白术多糖的提取、纯化和活性研究

[目的]提取和纯化白术多糖,并探讨多糖中蛋白对小鼠脾淋巴细胞转化的影响。[方法]采用醇沉分级、脱蛋白和Sephadex G-75制备柱从中药白术中提取分离得到cPAM、zPAM和PAM 3种多糖,并对这3种多糖进行体外淋巴细胞转化试验。[结果]3种白术多糖对ConA诱导的T淋巴细胞增殖均有促进作用;浓度为5μg/ml的zPAM对小鼠脾淋巴细胞增殖有明显的促进作用;浓度为5和10μg/ml的PAM对小鼠脾淋巴细胞增殖有明显的促进作用。[结论]白术多糖的纯化程度与脾淋巴细胞增殖有一定关系;纯化程度高的多糖对小鼠脾淋巴细胞的增殖有促进作用;白术粗多糖中的蛋白对小鼠脾淋巴细胞的增殖没有影响。     

儿茶酚和莨菪碱对水稻纹枯病菌氨基酸合成和分泌的影响

【目的】为明确水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG 1-IA)黑色素形成前体物质酪氨酸等氨基酸成份在不同培养处理中的差异。【方法】利用氨基酸分析仪对水稻纹枯病菌在3种培养处理(PDB对照,添加了300μg/mL质量浓度莨菪碱的PDB和50μg/mL质量浓度儿茶酚的PDB)后菌丝体和发酵液的氨基酸成份进行了分析。【结果】水稻纹枯病菌菌丝体中谷氨酸、天冬氨酸和丙氨酸3种氨基酸含量相对比较丰富,而谷氨酸的含量最高,达到总氨基酸的15.49%;水稻纹枯病菌发酵液中天冬氨酸和谷氨酸含量最为丰富,分别达到了总氨基酸的17.83%和58.21%;在3种处理中,不管是菌丝体还是发酵液中,都是谷氨酸和天冬氨酸最为丰富。影响水稻纹枯病菌菌丝体黑色素形成的前体物质酪氨酸的含量在3种处理的菌丝体中没有显著差异;但300μg/mL质量浓度的莨菪碱处理组与对照组和儿茶酚处理组中的苯丙氨酸含量都存在显著差异,而对照组和50μg/mL质量浓度的儿茶酚处理组的苯丙氨酸含量差异不显著。水稻纹枯病菌发酵液中对照组和50μg/mL质量浓度的儿茶酚处理组酪氨酸含量没有显著差异,但是300μg/mL质量浓度的莨菪碱处理组与对照组和儿茶酚处理组酪氨酸含量都存在显著差异,而苯丙氨酸在发酵液中差异不显著。【结论】影响水稻纹枯病菌菌丝体和发酵液黑色素形成的氨基酸不同,苯丙氨酸对水稻纹枯病菌菌丝体黑色素形成更加重要,而酪氨酸对水稻纹枯病菌发酵液黑色素形成更加重要,以上结果为氨基酸对水稻纹枯病菌黑色素形成的影响提供了参考依据。     

甘草多糖对小鼠及鼠伤寒沙门菌生长性能的影响

为探讨甘草多糖对小鼠及鼠伤寒沙门菌生长性能的影响,利用小鼠灌胃给予低剂量(1 mg/kg)、中剂量(10 mg/kg)和高剂量(100 mg/kg)甘草多糖,测定小鼠生长性能(体质量和脏器指数)变化;在培养基中分别加入终质量浓度为10、20、50、100、200μg/mL的甘草多糖,检测其对鼠伤寒沙门菌体外生长的影响;Bliss法计算鼠伤寒沙门菌对小鼠半数致死量(LD_(50));检测甘草多糖对小鼠感染100倍LD_(50)鼠伤寒沙门菌的保护力。给予甘草多糖后所有剂量组小鼠一般临床状况均无明显变化,体质量和脏器(肝脏、肺脏、心脏、肾脏和胸腺)指数稍有增高。而第5天和第7天时甘草多糖可显著增加小鼠的脾脏指数(P0.05)。甘草多糖可促进鼠伤寒沙门菌的生长速率和生物被膜的形成,但差异不显著。鼠伤寒沙门菌腹腔感染小鼠的LD_(50)为2.09×10~5cfu/mL。100倍LD_(50)的鼠伤寒沙门菌感染小鼠后,随着甘草多糖质量浓度增加小鼠死亡时间延迟。结果表明,甘草多糖对鼠伤寒沙门菌体外生长具有有限的促进作用,对小鼠生长性能无显著性影响,但可以提高小鼠抵抗鼠伤寒沙门菌感染的能力。     

橘色糖丝菌XA-1活性粗提物的分离与抗真菌活性研究

为明确橘色糖丝菌XA-1发酵液中抗真菌活性成分的分布及抑菌效果,采用大孔吸附树脂结合渗漉法,以辣椒疫霉病菌为供试靶标进行活性追踪,对发酵液中活性成分进行初步提取、分离;以菌丝生长速率法和10种植物病原真菌为供试菌株对活性粗提物进行抑菌谱研究,对100μg/mL浓度下抑制率在80%以上菌株进行毒力测定。结果表明:菌株XA-1发酵液中抗真菌活性成分主要分布在甲醇粗提物中,其在100μg/mL浓度下对10种供试植物病原真菌均具有抑制作用,除对豇豆轮纹病菌的抑制率为48.0%外,对其余9种菌株的抑制作用均高于59%,其中对高粱炭疽病菌和辣椒疫霉病菌的抑制作用最强,抑制率分别为93.3%和89.8%,EC_(50)值分别为19.33和22.24μg/mL。以上结果明确了橘色糖丝菌XA-1发酵液中抗真菌活性成分的分布、抑菌效果及敏感菌株,有望从中开发出防治辣椒疫病和高粱炭疽病的新型抗生素,为后续研究提供参考。     

昆虫病原线虫共生菌YL001发酵液不同粗提物抑菌活性研究

采用不同溶剂对YL001发酵液进行提取,以抑制菌丝生长速率法、抑制孢子萌发试验法离体测定了不同粗提物对植物病原真菌的抑制活性。结果表明,氯仿粗提物在离体条件下能显著抑制多种供试真菌菌丝的生长,其对辣椒疫霉病菌和水稻稻瘟病菌的EC50值分别为63.58μg/mL和77.21μg/mL;正丁醇粗提物能显著抑制供试真菌孢子的萌发,其对番茄灰霉病菌的EC50值为0.445μg/mL;盆栽实验表明正丁醇粗提物比氯仿粗提物具有较好的防治效果,其对黄瓜霜霉病的保护和治疗作用分别达82.4%和75.1%。     

冬青卫矛内生真菌2QR1菌株代谢产物的杀菌活性

为寻找天然植物源新的具有农药活性的先导化合物,从冬青卫矛根皮中分离到1株内生真菌,编号为2QR1,初步鉴定其为半知菌亚门,曲霉属(Aspergillus)。室内活性测定结果表明,2QR1菌株发酵液的杀菌活性远高于菌丝体的杀菌活性。该菌株发酵液乙酸乙酯萃取物对小麦根腐病菌、小麦赤霉病菌、苹果炭疽病菌、玉米大斑病菌、番茄叶霉病菌、烟草赤星病菌和马铃薯干腐病菌菌丝生长抑制的有效中质量浓度EC50值分别为53.6,63.1,63.3,98.2,106.5,115.9和166.3μg/mL;对玉米大斑病菌、小麦根腐病菌、烟草赤星病菌和马铃薯干腐病菌抑制孢子萌发的有效中质量浓度EC50值分别为94.8,139.1,146.6和180.1μg/mL;在质量浓度为500μg/mL时,对枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径在16 mm以上。盆栽试验结果表明,2QR1菌株发酵液乙酸乙酯萃取物在质量浓度为2 000μg/mL时,对小麦白粉病的保护作用和治疗作用分别为61.9%和81.6%。选用硅胶柱层析,以杀菌活性追踪为指导,对该菌株发酵液乙酸乙酯萃取物进行了杀菌活性成分的分离,得到化合物B9。化合物B9对玉米大斑病菌、烟草赤星病菌、小麦根腐病菌和马铃薯干腐病菌抑制孢子萌发的有效中质量浓度EC50值分别为0.8,1.4,3.3和5.0μg/mL。     

6种杀菌剂对苹果轮纹病的毒力测定

采用生长速率法测定了6种杀菌剂对苹果轮纹病菌的毒力。结果表明,氟硅唑、戊唑醇、多菌灵对菌丝的抑制作用最为明显,氟硅唑在处理剂量为0.800μg/mL时,抑制率为96.04%;戊唑醇在处理剂量3.200μg/mL时,抑制率为96.21%;多菌灵在处理剂量0.320μg/mL时,抑制率为92.20%。氟硅唑和多菌灵对苹果轮纹病菌的毒力较强,EC50分别为0.038 52μg/mL和0.067 54μg/mL;其次为戊唑醇和吡唑醚菌酯,EC50分别为0.154 8μg/mL和1.504 23μg/mL;苯醚甲环唑和异菌脲EC50分别为4.357 08μg/mL和4.875 82μg/mL。苯醚甲环唑对苹果轮纹病菌的毒力最弱。     

灵芝发酵工艺条件优化及美白因子探析

采用菌丝体液体深层发酵技术,以菌丝生长和酪氨酸酶抑制率为主要测定指标,对灵芝发酵培养基成分和发酵条件进行优化,并利用质谱分析技术对发酵液进行代谢组学分析,以确定发酵液中关键美白因子。结果表明：最佳培养条件为麦芽浸粉2 g/mL,蔗糖1.72 g/mL,豆粕粉0.214 g/mL,酵母提取物0.1 g/mL,pH5,温度30 ℃,培养时间6 d,转速160 r/min;在此条件下,发酵液酪氨酸酶抑制率为95.1%,表明其具有良好的美白功效。通过代谢组学技术,鉴定出包括多糖、三萜、核苷酸和氨基酸等在内的212种成分,其中,多糖和三萜的种类最多,分别为26、30种;基于代谢组数据,进一步对发酵液中灵芝多糖和三萜进行分离及含量的测定,发酵液中灵芝多糖含量为24.8 mg/mL,三萜含量为55.7 μg/mL;对发酵液中多糖、三萜含量与酪氨酸酶抑制活性进行相关性分析,结果表明三萜含量与酪氨酸酶抑制活性呈正相关,而多糖含量与酪氨酸酶抑制活性无明显的相关性,表明发酵液中的主要美白因子为灵芝三萜。     

放线菌A19菌株抑菌活性成分的研究

从土壤中筛选到一株对多种植物病原菌有强烈抑菌作用的放线菌菌株,编号为A19。采用活性追踪法从A19菌株发酵液中分离得到H-1、H-2和H-3 3个化合物。经结构鉴定,化合物H-1为环(脯氨酸-亮氨酸),化合物H-2为环(4-羟基-脯氨酸-亮氨酸),化合物H-3的结构式尚待解析。抑菌活性测定结果表明:化合物H-3表现强烈的抑菌活性,在剂量为5μg时对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、白菜软腐病菌(Erwinia carotovora)的抑菌圈直径分别为13.5 mm1、1.0 mm、12.5 mm和14.0 mm,对小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、番茄叶霉病菌(Fulvia fulva)、马铃薯干腐病菌(Fusarium solani)、玉米大斑病菌(Exserlhilum turcicum)和玉米弯孢叶斑病菌(Curvularia lunata)孢子的抑制中浓度EC50分别为123μg/mL、154μg/mL、130μg/mL、87μg/mL和173μg/mL。化合物H-2对供试病原菌也表现一定的抑菌活性,而化合物H-1对供试病原菌无明显的抑菌活性。     

榆黄菇菌丝体多糖提取及抗肿瘤活性研究

液体发酵榆黄菇,从菌丝体中提取粗多糖,研究其体内抗肿瘤活性。用0.2、0.4、0.8 g/kg3个剂量组对荷S180小鼠进行灌胃,结果发现:榆黄菇菌丝体粗多糖得率为2.99%,低、中、高3个剂量组对肿瘤的抑制率分别为30.14%、41.73%和48.87%,同时能提高荷瘤小鼠的胸腺指数和脾指数。榆黄菇菌丝体多糖具有明显的抗肿瘤活性。     

药用菌多糖的抗肿瘤作用研究

[目的]研究赤芝、蝉花2种药用茵的茵丝体多糖对小鼠Lewis肺癌的抑制作用。[方法]每只健康小鼠腋下接种肺癌细胞悬液0．2ml,建立肺癌模型,连续灌胃给药9d,并测定各组小鼠的胸腺指数,脾脏指数和抑瘤率。[结果]赤芝多糖剂量为200mg／kg·d时抑瘤率最高,为50．2％;蝉花多糖剂量为200mg,／kg·d时抑瘤率最高,为46．3％。[结论]2种多糖对Lewis肺癌都有抑制作用,并且赤芝多糖优于蝉花多糖。     

不同木腐菌菌株对松材线虫繁殖的影响

测试了松生拟层孔菌(Fomitopsis pinicola)、洁丽香菇(Lentinus lepideus)、桦褶孔菌(Lenzites betulina)、黑木耳(Auricularia auricular)、硫磺菌(Laetiporus sulphureus)、裂褶菌(Schizophyllum commune)、粗皮侧耳(Pleu-rotus ostreatus)、杂色云芝(Coriolus versicolor)、密粘褶菌(Gloeophyllum trabeum)、虎掌菌(Tremellodon gelatino-sum)、灵芝(Ganodermalucidum)、绣球菌(Sparassis crispa)和茯苓(Poriacocos)13种木腐菌的22个菌株对松材线虫繁殖的影响。结果表明,除裂褶菌以外,其他菌株都能抑制松材线虫的繁殖。松材线虫在松生拟层孔菌W10和W11菌株、硫磺菌5452和6600菌株、粗皮侧耳6221菌株、虎掌菌6320菌株、茯苓6284菌株和灵芝6501菌株菌落上完全不能存活。     

灵芝发酵液浸膏多糖对大肠杆菌生长抑制效果的观察

采用液体培养和固体培养的方法研究了灵芝发酵液浸膏多糖对大肠杆菌体外生长的影响。结果表明:5.0~40.0 g/L的灵芝发酵液浸膏多糖均具有抑制大肠杆菌生长的活性。     

人工培育蝉花的活性成分含量测定

[目的]明确人工蝉花的活性成分含量。[方法]用微波法提取人工蝉花和野生蝉花的活性成分,用高效液相色谱法测定虫草素和腺苷含量,用高碘酸钠法测定虫草酸含量,用苯酚-硫酸法测定虫草多糖含量。[结果]人工蝉花的虫草酸含量和野生蝉花相当,虫草多糖含量则高达110.09mg/g;腺苷含量较野生蝉花低,虫草素未能检出,但4种活性成分总量是野生蝉花的1.55倍。[结论]从活性成分含量看,人工蝉花可代替野生蝉花,但还需进行进一步试验。     

灵芝主要有效成分超声提取工艺的优化

目的研究灵芝三萜和灵芝多糖的超声提取工艺．方法采用超声波辅助法,探讨了提取剂的pH（碱醇）、提取剂用量、提取温度、超声时间4个因素对灵芝三萜提取效果的影响,并用无水乙醇做对照实验．探讨超声时间、提取温度、提取剂用量3个因素对灵芝多糖提取效果的影响．结果醇的pH和超声时间对灵芝三萜的提取效果有明显影响,其他两因素影响效果不大;提取时间和提取温度两个因素对灵芝多糖提取效果达到极显著水平．结论灵芝三萜最佳提取条件为：乙醇用量30倍＋提取温度60℃＋提取时间60min＋碱醇pH8．5,对无水乙醇调pH可以明显提高乙醇提取灵芝三萜的能力;灵芝多糖提取最佳条件为：超声提取时间55min＋提取温度55℃＋提取剂用量50倍．     

富集钙·铁离子对灵芝菌丝体培养的影响

研究不同浓度钙、铁离子对灵芝固体培养与液体摇床培养后菌丝体生长、胞外多糖及菌丝体钙、铁含量的影响。结果表明：在浓度为200μg／ml的钙离子发酵液中,灵芝胞外多糖含量和钙离子含量最高,分别为7．4g/L和100．6me,／100g。灵芝多糖含量最高的最适Fe^2＋浓度为1000μg／ml,胞外多糖含量可达到8．5g/L,铁离子含量为364．2mg／100g。     

灵芝多糖提取方式比较及多糖应用研究进展

多糖是灵芝的主要活性物质,具有抗氧化、降血脂、降血糖、抗肿瘤、抗病毒和提高免疫力等功效。随着灵芝多糖已渗入到药品、保健品、化装品和食品等领域,多糖的提取逐渐成为人们研究的主要问题。同时,人们对多糖的重要活性物质有了新的认识。随着多糖的提取、结构、药理学及临床学研究的不断深入,灵芝及灵芝多糖将具有更广阔的前景。     

桉树栽培灵芝试验及灵芝营养成分分析

以桉树木材和桉树锯末为基质,以混合锯末为对照,对桉树种植的灵芝进行了比较试 验。结果表明能够进行桉树下培养灵芝,灵芝菌丝体的增长率在桉树下生长快(桉树锯末的菌丝 体的日常增长率为9.75 mm?d -1,桉树段下灵芝菌丝每日的生长速度7.28mm (d-1)。桉树混合 基质灵芝鲜重47.66g,与对照组(47.11g)相比,更高,高出比例是1.18%。与对照组(45.44g)相比, 较低,低出比例是3.53%。从木屑基质下灵芝多糖(1.64g 100g-1)和灵芝多糖(1.44g 100g-1)实验 结果来看,其与对照组相比,更高。其中,前者高出比例是1.38g,后者高出比例是100% g-1。从 食用角度来看,灵芝中重金属含量不会损害人们的健康,没有超出相关绿色食品标准规定。     

灵芝多糖肽的制备

以肽得率为判优指标,研究了添加前处理措施及低浓度碱液为提取液的灵芝多糖肽提取工艺。结果表明:石油醚脱脂预处理后,约能提高得率36.4%,灵芝多糖肽的最佳提取工艺条件为:温度100℃,料液比1:30,提取液为0.5%碳酸钠溶液,提取时间为2.0h,提取率为2.07%。这4个影响因素按从主到次的顺序排列依次是:温度料液比碱性盐溶液浓度提取时间。     

灵芝多糖制备及药理研究进展

综述了灵芝多糖的制备及药理作用方面的主要研究成果,并展望了其发展前景。指出灵芝多糖是灵芝属灵芝中的主要活性成分之一,具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、抗氧化、降血脂等药理作用,是具有广泛开发前景的药品资源。