通过花粉管通道导入外源DNA获得抗盐番茄新品系

利用花粉管通道技术,以生长在盐碱地的碱蓬总DNA为供体,以1个不耐盐番茄为受体,进行外源DNA直接导人,对转基因番茄D2代分别浇灌1/2和1/4浓度海水进行筛选,获得了抗盐植株.随机抽取20粒抗盐番茄的种子,以碱蓬基因组为探针,通过基凶组荧光原位杂交技术进行鉴定,有13株番茄有杂交位点存在,初步证实碱蓬基因存在并整合入抗盐番茄的基因组中.     

DNA原位杂交技术在花粉管通道法遗传转化途径研究中的应用

本文对DNA原位杂交技术在研究植物花粉管通道法遗传转化途径中的应用进行了综述,内容涉及花粉管通道法遗传转化途径问题的研究方法、影响原位杂交及其检测效果的技术关键等。笔者根据本人在研究工作中的应用实践,对原位杂交技术中所涉及到的组织切片方法及切片厚度、载玻片处理、探针长度及其标记、杂交信号的检测等关键技术环节着重进行了比较和讨论。     

外源DNA直接导入玉米的分子育种技术研究初报

用玉米作为受体,以水稻、甘蔗、象草、竹子等亲缘较远的植物DNA作为供体,用花粉管通道法、种子萌动浸渍法、受体花粉携带法、未成熟籽粒微注射法将供体DNA直接导入受体.发现玉米D1代在质量性状和数量性状都产生变异,而其中以花粉管通道法效果最好,种子萌动浸渍法次之,注射法最差.     

用花粉管通道将外源DNA导入水稻的研究

以带有ＮＰＴⅡ基因和ＧＵＳ基因的质粒ｐＢⅠ１２１ＤＮＡ为供体，以水稻品种特青２号受体，应用花粉管通道将ＰＢⅠ１２１ＤＮＡ导入受体，获得了１５粒Ｄ０代的种子。扩敏不Ｄ０代种子，得到１５００泣Ｄ１代粒子，在含有卡那霉素的水中萌发，获得１８株绿苗。抽提绿的ＤＮＡ，用ＮＰＴⅡＤＮＡ片段作探针，进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分子杂交，结果呈阳性，表明利用花粉管通道已经将外源的质粒ＤＮＡ导入到特青２号水稻的基因组中。     

导入燕麦DNA的小麦变异后代叶绿素含量变化的研究

利用花粉管通道途径将燕麦Avena sativa L.总DNA导入宁春4号小麦中，对供体、受体及D5代的变异株系进行叶绿素含量测定，发现部分变异后代的叶绿素含量发生了变化，表现类似于供体。表明燕麦的DNA片段已通过花粉管通道进入小麦，并引起生理性状的变异。     

利用C基因组DNA和C0t-1 DNA对药用野生稻、大颖野生稻基因组的比较分析

采用药用野生稻C基因组DNA及C0t-1 DNA为探针,分别对药用野生稻(CC)自身和大颖野生稻(CCDD)体细胞染色体进行了基因组原位杂交(GISH)和荧光原位杂交(FISH)分析。利用C基因组DNA探针进行分析显示,药用野生稻24条染色体都被杂交信号覆盖;而在大颖野生稻中可区分为24条CC型染色体(杂交信号较强)和24条DD型染色体(杂交信号较弱)。以C基因组C0t-1 DNA探针进行分析显示,在药用野生稻染色体的端粒、着丝粒、近着丝粒区域有很强的杂交信号,而大颖野生稻中也有24条染色体在这些区域红色杂交信号较强,另24条染色体的杂交信号很弱。表明利用C基因组DNA和C0t-1 DNA为探针的GISH和FISH技术,都能很好地将大颖野生稻C、D染色体组区分开,C和D基因组亲缘关系较远,二者具有不同起源。与药用野生稻C基因组相比,大颖野生稻C基因组出现了一些分化。这些都为研究大颖野生稻C和D染色体组起源,探讨异源四倍体进化机制奠定了基础。     

芝麻花粉管介导胰岛素基因的遗传转化

为建立芝麻油体表达体系这一新型植物生物反应器,采用花粉管通道法,将含有胰岛素基因的双元表达载体PBI121质粒转入冀黑芝1号芝麻。对转化株后代进行卡那霉素筛选、PCR扩增及PCR-Southern杂交检测。结果显示:胰岛素基因已整合到受体芝麻的基因组DNA中,并获得了T_5转化株,胰岛素基因可以遗传到第5代转化株。说明芝麻花粉管介导胰岛素基因的遗传转化油体表达体系可行。     

外源DNA导入培育水稻抗白叶枯病种质材料的研究

在水稻自花授粉 1～ 3h后 ,利用其形成的花粉管通道 ,将提取的含有抗白叶枯病Xa2 1基因的水稻IRBB2 1的总DNA直接导入受体水稻豫粳 6号中 ,经白叶枯病菌接种鉴定 ,在D1代获得抗白叶枯病材料 3株。利用RAPD技术对该组合的受体、供体及转化后代进行分析 ,证明供体DNA片段已整合到受体基因中。     

普通小麦DNA导入裸大麦变异观察及SSR分子验证

利用花粉管介导法将普通小麦(宁春4号)的总DNA片段导入裸大麦(康青3号)中获得18个变异品系,通过对农艺性状的观察,在裸大麦中发现了普通小麦的部分农艺性状;经过对受体、供体和变异后代的SSR鉴定分析,18对SSR-PCR中16个位点发现了普通小麦信号,从DNA分子水平证明了普通小麦DNA片段可以通过花粉管通道介导法导入裸大麦品种康青3号中,并能够整合到其基因组中.     

薏苡不同种质的基因组原位杂交分析

为了研究薏苡属不同种质之间的关系,采用基因组原位杂交(GISH)技术,以四倍体栽培薏苡(2n=20,AABB)基因组总DNA作为探针,分别对广西的栽培薏苡、野生薏苡和水生薏苡体细胞中期染色体进行基因组原位杂交。杂交结果显示,栽培薏苡和野生薏苡染色体都被强烈而密集的杂交信号所标记,说明野生薏苡与栽培薏苡在基因组染色体水平上的同源程度很高,保守重复序列占很大比重;水生薏苡的基因组中有20条染色体的DNA成分与栽培薏苡的基因组DNA高度同源,推断供试的水生薏苡种属于广西六倍体水生薏苡居群。