鳜鱼TCRα基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

根据GeneBank上鳜鱼TCRα基因序列设计并合成特异性引物,以鳜鱼β-actin基因为内参,采用RT-PCR方法从鳜鱼的胸腺总RNA中扩增得到鳜鱼TCRα和β-actin基因,将目的片段纯化后克隆到PMD18-T载体上,测序鉴定。以阳性质粒为标准品,采用SYBR GreenⅡ染料法进行实时荧光定量PCR扩增,构建标准曲线并进行溶解曲线分析。结果表明,鳜鱼TCRα基因的Ct值与标准品稀释度在102～108拷贝/μL范围呈良好的线性关系,r2达0.99以上,溶解曲线分析表明产物为特异的单峰。     

鳜鱼集约化养殖病害防治技术

为防治鳜鱼养殖中的病虫害,阐述了鳜鱼暴发性传染病携带病毒鳜鱼的应激性规定和鳜鱼养殖水生态平衡调控作为预防鳜鱼病毒病的基本原则,后期对养殖户有一定指导性。     

RAPD在柑桔珠心苗鉴定上的应用

以刘本橙 （刘勤光×本地早） ×代代及其 ３ 个实生苗后代为试材， 用 Ｒ Ａ Ｐ Ｄ 标记对其子代进行鉴定。从 ５０ 个引物中 筛选出 １２ 个引物能在父母本及子代上扩增出清晰的带型， 其中有 １１ 个引物能在父母本间扩增出差异， １ 个引物（ Ｓ２２８） 差异不明显。上述 １２ 个引物中有 １１ 个引物在 ３ 个子代间扩增带型相同， 且与母本带型一致； 另 １ 个引物（ Ｓ２０２） 在母本上的扩增带 （１ ２００ ｂｐ） 在 ２ 个子代中没有出现。３ 个子代中都没有来自父本的特异扩增带。结果表明， ３株实生苗均为珠心苗。     

传染性脾肾坏死病毒、鳜鱼蛙病毒和鳜弹状病毒三重PCR检测方法的建立

【目的】建立可同时检测传染性脾肾坏死病毒（infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV）、鳜鱼蛙病毒（Siniperca chuatsi ranairidovirus,SCRIV）和鳜弹状病毒（Siniperca chuatsi rhabdovirus,SCRV）的三重PCR检测方法,为鳜鱼等养殖品种流行病学调查提供方法支撑。【方法】根据ISKNV MCP基因、SCRIV MCP基因和SCRV N基因设计3对特异性引物,对PCR扩增反应中的退火温度和引物用量进行优化,建立可同时检测 ISKNV、SCRIV和SCRV的三重PCR方法。为验证该方法的敏感性和特异性(备测病毒为IPNV、GCRV、KHV、SGIV、NNV、TiLV和SVCV),对22份疑似感染ISKNV、SCRIV和SCRV的样品分别进行单一和三重PCR检测。【结果】成功建立了三重PCR检测方法,利用该方法可同时检测ISKNV、SCRIV和SCRV,特异性较好,对IPNV、GCRV、KHV、SGIV、NNV、TiLV、SVCV等无扩增;该方法敏感性好,对3种病毒核酸的检测下限均为0.01 ng/μL;利用该方法和3种病毒单一PCR方法同时对22份临床样品进行检测,结果显示2种方法吻合率为100%,其中ISKNV阳性率为27%、SCRIV 阳性率为41%、SCRV阳性率为9%、ISKNV和SCRIV混合感染阳性率均为9%,无ISKNV、SCRIV和SCRV混合感染。【结论】建立的三重PCR检测方法具有特异性强、灵敏度高等特点,可对这3种病毒进行快速鉴别诊断。     

鳜鱼传染性脾肾坏死病和弹状病毒病二联灭活疫苗毒种及种子批的研究

【目的】建立鳜鱼传染性脾肾坏死病毒（ISKNV）和弹状病毒（SCRV）二联灭活疫苗毒种库及种子批。【方法】以ISKNV-QY0910株和SCRV GM1503株为原始毒种,扩繁10代（F1~F10）后检测各代病毒对鳜鱼脑组织细胞系（CPB）的致病性及其滴度,并检测其对鳜鱼的毒力。PCR扩增ISKNV的主衣壳蛋白(MCP)基因、RT-PCR法扩增SCRV G蛋白基因序列,检测ISKNV和SCRV毒种的特异性。对F1、F5和F10代ISKNV、SCRV毒种进行细菌、霉菌、支原体及鳜鱼蛙病毒（RANA）和神经坏死病毒(NNV)检测,检验毒种的纯粹性。分别将F1、F5和F10代ISKNV、SCRV病毒液用甲醛灭活后制备灭活疫苗,免疫鳜鱼21 d后攻毒,连续观察14 d,待鱼体稳定后统计死亡率并计算免疫保护率（RPS）。将ISKNV和SCRV毒种湿毒保存于-80 ℃冰箱,每6个月取3支检测病毒滴度,以确定毒种的保存期。【结果】各代次毒株感染CPB细胞后产生的CPE形态及病变速度基本相同,SCRV滴度为10^8.58~10^8.875 TCID₅₀/mL,ISKNV滴度为10^7.38~10^7.625 TCID₅₀/mL。F1、F5和F10代ISKNV按10⁴ TCID₅₀/mL、SCRV按10^6.5 TCID₅₀/mL对鳜鱼攻毒（每尾0.1 mL）,致死率均超过90%。ISKNV和SCRV各代次毒种可分别扩增出1 300 bp的MCP基因和1 500 bp的G基因,特异性良好。ISKNV、SCRV毒种无细菌、霉菌、支原体及鳜鱼蛙病毒和神经坏死病毒污染。各代次病毒灭活疫苗对鳜鱼安全有效,免疫保护率ISKNV可达92%以上,SCRV可达84%以上;湿毒-80 ℃保存,保存期为36个月。【结论】10代以内ISKNV和SCRV的生物学特性稳定,可用于鳜鱼ISKNV和SCRV二联灭活疫苗的制备与检验。     

鄱阳湖鳜鱼的生物学

研究了鄱阳湖鳜鱼（翘嘴鳜）的生长、食性、性腺发育及形态特征。鄱阳湖鳜鱼的年龄组成以第二、三年为主，占８５％。雌性鳜鱼的生长速度在各龄中均比雄性的要快。鳜鱼体长与体重呈曲线回归，关系式为Ｗ＝０．０２２５２Ｌ３．０９２４。鳜鱼在鄱阳湖无明显停食期，属终年摄食鱼类，食物主要为鲤、鲫、虾等。食物鱼长度平均为６．６ｃｍ，最大不超过１２ｃｍ。性腺发育呈现明显的周年变化。雌性鱼成熟系数周年变化在０．７９％～１０．０７％，雄性在０．２４％～３．８３％，两者均在４、５月达到最大，以后减小。成熟年龄雌鱼为２冬龄，雄鱼为２夏龄。     

池塘套养鳜鱼实用技术

鳜鱼，又名桂花鱼、季花鱼，是名贵的淡水多脂类鱼种。全国大部分湖、河里都有出产，其品种有斑鳜、波纹鳜、大眼鳜、暗鳜等多种。洞庭湖所产的鳜鱼大都是斑鳜，不仅产量高，而且品质好，在鳜鱼中独树一帜，格外名贵。鳜鱼肉质细嫩，味道鲜美，营养丰富，自古以来就是席上...     

凡纳滨对虾微卫星DNA的筛选及其特性的研究

采用小片段克隆法构建凡纳滨对虾的部分基因文库，用放射性同位素[y-^12P]ATP标记的（CA）15（AT）12（AG）12、（AAT）8、（AAG）8做探针筛选阳性克隆。共获得微卫星序列152个，其中二核苷酸为核心的微卫星序列：（AG）a〉（AC）a〉（AT）a，三核苷酸为核心的微卫星序列：（AAT）a〉（CAT）a〉（AAG）a应用引物设计软件primer3．0设计引物105对。选择合成10对理论上易出现影子带的引物，筛选后用31个凡纳滨对虾个体对这些引物进行了评估，结果10对引物中有8对引物能扩增出谱带，其中1对扩增产物出现影子带，1对扩增产物为单态．有6对扩增产物出现多态。     

凡纳滨对虾微卫星DNA的筛选及其特性的研究

采用小片段克隆法构建凡纳滨对虾的部分基因文库，用放射性同位素[y-^12P]ATP标记的（CA）15（AT）12（AG）12、（AAT）8、（AAG）8做探针筛选阳性克隆。共获得微卫星序列152个，其中二核苷酸为核心的微卫星序列：（AG）a〉（AC）a〉（AT）a，三核苷酸为核心的微卫星序列：（AAT）a〉（CAT）a〉（AAG）a应用引物设计软件primer3．0设计引物105对。选择合成10对理论上易出现影子带的引物，筛选后用31个凡纳滨对虾个体对这些引物进行了评估，结果10对引物中有8对引物能扩增出谱带，其中1对扩增产物出现影子带，1对扩增产物为单态．有6对扩增产物出现多态。     

鄱阳湖鳜鱼窒息点与耗氧率的初步研究

报道了鄱阳湖鳜鱼（翘嘴鳜）窒息点与耗氧率的初步研究结果；在水温２３～２４℃时，鄱阳湖鳜鱼的耗氧率为１５４．０８ｍｇ／ｋｇ·ｈ，耗氧率随个体增大而减少，鄱阳湖鳜鱼窒息点为０．４８ｍｇ／Ｌ。     

耕层土壤镰刀菌单胞系的建立和基因组DNA的快速抽提

采用改进的镰刀菌选择性培养基和产孢培养基对采自大田、苗圃耕层土壤中的镰刀菌进行单孢分离 ,共分离出 5 0个镰刀菌菌株 ,而且改进的镰刀菌选择性培养基对目标菌选择性强 ,产孢量大。用改进的SDS -SEAVG分离法和快速抽提法提取镰刀菌基因组DNA ,结果显示 ,用改进的镰刀菌DNA抽提方法抽提的DNA分子量大于 5 0kb ;用快速抽提方法获得的镰刀菌单孢系DNA可用于PCR扩增。     

银杏木质部特异定位表达基因启动子克隆

用PCR方法成功地从木本植物银杏基因组总DNA中扩增克隆得到木质部细胞特异性表达的富甘氨酸蛋白质基因 (GRP1.8)的启动子 ,并克隆到pUC18载体中 .与菜豆的序列比较发现 ,碱基同源性高达 98%以上 .除发现启动子特有的TATAbox序列外 ,还发现在菜豆序列中所没有的GATAG碱基序列     

梅花基因组AFLP银染反应体系的建立和优化

采用改进的SDS DNA提取方法从梅花的嫩叶和老叶中提取获得总DNA .所得DNA样品的OD2 6 0 OD2 80 值在1 7～ 1 9之间 ,琼脂糖凝胶上主带清晰、较少降解、样品纯度高、蛋白去除干净且得率高 .该体系对原提取程序作了多处简化 ,使操作简便、快捷、高效 ,适合于梅花DNA提取 ,所提取的DNA样品不含PCR反应抑制剂及其他酶反应抑制剂 ,可被限制性内切酶MseⅠ和EcoRⅠ完全酶切 ,适合AFLP PCR反应应用 ,得到清晰的指纹式样 .     

上海地区番茄烟粉虱传双生病毒PCR检测

番茄黄化曲叶病毒属于双生病毒,根据其基因序列设计引物COPR、AV494和COPR、COPL,进行PCR检测,结果发现:从感病的DNA中扩增出了356 bp和570 bp目的片段,而健康植株和抗原材料DNA中无此扩增带,表明上海地区番茄黄化曲叶病毒属于烟粉虱传双生病毒。     

浸没燃烧式气化器的设计缺陷及改进方法

大连液化天然气有限公司接收站在开工试运时，由于SCV运转不正常，经常联锁停车。因此，需要对SCV进行改造，以使设备运转正常，满足生产需要。通过割掉一段点火枪保护套管，加长点火枪向下伸出的长度，改变了原来需要点火4～5次才能点燃SCV的状况，使点火一次成功率达到100％；通过调换火焰检测器和观察视镜的位置，使SCV不再因为炉膛内有火焰，但火焰检测器未检测到而造成误动作停车；通过在天然气主管道上放空阀处增加限流孔板，使点火时不再发生因入口压力过高导致的联锁停车。通过以上技术改造，确保了SCV的平稳运行。（图3，参7）     

利用单线虫多重PCR技术快速制备DNA分子量标准

基于单只线虫6对染色体及多重PCR技术建立一种特异性扩增特定长度核酸片段的方法,进而探索其在常规核酸分子量标准制备中的应用。利用多重PCR引物设计及特异性评估软件以秀丽线虫6对染色体为模板,分别设计扩增不同长度核酸片段的特异性引物对,并直接对单只秀丽线虫进行多重PCR扩增,采用20g/L琼脂糖凝胶电泳进行分离鉴定并采集图像,通过系统研究优化获得特异性高的1～6重PCR扩增产物,产物大小经鉴定与预期目的条带一致,6重PCR扩增产物条带与常规分子量标准DL 2 000相应条带完全吻合,说明采用该方法能够有效制备特定片段大小的分子量标准。     

怀头鲇的含肉率和肌肉营养成分分析

报道了怀头鲇（Ｓｉｌｕｒｕｓ ｓｏｌｄａｔｏｖｉ）含肉率和营养成分的测定结果,并将此结果同南方大口鲇的含肉率、营养成分进行了比较。结果表明,怀头鲇的含肉率低于南方大口鲇和鲇,但怀头鲇肌肉氨基酸总量、４种鲜味氨基酸总量以及８种人体必需氨基酸总量均高于南方大口鲇和鲇。     

玫烟色棒束孢几丁质酶基因部分序列的克隆及分析

为了得到玫烟色棒束孢几丁质酶基因的保守区域,根据GenBank中几丁质酶基因的同源性序列设计简并引物,采用DNA和RNA分别作为模板扩增玫烟色棒束孢的几丁质酶保守区域。结果表明,DNA扩增的含有3个内含子,RNA扩增的不含内含子;所得到的氨基酸序列具有几丁质酶18族的典型特征,即1个酶作用活性位点和几丁质结合区。     

香菇浸提液对乳酸菌生长的作用

研究了香菇浸提液对乳酸菌生长的影响。结果表明 :香菇浸提液对酸奶中的嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌均有促进作用。 1%添加量使发酵 7h的酸奶混合菌比生长速率提高了 3 3% ,球菌提高了 5 5 % ,杆菌提高了3 2 %。     

培养基对海洋酵母脂肪酸组成的影响

在海洋酵母基础培养基中添加了省事提取液、ＫＮＯ３、ＣｕＳＯ４和ＺｎｓＯ４４种因子,采用正交试验考察以上因子对海洋酵母脂肪酸组成的影响。研究结果表明,各试验组海洋酵母脂肪酸组成及含量均有较明显差异,其中ＫＮＯ３是影响酵母总脂含量和ｎ－３系列多不饱和脂肪酸（ＰＵＦＡ）含量的限制因子,省事提取海和ＺｎＳＯ４并列为制约酵母收获量的因素。４种因子对海洋酵母ｎ－３系列ＰＵＦＡ组成的影响不大。同时讨论了对微生物