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离子交换层析纯化重组福安泰-03功能域的工艺条件研究 总被引:1,自引:0,他引:1
对阴离子交换树脂HiTrap DEAE Sepharose FF纯化重组福安泰-03功能域(rFAT-03)的合适条件进行了研究。通过试验,确定了柱层析的最佳操作条件,即在上样缓冲液为0.1mol/L Tris-HCl、洗脱缓冲液为1mol/L NaCl+0.1mol/L Tris-HCl、pH为8.8的条件下,利用HiTrap DEAE SepharoseFF琼脂糖凝胶吸附柱,先用洗脱缓冲液从30%到60%洗脱3个柱床体积,再用洗脱缓冲液从60%到100%洗脱2个柱床体积。在此试验条件下,rFAT-03得率为35.97%,最终纯化的rFAT-03达电泳纯,纯度为99.5%。 相似文献
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为探讨大孔树脂XDA-8对孜然黄酮静态和动态的吸附性能,用超声辅助法得到粗提液,利用分光光度法测定样品中的黄酮含量,考察吸附剂用量、粗提液浓度、pH值、吸附时间等因素对吸附结果的影响.结果显示,XDA-8对孜然黄酮具有较好的吸附性能.静态吸附最佳条件为:黄酮浓度0.4 mg/mL,树脂用量和提取液之比1 g:20mL,pH值6,吸附时间50 min,70%乙醇洗脱,在此条件下吸附率达到84.32%,洗脱率达到85.77%;动态吸附的最佳条件为:上样流速3 mL/min,上样浓度0.3 mg/mL,pH值约为6,径高比1:15,70%乙醇洗脱液用量80 mL,在此条件下吸附率74.47%,洗脱率为76.96%.说明XDA-8较适合分离纯化孜然总黄酮. 相似文献
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人白细胞介素-12的纯化及鉴定 总被引:1,自引:1,他引:0
[目的]利用人白细胞介素-12(human interleukin 12,hIL-12)转基因马铃薯,探讨hIL-12的纯化条件。[方法]提取转基因马铃薯中的总蛋白,hIL-12的分离纯化步骤包括超滤、MKF-AIW阴离子交换层析、MKF-CIC阳离子交换层析。在阴离子交换层析吸附过程中采用试管法选择最佳吸附pH值,选择洗脱过程最佳洗脱pH值;选择阳离子交换层析洗脱过程最佳洗脱pH值;ELISA法测定各纯化阶段收集的上清液或洗脱峰中的hIL-12的含量;非还原SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度;Western Blot检测纯化的hIL-12。[结果]阴离子交换层析吸附过程最佳吸附pH值为7.5,洗脱过程最佳洗脱pH值为7,阳离子交换层析洗脱过程最佳洗脱pH值为6.5。纯化的hIL-12经非还原SDS-PAGE分析蛋白纯度为91%。Western Blot分析结果表明,在40 kD处有特异的蛋白条带出现。[结论]hIL-12转基因马铃薯经总蛋白提取,超滤,阴离子交换层析,阳离子交换层析纯化,获得了高纯度的hIL-12。 相似文献
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[目的]探讨制取小麦旗叶粗酶液的最佳缓冲体系。[方法]采用不同的缓冲体系制备小麦旗叶粗酶液,测定小麦旗叶中过氧化物酶(POD)、淀粉酶、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、脂氧合酶(LOX)的活力。[结果]当pH为6.2时,POD活力最高;当pH为5.8时,淀粉酶活力最高;当pH为7.0时,PAL和LOX活力最高。选用磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液为提取缓冲液时,PAL和LOX活力最高。当此缓冲液浓度为0.15 mol/L时,POD活力最高;当此缓冲液浓度为0.10 mol/L时,淀粉酶和LOX活力最高;当此缓冲液浓度为0.05 mol/L时,PAL活力最高。[结论]制取粗酶液的最佳缓冲体系是pH 7.0、0.10 mol/L的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液。 相似文献
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为研究木霉粗酶液胞外分泌物的生物活性,从愈创木酚的用量、反应温度、缓冲液种类、缓冲液pH、缓冲液浓度5个因素,对木霉粗酶液胞外分泌物漆酶的酶活力进行研究;从反应时间、反应温度、缓冲液pH、染料浓度、缓冲液浓度、酶液稀释倍数6个因素对木霉粗酶液的胞外分泌物漆酶对染料的脱色作用进行研究.结果表明:木霉漆酶在反应温度为25℃,琥珀酸缓冲液的pH为4.0,琥珀酸缓冲液浓度为0.045 mol/L,愈创木酚用量为0.04 mol/L时,木霉粗酶液胞外分泌物漆酶酶活力最优;木霉粗酶液的胞外分泌物漆酶其脱色作用在反应温度为30℃,pH为3.5,染料浓度为0.01 g/L,醋酸缓冲液浓度为0.2 mol/L时,木霉粗酶液的胞外分泌物漆酶脱色作用最好. 相似文献
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[目的]利用人白细胞介素-12(human interleukin 12,hIL-12)转基因马铃薯,探讨hIL-12的纯化条件.[方法]提取转基因马铃薯中的总蛋白,hIL-12的分离纯化步骤包括超滤、MKF-AIW阴离子交换层析、MKF-CIC阳离子交换层析.在阴离子交换层析吸附过程中采用试管法选择最佳吸附pH值,选择洗脱过程最佳洗脱pH值;选择阳离子交换层析洗脱过程最佳洗脱pH值;ELISA法测定各纯化阶段收集的上清液或洗脱峰中的hIL-12的含量;非还原SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度;Western Blot检测纯化的hIL-12.[结果]阴离子交换层析吸附过程最佳吸附pH值为7.5,洗脱过程最佳洗脱pH值为7,阳离子交换层析洗脱过程最佳洗脱pH值为6.5.纯化的hIL-12经非还原SDS-PAGE分析蛋白纯度为91%.Western Blot分析结果表明,在40 kD处有特异的蛋白条带出现.[结论]hIL-12转基因马铃薯经总蛋白提取,超滤,阴离子交换层析,阳离子交换层析纯化,获得了高纯度的hIL-12. 相似文献
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[目的]研究大孔树脂纯化分离麦冬多糖的优化工艺条件。[方法]比较了不同pH值、流速对麦冬多糖的纯化效果。[结果]确定大孔树脂纯化麦冬多糖的层析条件为:上柱溶液pH值为8,洗脱溶液pH值为8,流速为1.0ml/min,在此条件下麦冬多糖纯度可达到81.0%,回收率71.2%。[结论]该优化工艺条件可以作为麦冬多糖的纯化方式进行推广。 相似文献
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[目的]探讨磷酸盐缓冲液的pH和浓度在分级盐析时,对革胡子鲶肠道各组分蛋白/肽的影响。[方法]以不同浓度和pH的磷酸盐缓冲液作为组织匀浆缓冲液,在硫酸铵饱和度为20%、40%、60%、80%和100%的条件下,对革胡子鲶肠道抗菌蛋白/肽进行分级盐析,并对盐析产物进行称重、电泳检测和抑菌活性分析。[结果]磷酸盐缓冲液的pH为6.0或7.4时,其浓度对盐析产物产量、蛋白沉淀和抑菌效果无显著影响。而pH为8.0、浓度为0.05 mol/L时,硫酸铵饱和度为60%和100%的粗蛋白/肽的产量显著高于浓度为0.02 mol/L的磷酸盐缓冲液粗蛋白含量;大分子蛋白能更好地在硫酸铵饱和度为20%和40%时沉淀下来,而在饱和度为60%、80%和100%能获得分子量相对较小的抗菌蛋白/肽。磷酸盐缓冲液的pH和浓度对抑菌效果无显著影响。[结论]pH8.0,浓度为0.05 mol/L的磷酸盐缓冲液更适于革胡子鲶肠道抗菌蛋白/肽的提取。 相似文献
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大孔树脂纯化翅果油树叶片多糖的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
该文研究了5种树脂对翅果油树叶片多糖的静态吸附及解析性能,选取出一种吸附和解析效果均较好的树脂进行了动态试验研究.结果表明:AB-8树脂对翅果油树叶片多糖的吸附和解析效果较好;AB-8树脂在吸附时间为100min,吸附液为30℃,pH值为7,最佳上样量与树脂比例为6∶1,吸附流速为1mL/min时吸附效果较好.用40mL的蒸馏水洗脱效果最好,洗脱率可达82.095%.对AB-8树脂的再生性能进行研究表明,树脂重复使用4次,其吸附能力仍较为稳定. 相似文献
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为研究红稗粗多糖不同的脱蛋白工艺,并确定DEAE-52纤维素交换层析柱纯化分离红稗多糖的最优条件。用Sephadex G-100柱层析分离纯化得到的红稗多糖并采用柱前衍生化高效液相色谱法对纯化后的红稗精多糖的单糖组成种类进行测定。结果表明:红稗粗多糖的最佳上样浓度为5 mg/mL,洗脱速度0.5mL/min,上样体积25mL;采用Sevage法除蛋白3次,得到的蛋白清除率以及多糖保存率均较高,通过DEAE-52纤维素的柱层析分离纯化后可得到大组份多糖;再由Sephadex G-100柱层析分离纯化得到的大组份红稗中性多糖;再利用柱前衍生化高效液相色谱法(HCLP)测定分离纯化后的红稗多糖主要由L-鼠李糖(rhamnose,Rham)、D-葡萄糖醛酸(glucuronic acid,Glu)和葡萄糖(glucose,Glc)3种单糖组成。 相似文献
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为快速、准确地检测土壤中氯离子的含量,采用以水作为提取剂,水土比1:10(v/w),超声处理30min提取的方法,结合以氢氧化钾溶液为淋洗液,阴离子交换柱分离,电导检测器检测的离子色谱检测手段。结果表明,该方法能够达到快速、准确地检测土壤中氯离子含量的目的,该方法精密度及准确度实验结果表明其适用于各类型土壤中氯离子含量的测定。 相似文献
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乌头总碱的纯化工艺及中乌头碱的纯化研究 总被引:3,自引:1,他引:2
[目的]选出乌头总碱的最佳提取工艺,并分离纯化中乌头碱,为新药研制奠定基础。[方法]以总生物碱提取率为指标考察提取工艺。通过硅胶柱层析和结晶纯化获得纯度在95%以上的中乌头碱。[结果]附子中乌头总碱的最佳提取条件为:以3倍药材量的95%乙醇溶液为溶剂,浸提3次,第1次5 d,第2次3 d,第3次1 d。调提取液pH值为3.0~4.0后静置12 h,回收乙醇并浓缩至一定体积,确定D-101的最佳吸附率、洗脱率分别为87.5%和95.3%。纯化时,D-101大孔吸附树脂的上样浓度为6 g/L,pH值为4.5,室温为18℃,以蒸馏水除杂,流速为1 ml/min的95%乙醇洗脱,浓缩洗脱液,完全蒸干,测得其附子总生物碱的平均含量高于48%。[结论]D-101大孔吸附树脂可用于工业化乌头总碱的提取,以及后续各种生物碱的纯化。 相似文献
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黑果枸杞多糖的纯化工艺研究 总被引:1,自引:0,他引:1
研究黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr)水溶性多糖的纯化工艺。结果表明,三氯乙酸法为最佳脱蛋白方法,过氧化氢法为最佳脱色方法,脱色条件为温度45℃,时间30min,pH 8~9,用量为每100mL粗糖液5mL H2O2。黑果枸杞经超声加热提取、醇沉、脱蛋白、脱色后得黑果枸杞粗多糖(crude Lycium rutheni-cum polysaccharides,CLRP)。CLRP经DEAE-Cellulose柱层析,用蒸馏水以及0.05、0.1、0.25、0.5mol/LNaHCO3洗脱液进行分段洗脱,分离得到LRP1、LRP2、LRP3、LRP4、LRP5五个多糖组分,多糖含量最高的LRP5经Sephadex G-100柱层析后得到LRGP5。经高效凝胶渗透色谱法分析,LRGP5为均一多糖,测得相对分子质量约为1.37×105。 相似文献