研究和应用价值。     

大蒜内生菌的分离及拮抗菌株的筛选与鉴定

采用组织切块法和组织匀浆法对10种采集自全国不同地区的大蒜进行内生菌的分离,并用平板对峙法对分离得到的内生菌抗菌活性进行了筛选,根据形态学和16S r RNA等方法对有抗菌活性的菌株进行了鉴定。试验结果表明:从10种大蒜鳞茎中共分离得到大蒜内生菌102株,采用平板对峙法筛选出能同时抑制5种及以上植物病原真菌的菌株,再对筛选出的菌株进行16S r RNA测序鉴定菌种,去除重复的菌株后,得到19株抑菌活性较强的菌株。对19株大蒜内生菌进行一系列生理生化指标的检测,结果表明这些菌株的形态及生理生化特征均不相同。     

连翘内生真菌的分离及其抑菌活性初步研究

采用PDA培养基从连翘茎、叶中分离到19株内生真菌,对其分别进行液体培养,将发酵产物中的发酵液用高压蒸汽湿热灭菌,菌丝体晾干研磨后用丙酮提取。用发酵处理液和丙酮粗提物采用生长速率法对一些植物病原菌进行抑菌活性测定。结果表明:抑菌率在50%以上的活性菌株,发酵液组中有1株(5.26%),菌丝体组中有13株(81.25%),表明其抑菌活性成分主要为胞内代谢产物(存在于菌丝体粗提物中)。筛选出2株抗菌谱较广的内生真菌(J4和J8),其中J8对9种病原真菌抑菌活性较强,J4对6种病原真菌抑菌活性较强。     

一株具有抑菌活性的粉背雷公藤内生真菌的分离鉴定

从粉背雷公藤新鲜植株中分离筛选具有抑菌活性的内生真菌。采用组织块培养法分离得到107株内生真菌。以金黄色葡萄球菌、大肠埃希杆菌、变形球菌、枯草芽孢杆菌作为指示菌进行体外抑菌试验,通过滤纸片扩散法筛选出一株具有研究潜力的抑菌活性菌株(ETH-1),菌株ITS序列的系统发育分析结果表明ETH-1为拟茎点霉属真菌。     

薄荷中内生真菌的筛选和初步研究

[目的]从薄荷中筛选出能产生活性物质的内生真菌。[方法]采用组织分离法从薄荷中分离出3株不同的内生真菌P-1、P-2、P-3,对其进行不同pH值梯度培养,运用滤纸片法和对峙培养法,研究它们的抗菌活性。[结果]3株内生真菌在pH值6.5~7.5出现生长最高峰,在pH值4.0~8.5都可以生长,酸碱适应性很强,其中P-3的适应性最强。P-1和P-2对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌都有较强的抑制能力,而P-3只对大肠杆菌有很微弱的抑制能力。3株内生真菌对苹果锈病病原菌、苹果白粉病病原菌、苹果落叶病病原菌都有抑制作用,其中P-1的抑制能力较强。[结论]该研究获得了具有抗菌活性的内生真菌。     

香竹箐栽培型古茶树内生真菌对植物病原真菌的拮抗活性

【目的】了解香竹箐栽培古茶树内生真菌对植物病原真菌的拮抗活性。【方法】采用尖端菌丝纯化法分离内生真菌,并结合形态学和分子生物学方法对内生真菌进行鉴定,采用五点对峙培养法筛选对供试病原真菌具有拮抗活性的内生真菌菌株,对具有较强活性的菌株进行分类地位归属。【结果】从香竹箐栽培古茶树枝叶中共分离纯化出308株内生真菌,归属于61个形态型。病原真菌拮抗试验结果显示:有18株内生真菌对4种以上供试菌的抑制率大于50%,分别隶属于2门3纲10目13科14属。有13株对至少1种供试菌的抑制率大于75%,有9株对5种供试菌的抑制率均大于50%。其中,菌株Ct-BC40、Ct-BC72和Ct-LP113对5种供试菌的抑制率达80%以上,属强拮抗菌株。【结论】香竹箐栽培古茶树内生真菌中广泛分布着抑菌活性菌株,占分离菌株总数的96%以上,且抗菌活性、种属分布具有多样性。     

一株具有抑菌活性的粉背雷公藤内生真菌的分离鉴定

从粉背雷公藤新鲜植株中分离筛选具有抑菌活性的内生真菌.采用组织块培养法分离得到107株内生真菌.以金黄色葡萄球菌、大肠埃希杆菌、变形球菌、枯草芽孢杆菌作为指示菌进行体外抑菌试验,通过滤纸片扩散法筛选出一株具有研究潜力的抑菌活性菌株(ETH-1),菌株ITS序列的系统发育分析结果表明ETH-1为拟茎点霉属真菌.     

鱼腥草内生真菌的分离、鉴定及抑菌活性研究

[目的]分离和鉴定鱼腥草中的内生真菌,并检测其发酵液抑菌活性。[方法]用组织块法分离内生真菌,通过形态分类学方法进行鉴定,并用滤纸片法对4种指示菌进行体外抑菌试验。[结果]从鱼腥草各器官中共分离得到13株内生真菌。其中,根中1株,茎中10株,叶中2株;经形态鉴定,其分别属于子囊菌纲的毛壳菌属和半知菌亚门的曲霉属、镰孢属、茎点霉属及丝核菌属;12株内生真菌发酵液对至少1种指示菌有抑菌活性,而2株内生真菌的发酵液具有强抑菌活性。[结论]鱼腥草中存在具抑菌活性的内生真菌,可作为筛选抑菌活性物质的新资源。     

药用白花泡桐内生细菌的分离鉴定及抑菌活性检测

为开发新的抑菌活性物质,以湘西药用白花泡桐叶片为材料,采用组织分离法从药用白花泡桐叶片中分离内生细菌,通过对峙培养法检测内生细菌发酵液对2株病原真菌的抑菌活性,根据菌株形态、生理生化特性及16S rRNA基因序列系统发育分析对活性菌株进行鉴定.结果表明:从白花泡桐叶片中筛选出对水稻纹枯病菌(Rhizoctonia so...     

一株蓝果树科植物内生真菌的分离和抑菌效果测定

实验采用传统植物内生菌分离方法,从一株蓝果树科植物的根、枝、叶片上分离得到16株内生真菌;通过对峙抑菌试验筛选得到2株具有抑菌活性的内生真菌,编号为G-1、G-4,并对这2株内生真菌进行发酵,对发酵液做抑菌试验,结果显示,此2株内生菌具有较明显的抑菌作用。     

金银花中产绿原酸内生真菌的分离与鉴定

以不同产区金银花的不同部位为材料,采用组织块法对金银花内生真菌进行分离鉴定,并结合TLC法和HPLC法对菌株发酵液进行定性分析.结果表明,共分离得到内生真菌80株,分属于5目、5科、10属,筛选出3株产绿原酸的菌株,均属于链格孢属.金银花中存在着丰富的内生真菌,不同产区及不同部位间内生真菌的种类和数量均存在差异,河南新密产绿原酸活性菌株较多.     

冬凌草内生真菌抗肿瘤活性菌株筛选

[目的]筛选冬凌草内生真菌抗肿瘤活性菌株,为开发利用冬凌草内生真菌资源提供依据。[方法]以药用植物冬凌草为试验材料,分离筛选能产抗肿瘤活性物质的内生真菌。通过组织分离法,从贵州省施秉县产冬凌草中分离到152株植物内生真菌,利用抗肿瘤体外细胞增殖抑制筛选模型(SRB法)对其进行活性检测。[结果]结果表明,20株内生真菌(占总分离菌株的13.1%)对人慢性髓性白血病K562细胞具有显著的增殖抑制活性。[结论]冬凌草内生真菌是寻找抗肿瘤活性代谢产物的良好资源。     

青钱柳内生真菌多样性及其代谢产物的特性

为揭示青钱柳内生真菌的分布、多样性及其代谢产物的抑菌活性,并筛选产黄酮的内生真菌,挖掘植物内生真菌新资源,采用组织分离的方法对青钱柳的枝、皮、叶、根部位的内生真菌进行分离,用马丁氏培养基、察氏培养基、PDA培养基对内生真菌进行培养,通过观察内生真菌的形态特征进行初步分类,同时提取其发酵产物,并以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌为供试病原菌对分离的内生真菌进行抑菌活性试验,通过显色试验和薄层层析试验筛选出产黄酮的内生真菌.试验共分离得到67株内生真菌,通过菌落形态和显微形态对分离得到的青钱柳内生真菌进行分类,其分别隶属于3纲4目6科10属;青钱柳不同组织中内生真菌的分离结果不同,其中根部分布的内生真菌从数量和种属上都占优势;马丁氏培养基培养的菌株种类少、数量多,而察氏培养基和PDA培养基培养的菌株种类较多、菌株较少;抑菌试验共得到13株具有抑菌作用的内生真菌,其中有2株内生真菌的发酵产物对供试菌株均表现出较强的抑菌活性,分别属于青霉属和链格孢属;并且筛选出7株菌株(PP03、PY01、PG11、PZ06、PY12、PP12和PP06)具有稳定的产生黄酮类化合物的能力.     

濒危药用植物青天葵内生真菌的鉴定及抑菌活性研究

研究广西青天葵内生真菌的抗菌活性,并筛选出具有抗菌活性的菌株。从广西青天葵植株中共分离得到23株内生真菌,以15种病原真菌为指示菌株,用平板对峙法对分离的内生真菌进行抑菌试验,结果显示,内生真菌MQY-1对多种病原真菌指示菌具有较强的抗菌活性,结合其形态特征和分子生物学分析结果,将其鉴定为Colletotrichum truncatum,证明青天葵中存在一定的抗菌活性物质,为寻找新型抑菌物质提供一定基础。     

陕西核桃内生真菌代谢产物抑菌活性分析

为筛选出具有抑菌活性的核桃内生真菌,以核桃炭疽病原菌等6种真菌和大肠杆菌等5种细菌病原菌作为指示菌,通过平板对峙培养、生长速率法和滤纸片法测定内生菌的拮抗作用及其代谢产物的抑菌活性。结果表明:共筛选出抑菌活性显著的内生菌6株,其中弯角镰刀菌LTL-G3、木霉属YJL-3和德氏霉属YJL-14菌株的发酵液抑菌活性显著,其次生代谢产物中可能存在独特的抑菌活性物质;番茄早疫病原菌和产气荚膜梭菌对核桃内生真菌代谢产物的响应最为显著。