温州蜜柑果实贮藏寿命生物标记的筛选

【目的】对温州蜜柑果实贮藏期所处生理状态进行分析,挖掘能反映柑橘果实采后贮藏期所处不同生理阶段的生物标记。【方法】通过对温州蜜柑采后贮藏0-50 d的基因芯片数据和初生代谢物数据分析,结合聚类、主成分分析、偏最小二乘法判别分析和支持向量机等机器学习的方法挖掘能够预测温州蜜柑果实贮藏寿命的生物标记,并采用qRT-PCR对标记的可靠性进行验证。【结果】基于多元差异比较分析筛选出了5 232个差异基因;并将采后温州蜜柑分为贮藏初期、中期和后期3个生理阶段。Mapman功能富集分析发现氨基酸代谢和细胞壁代谢与采后温州蜜柑所处的生理状态密切相关;基因本体富集分析表明核小体组装、蛋白酶解等生物过程也发生了明显变化。qRT-PCR验证结果显示,谷胱甘肽S-转移酶（Cit.15371.1.S1_at）实时定量值具有明显的阶段性特征,可作为预测温州蜜柑采后贮藏寿命的基因标记。与芯片数据对应的初生代谢物数据同样可将温州蜜柑采后贮藏期划分为3个生理阶段,且筛选出甘氨酸（Glycine）、3-氨基-6-甲氧基吡啶甲酸（3-Amino-6-methoxypicolinicacid）、丁烯二酸（2-Butenedioic acid）、Cyclohexanone,2-[(dimethylamino)methyl]4个候选代谢物标记。【结论】筛选了5个生物标记物,包括谷胱甘肽S-转移酶、甘氨酸（Glycine）、3-氨基-6-甲氧基吡啶甲酸（3-Amino-6- methoxypicolinicacid）、丁烯二酸（2-Butenedioic acid）、Cyclohexanone, 2-[(dimethylamino)methyl],可以用来预测温州蜜柑果实贮藏寿命。     

温州蜜柑果实发育与贮藏过程中活性氧代谢研究

[目的]了解柑橘果实发育和贮藏过程中活性氧代谢的变化规律。[方法]以国庆1号温州蜜柑（Citrus unshiu Marc）为材料,研究果实发育和贮藏过程中抗氧化酶活性、活性氧和抗氧化剂含量的变化。[结果]过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）和超氧化物歧化酶（SOD）活性在成熟过程中幼果期最高;过氧化氢（H2O2）含量在果实膨大期以后稳定增加,贮藏20d后又表现为下降趋势;谷胱甘肽（GSH）含量在幼果期和膨大期之间差异板显著（P〈0.01）;抗坏血酸（AsA）含量最大值出现在果实膨大期,贮藏期含量没有差异。[结论]该研究为柑橘的栽培、果实的贮藏及其保鲜提供了参考。     

套袋对温州蜜柑果实营养成分的影响

以宫川温州蜜柑为试材,研究了套袋对温州蜜柑果实营养成分的影响.结果表明,套袋后果肉中总糖、还原糖、蔗糖、淀粉、有机酸、维生素C、钙、锌、铁及蛋白质含量较未套袋的果实均有显著减少;粗纤维、类胡萝卜素、灰分、磷及脂肪含量与未套袋的果实差异不显著.     

温州蜜柑雌雄蕊分化过程及施肥对果实品质的效应

温州蜜柑（兴律品系）两枚萼片原基最早出现于１０月中下旬,翌年３月中旬花瓣原基、雌雄蕊原基相继发生分化,５月上旬花器完成分化。花粉粒大部分不育,开花前后大部分胚囊自行解体。沙囊原基出现于４月下旬。开花前,增施有机肥和全素无机肥,可使果汁中可溶性固形物、可溶性糖和有机酸分别提高１３．９１％、１７．５１％和５．８０％,显著提高果实品质,增产２２．４４％。     

温州蜜柑果实成熟中色泽与糖酸含量的变化

为了探明新引进的温州蜜柑品种山下红与目前国内主栽品种在品质特性方面的差异,以山下红和国庆一号、兴津为试材,通过感官分析、色差测定及化学分析等检测方法,研究了3个品种果实成熟过程中果皮色泽与色素含量、果肉中可溶性糖和可滴定酸含量的变化规律。结果表明:在果实成熟过程中,3个品种的果皮叶绿素含量均持续下降且以成熟前期下降最快,而类胡萝卜素含量变化不大,果实成熟时这两种色素的含量在各品种间无显著差异;国庆一号和兴津的果皮着色速度快于山下红;国庆一号、兴津的可溶性糖积累速度比山下红快,达到峰值早,而山下红在测定期间平稳持续升高;国庆一号减酸较兴津和山下红早;国庆一号和兴津从10月20日开始果实糖酸比上升幅度变缓,而山下红一直持续升高。综合判断,国庆一号成熟最早,兴津其次,山下红成熟最晚。     

国庆1号温州蜜柑原生质体培养再生植株

通过对国庆1号温州蜜柑Guoqing No．1(citrus wnshiu)原生质体培养获得的愈伤组织，经体细胞胚发生途径再生植株的研究。结果表明，两步法建立的国庆1号胚性愈伤组织悬浮系，分离的原生质体产量高、活力强，在MA培养基上培养20d时，可获得颗粒性强，具有体细胞胚发生能力的细胞团。这些细胞团在甘油(MT 质量分数2％甘油)培养基上可以获得最好的胚状体诱导效果。但诱导出的小胚状体不能进一步发育，需及时转入液体乳糖(MT 质量分数5％乳糖)培养基上振荡培养20～30d。然后将长至1.0～2.0cm的胚状体转入固体乳糖培养基上，可促使其进一步发育成墨绿色的正常胚状体，最终在生芽培养基上诱导其再生植株。     

三种温州蜜柑果实香气成分的研究

 【目的】研究‘国庆1号’、‘宫川’和‘大叶尾张’3种温州蜜柑果实的香气成分及其差异。【方法】利用顶空固相微萃取技术-气质联用技术（HS-SPME-GC-MS）,对3种温州蜜柑果实的香气成分进行分析测定。【结果】从3种温州蜜柑果实中分别检测到65、36和55种挥发性成分,总含量分别为584.67 μg•g-1、505.29 μg•g-1和494.63 μg•g-1。在3种果实中有29种相同的成分。独有的香气成分中,‘国庆1号’有12种,‘宫川’有5种,‘大叶尾张’有2种。【结论】D-柠檬烯、γ-松油烯、β-月桂烯、α-蒎烯、芳樟醇和辛醛是3种果实中主要的特征香气成分。‘国庆1号’特征香气成分的含量高于‘宫川’和‘大叶尾张’的。     

地表覆膜对温州蜜柑果实品质和外观的影响

以6年生枳砧温州蜜柑为材料,研究在果实细胞分裂期、细胞膨大期以及成熟前期等3个时期进行地表覆膜对温州蜜柑果实品质和外观的影响。结果表明:在果实细胞分裂期和成熟前期进行覆膜,果实总糖、还原糖、VC的含量均高于对照,果实可滴定酸的含量以及果实纵横径、果皮重、单果重均低于对照,果实细胞分裂期覆膜使果实可食率高于对照,果形指数与对照无差异,果实成熟前期覆膜使果实可食率与对照无差异,果形指数低于对照;果实细胞膨大期覆膜,果实总糖、还原糖、可滴定酸的含量以及果实可食率低于对照,果实VC的含量比对照稍高,果实纵横径、果皮重、单果重以及果形指数均低于对照。果实成熟前期覆膜,可有效提高果实总糖、还原糖、VC的含量,降低果实可滴定酸的含量,从而提高果实品质,但对果实外观有一定的负面影响。     

地表覆膜对温州蜜柑果实品质和外观的影响

以6年生枳砧温州蜜柑为材料,研究在果实细胞分裂期、细胞膨大期以及成熟前期等3个时期进行地表覆膜对温州蜜柑果实品质和外观的影响。结果表明:在果实细胞分裂期和成熟前期进行覆膜,果实总糖、还原糖、VC的含量均高于对照,果实可滴定酸的含量以及果实纵横径、果皮重、单果重均低于对照,果实细胞分裂期覆膜使果实可食率高于对照,果形指数与对照无差异,果实成熟前期覆膜使果实可食率与对照无差异,果形指数低于对照;果实细胞膨大期覆膜,果实总糖、还原糖、可滴定酸的含量以及果实可食率低于对照,果实VC的含量比对照稍高,果实纵横径、果皮重、单果重以及果形指数均低于对照。果实成熟前期覆膜,可有效提高果实总糖、还原糖、VC的含量,降低果实可滴定酸的含量,从而提高果实品质,但对果实外观有一定的负面影响。     

温州蜜柑园土壤养分状况及对果实品质的影响

以宫川早熟温州蜜柑为材料,对浙江温岭5个主要柑橘产地的土壤养分状况和果实品质成分进行调查分析。结果显示,温岭温州蜜柑园的施肥量充足,土壤养分水平较高。其中海涂橘园土壤的速效钾、有效钙和有效镁含量较高,山地橘园土壤的有机质、碱解氮、速效磷和有效铁含量较高。果实品质因子中以果皮厚度与土壤营养因子的相关性最明显,其与土壤pH、速效钾、有效钙和有效镁均呈极显著正相关,果实可溶性固形物含量与土壤有机质与速效磷呈显著负相关。     

转GFP基因国庆1号温州蜜柑愈伤组织原生质体的再生

对转GFP（pBIN—mGFP5-ER）基因国庆1号温州蜜柑（Citrusunshiu Mare）原生质体进行了分离、纯化和胚状体的诱导。获得的原生质体在UV下均发出明亮的GFP荧光，活性达到87％。原生质体在MA固体包埋培养基中培养至12～14d时出现第1次分裂，30d后形成针尖大小的愈伤团。培养50～60d后，再生大量直径为1～2mm左右的愈伤团。部分小愈伤团分别转移到不同碳源的培养基上诱导胚状体再生，培养2个月后，挑出的小愈伤团只长出新鲜的愈伤组织，未分化成胚状体。倍性分析显示所有再生产物均为二倍体。并对转GFP基因国庆1号在原生质体融合中的应用进行了探讨。     

新疆杏果实发育过程中可溶性糖和有机酸的变化

【目的】明确新疆杏果实可溶性糖和有机酸的组成与含量特征,揭示果实发育过程中糖、酸动态变化规律。【方法】以5个新疆杏品种不同发育阶段的果皮和果肉为试验材料,使用高效液相色谱法(high performance liquid chromatograph,HPLC)检测各样品中可溶性糖和有机酸,对比分析果实发育过程中其组成与含量的变化情况。【结果】从新疆杏果实中共检测到3种可溶性糖(蔗糖、葡萄糖和果糖)。其中,蔗糖和葡萄糖为主要糖。果实成熟时,果皮中两种主要糖分别占总糖含量的60.7%—79.1%和13.5%—34.7%,果肉中占总糖含量的65.5%—82.4%和8.2%—25.9%,果皮、果肉中果糖的含量相对较低,仅占总糖含量的4.6%—10.6%和6.5%—10.7%。整个果实发育过程中,3种可溶性糖和总糖的含量均明显增加,各种糖的比例也发生明显变化。葡萄糖占总糖的比例不断减少,果皮中葡萄糖占总糖比例从79.4%降至13.5%,果肉中从74.1%降至8.2%;而蔗糖的比例不断增加,果皮中从11.0%增加到79.1%,果肉中从11.0%增加到82.4%,成为成熟果实中最主要的糖。从新疆杏果实中共检测到6种有机酸,包括苹果酸、奎宁酸、柠檬酸、酒石酸、草酸和富马酸。成熟果实中苹果酸、奎宁酸和柠檬酸是最主要的有机酸,占总酸含量的94.6%—98.3%。果实发育过程中,苹果酸和草酸呈下降趋势,柠檬酸、奎宁酸和富马酸呈上升趋势,酒石酸无明显变化规律。果实发育前期(幼果期至膨大期),总酸的含量明显增加,而在果实成熟过程中(转色期至完熟期)迅速下降。整个果实发育过程中,尽管苹果酸占主导地位,但各品种在有机酸的积累模式上有明显差异,依据其变化特点可分为2种模式:由苹果酸和奎宁酸或苹果酸向苹果酸、奎宁酸和柠檬酸3种主要有机酸共积累。果实成熟时,3种共积累酸的比例在品种间差异较大:‘库尔勒托拥’(KE)、‘阿克牙勒克’(AK)和‘克孜佳娜丽’(KZ)中,柠檬酸苹果酸奎宁酸;‘索格佳娜丽’(SG)中,奎宁酸苹果酸柠檬酸;‘苏联2号’(SL)中苹果酸、奎宁酸和柠檬酸的比例相当。果皮和果肉在可溶性糖、有机酸的组成、含量和积累模式上均无明显差异。【结论】新疆杏果实发育过程中,可溶性糖和有机酸积累呈现明显的变化规律,糖的积累模式由葡萄糖积累型向蔗糖积累型转变,有机酸由苹果酸和奎宁酸积累型或苹果酸积累型向苹果酸、奎宁酸和柠檬酸3种酸共积累的模式转变,糖、酸积累模式的转变在新疆杏果实甜度和酸度以及风味品质决定中都具有十分重要的作用。     

Changes of Aroma Components in Hongdeng Sweet Cherry During Fruit Development

To study the changes of aroma components in sweet cherry during fruit development, the aroma components in sweet cherry fruit from the green stage, the color stage, the commercial stage, and the ripe stage were collected using head-space solid phase microextraction （HS-SPME）, and were analyzed using a gas chromatograph-mass spectrophotometer （GC- MS）. A total of 37 compounds were identified from the sample extracts. Aldehydes, alcohols, and esters were the major constituents. The aroma components behaved differently during the fruit developmental period. C6 aldehydes and aromatic aldehydes were the main aldehydes in the sweet cherry fruit. The contents of C6 aldehydes increased quickly to 84.16% in the color stage, then decreased as ripening proceeded, and then, the contents decreased to 59.20 and 55.58% at the commercial stage and the ripe stage, respectively. The aromatic aldehydes （benzaldehyde） increased as ripening proceeded, and the maximum was found at the ripe stage. Alcohols of sweet cherry fruit included C6 alcohols and aromatic alcohols. The content of （E）-2-hexen-l-ol increased as ripening proceeded. The maximum was found at the commercial stage; alcohol was only found at the ripe stage. Ester components included ethyl acetate, butanoic acid ethyl ester, hexanoic acid ethyl ester, which increased as the fruit ripened. Hexanal, （E）-2-hexenal, benzaldehyde, （E）-2-hexen-l-ol, ethyl acetate, and hexanoic acid ethyl ester were the characteristic aroma components of sweet cherry fruit. These aroma components started to form drastically at the color stage, and the main aroma was formed at the commercial stage, which then turned bad at the ripe stage because of the presence of alcohol. So the optimal harvest time of sweet cherry was at the commercial stage.     

国庆1号温州蜜柑转化酶和糖分积累特性研究

研究了国庆1号温州蜜柑叶片、果皮和果肉中的蔗糖和还原糖含量,以及酸性转化酶(AI)和中性转化酶(NI)的活性变化,结果表明：(1)果肉中的蔗糖和还原糖随着果实的发育而积累增加;果皮和叶片中的还原糖和蔗糖在整个果实发育阶段积累较少。(2)转化酶活性表现出组织特异性,其中果肉中的酸性转化酶活性随着糖分积累而下降,中性转化酶活性基本保持在一个稳定水平;果皮中的转化酶(AI和NI)活性随着果实发育而上升,随后酸性转化酶活性在8月份以后开始快速下降,到果实成熟时都保持在较低水平,中性转化酶在7月中旬就开始缓慢下降,随后也保持在较低水平;叶片中酸性转化酶活性在6～8月份较低,而此时中性转化酶活性却处在较高水平,在8～10月酸性转化酶的活性则快速升高,并保持在较高水平,而中性转化酶活性却逐渐降低,然后保持在较低水平。另外通过分析转化酶活性和糖分关系表明,国庆1号温州蜜柑果肉中的酸性转化酶与果实快速生长和成熟期糖分积累有着重要的关系。     

番茄果实成熟时期维生素C含量的变化

通过对50份番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)材料进行维生素C含量的种质资源筛选,挑选4份具有代表性的材料“13003”、“13573”、“13582”、“13719”,测定不同成熟时期果实中维生素C的含量。结果表明,50份番茄种质资源中筛选出高维生素C材料3份,分别为“13582”、“13633”、“13469”,其中材料“13582”完熟期果实中维生素C含量最高;同一番茄材料不同成熟期果实中维生素C含量不同,但不同材料维生素C含量在整个熟期的变化规律相同,即从绿熟期到白熟期明显升高,之后趋于平缓,转色期略有下降,到完熟期达到最高。     

‘红灯’甜樱桃果实发育进程中香气成分的组成及其变化

 【目的】研究甜樱桃果实发育过程中香气成分的组成及变化。【方法】采用顶空固相微萃取技术提取红灯甜樱桃绿熟期、着色期、商熟期和完熟期果实的香气成分，经气相色谱质谱联用仪进行测定分析。【结果】红灯甜樱桃的香气成分共检测到37种，主要成分为醛类、醇类和酯类。在果实的不同发育阶段，香味组分及其含量差异较大。醛类主要包括C6醛类和芳香醛类，C6醛类相对含量在着色期迅速上升，达84.16%，之后随着果实的成熟逐渐下降，在商熟期、完熟期降至59.20%、55.58%；芳香醛类化合物苯甲醛含量随着果实的成熟逐渐升高，在完熟期达到最高。醇类主要包括C6醇类、芳香醇类及乙醇，C6醇类中(E)-2-己烯-1-醇随着果实的成熟逐渐升高，在商熟期达最大值；乙醇仅在果实完熟期才大量出现。酯类化合物包括乙酸乙酯、丁酸乙酯、己酸乙酯等，其含量随着果实的成熟逐渐升高。【结论】己醛、(E)-2-己烯醛、苯甲醛、(E)-2-己烯醇、乙酸乙酯、己酸乙酯是甜樱桃成熟果实的特征香气成分，这些物质在着色期大量合成，多数在商熟期达到高峰，在完熟期出现大量乙醇，风味变劣。商熟期是甜樱桃的最佳采收期。     

不同氮水平对温州蜜柑产量、叶绿素及碳氮代谢物的影响

为了研究不同施氮量对温州蜜柑(Citrus unshiu Marcov.)产量、叶绿素和碳氮代谢产物的影响,以温州蜜柑为试材,设计N0、N0.75、N1.0、N1.25、N1.5五个氮肥用量水平进行盆栽试验。结果表明,在适宜范围内,增施氮肥能提高温州蜜柑产量,其中,N1.25水平下产量最高,达到1 274.19 g/株;产量、叶片含氮量、叶绿素总量、游离氨基酸、可溶性蛋白质含量随施氮量增加呈先上升后下降趋势,相关系数分别为0.858、0.928、0.867、0.895、0.837,可溶性糖含量随施氮量增加呈下降趋势。在N1.25水平下,产量以及叶片含氮量、叶绿素总量、游离氨基酸、可溶性蛋白质含量达到最高值,是最合理的施氮水平。     

活性氧与果实成熟衰老关系研究进展

活性氧在果实的成熟衰老过程中起着重要的作用。植物体内活性氧的爆发会直接引起衰老,甚至死亡。笔者从活性氧的性质、产生、防御系统以及与乙烯、脂氧合酶的作用等方面对活性氧代谢与果实成熟衰老的关系做了介绍。     

Changes of Reactive Oxygen Species and Related Enzymes in Mitochondria Respiratory Metabolism During the Ripening of Peach Fruit

The fruits of peach cultivar Yuhua 3 were used as materials to investigate the changes of active oxygen and related enzymes in mitochondria respiratory metabolism during ripening of peach fruit, involving their influence on the proceeding of peach fruit senescence. The results showed that the large decrease in firmness occurred between maturity II and IV. The decrease in firmness coincided with an increase in respiratory intensity. Obvious peaks of respiratory intensity lagging to the rapid change of fruit firmness could be shown during peach ripening. Reactive oxygen species （ROS） had a cumulative process and positively correlated with respiratory intensity. During peach ripening, the content of Ca^2＋ increased, the activities of succinic dehydrogenase （SDH）, cytochrome C oxidase （CCO）, H＋-ATPase, and Ca^2＋-ATPase decreased varying in different degree at the later step of ripening. These suggested a close relationship existed between ROS metabolism and mitochondrial respiration, namely, both ROS metabolism and mitochondrial respiration probably played important roles in ripening and senescing of peach fruit.     

溶质和硬质型桃果实成熟过程果肉多肽组学分析

【目的】 比较溶质型和硬质型桃在果实成熟过程中肽段和前体蛋白的差异,为挖掘决定或调控成熟过程的关键多肽提供理论依据。【方法】 通过多肽组学的方法,对溶质型（‘CN13’）和硬质型（‘CN16’）桃内源性多肽特征以及前体蛋白功能进行分析,对比两种肉质桃果实在成熟衰老过程中前体蛋白和多肽的相对含量,并对差异肽段前体蛋白进行富集分析。【结果】 本研究分别提取了‘CN13’和‘CN16’两个时期（S3和S4III）的内源性肽样品进行质谱检测,共鉴定到473个前体蛋白,包含特异性肽段序列2 580条。对肽段的分子量、等电点以及剪切位点进行归纳整理,并对内源性肽段所对应的高丰度前体蛋白进行COG功能注释和pathway富集分析,结果显示前体蛋白主要参与一般功能预测、翻译后修饰、蛋白质转换、能量产生和转换以及碳水化合物运输与代谢等过程。差异肽段前体蛋白的富集分析表明,‘CN13’在成熟过程中差异肽段前体蛋白与氧化还原、活性氧代谢和电子传递链等生物学过程相关,主要参与糖酵解/糖异生、磷酸戊糖途径和RNA转运等途径;而‘CN16’差异肽段前体蛋白是与金属离子反应、无机物反应和镉离子反应等生物学过程相关,主要参与多种环境下微生物新陈代谢、剪接体和RNA转运等途径;同处在S4III时期的‘CN16’和‘CN13’差异肽段前体蛋白与基因表达、翻译和细胞大分子生物学过程相关,主要参与RNA降解、RNA转运和剪接体等途径。【结论】 ‘CN13’和‘CN16’果实在成熟过程中多肽差异显著,差异肽段前体蛋白主要涉及淀粉/蔗糖代谢、糖酵解和核糖体合成等途径,暗示这些代谢途径与桃果实成熟衰老关系密切,为进一步挖掘调控桃果实成熟衰老过程的关键多肽提供了理论参考。