香菇多糖对猪瘟疫苗免疫效果的影响

【目的】为了进一步提高猪瘟疫苗的免疫效果,探讨香菇多糖对猪瘟疫苗的免疫增强作用,为新型猪瘟疫苗免疫增强剂的研发提供理论依据。【方法】以不同剂量的香菇多糖作为猪瘟疫苗的稀释液免疫断奶仔猪,分别于免疫当天、免疫接种后第7、14、21、28d无菌操作采集血样,运用ELISA检测血清猪瘟抗体水平。【结果】香菇多糖可显著提高血清中的猪瘟抗体水平,第4组(0.1875mg香菇多糖)于免疫后14d和28d,猪瘟抗体阻断率平均值分别比猪瘟疫苗专用稀释液稀释组提高13.6%和12.2%;免疫合格率为100%。【结论】实验结果表明,将香菇多糖作为猪瘟疫苗稀释液稀释,可特异性提高猪体的免疫应答,香菇多糖具有显著增强猪瘟疫苗免疫效果的作用。     

苜蓿多糖对猪瘟兔化弱毒疫苗免疫效果的影响

用苜蓿多糖作为猪瘟兔化弱毒疫苗的强化剂对60日龄体重18～20 kg的仔猪进行免疫试验研究.B淋巴细胞和抗体水平监测结果表明,苜蓿多糖可使猪外周血液的B淋巴细胞增多,血清抗体水平提高.攻毒试验表明,参试的2批猪,试验组潜伏期（34～72 h和36～68 h）,明显长于对照组（12～48 h和14～48 h）,发热温度试验组为（40.5～40.9℃和40.6～40.8℃）低于对照组（41.4～42.0℃和41.2～41.7℃）,高热期试验组为（30～96 h和46～98 h）低于对照组（72～148 h和72～146h）.说明苜蓿多糖对猪瘟疫苗免疫效果具有明显的强化作用.     

免疫增强剂对猪瘟疫苗细胞免疫的影响

为了查明免疫增强剂是否能够提高猪瘟疫苗的细胞免疫效果,采用猪用转移因子、黄芪多糖注射液和猪瘟疫苗专用稀释液直接稀释猪瘟兔化高效细胞弱毒苗的方法进行了猪瘟疫苗免疫试验,并比较免疫后不同时间段内猪血清中的白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,综合评价3种不同猪瘟疫苗稀释液对猪瘟疫苗细胞免疫效果的影响。结果表明,猪用转移因子和黄芪多糖能不同程度地提高IFN-γ和TNF-α细胞因子的含量,降低IL-4细胞因子的含量,且猪用转移因子作用较强。因此,转移因子和黄芪多糖均可以提高猪瘟疫苗的细胞免疫效果,且猪用转移因子有较强增强细胞免疫的作用。     

黄芪多糖对猪瘟活疫苗免疫效果的影响

分别用1％的黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)、猪瘟疫苗专用稀释液稀释猪瘟活疫苗并免疫猪,比较免疫后不同时间段外周血中淋巴细胞增殖活性以及血清中的猪瘟抗体、白介素2(InterLeukin 2,IL-2)、白介素4 (In-terLeukin 4,IL-4)水平,综合评价黄芪多糖对猪瘟活疫苗免疫效果的影响,为临床使用提供理论依据.     

黄芪多糖对断奶仔猪生产性能与猪瘟疫苗免疫效果的影响

[目的]探讨黄芪多糖对断奶仔猪生产性能及对猪瘟疫苗免疫效果的影响,为黄芪多糖在养猪生产中的合理应用提供依据。[方法]将120头21日断奶仔猪随机分成4组（对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组、试验Ⅲ组）,对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别在基础日粮中拌入100、500和1000me,／kg黄芪多糖,通过测定日增重、日采食量、料肉比以及血清中猪瘟抗体效价、110和INF-γ含量,评价黄芪多糖不同添加水平对仔猪生产性能与猪瘟疫苗免疫效果的影响。[结果]试验Ⅱ、Ⅲ组与对照组在日增重、料肉比、血清中猪瘟抗体效价、IL-4和INF-γ,含量方面差异均显著（P〈0．05）。[结论]添加500和1000mg／kg黄芪多糖均能显著提高断奶仔猪的生产性能。增强猪瘟癌苗的竞．癌效粟．     

表达猪瘟病毒石门株E0和/或E2基因重组非复制型腺病毒疫苗的免疫保护试验

用已构建好的表达猪瘟病毒石门株E0基因的重组腺病毒pAd-E0、表达猪瘟病毒石门株E2基因的重组腺病毒pAd-E2以及联合表达猪瘟病毒石门株E0-E2基因的重组腺病毒pAd-E0-E2,肌肉和皮下接种免疫商品猪2次(间隔20 d),同时设非重组腺病毒PAD-CMV、常规猪瘟疫苗和空白对照组。二免21 d后进行CSFV石门株强毒超致死量(1 000倍TCID50)攻击,研究表达猪瘟保护性抗原基因重组腺病毒疫苗的免疫效果。结果表明,pAd-E0、pAd-E2和pAd-E0-E2免疫组猪的死亡率分别为50%,25%和25%,而常规猪瘟兔化弱毒疫苗免疫组的死亡率为40%,pAd-CMV免疫组和空白对照组猪全部死亡;在攻毒前,重组腺病毒免疫组抗体水平普遍较低,商品化疫苗免疫组能100%检测到抗体,而非重组腺病毒和空白对照没有检测到抗体;攻毒后pAd-E0、pAd-E2和pAd-E0-E2试验组中分别有75%,50%和50%猪体温超过40℃,常规苗试验组80%体温超过40℃,而PAD-CMV组和空白对照组所有试验猪体温均超过40℃,表明重组腺病毒疫苗具有一定的保护效果。表明,仅含有E0基因的重组腺病毒pAd-E0的免疫保护效果和常规疫苗还有距离;含有E2基因和E0-E2基因的重组腺病毒的免疫保护效果不亚于常规疫苗。     

黄芪多糖对猪瘟活疫苗免疫应答的佐剂作用

为研究黄芪多糖对猪瘟活疫苗的佐剂作用,分别用0.5％黄芪多糖、疫苗专用稀释液、生理盐水（对照）稀释猪瘟耐热保护剂活疫苗免疫猪,测定免疫后不同时间段内血清中 IgG 及其亚型IgG1、IgG2、IgG3、IgG4和细胞因子IL 2、IL 6的含量。结果显示,与对照组相比,黄芪多糖作为疫苗稀释液可以显著提高血清中IgG及其亚型和细胞因子IL 2、IL 6的含量。与疫苗专用稀释液组相比,在免疫后第7、14、28天,黄芪多糖组IgG含量均提高,分别提高1.6％（P＞0.05）、6.4％（P＜0.05）、7.1％（P＜0.05）,IL 2含量分别提高12.1％（P＜0.05）、2.9％（P＞0.05）、15.3％（P＜0.05）,IL 6含量差异均不显著。表明,黄芪多糖作为疫苗稀释液对猪瘟活疫苗具有良好的佐剂作用。     

猪瘟疫苗免疫失败原因分析及措施

猪瘟严重危害养殖业的发展和食品安全,猪瘟疫苗免疫工作非常重要。在实际养殖过程中,由于猪瘟疫苗问题、免疫操作问题、免疫程序不合理等原因造成疫苗免疫失败。本文对猪瘟疫苗免疫失败的原因进行归类、分析,并根据具体原因提出改进措施。     

猪圆环病毒2型感染对猪瘟疫苗免疫效果的影响

为探索在猪圆环病毒2型(PCV-2)阳性猪场免疫猪圆环病毒疫苗对猪场实际临床生产中猪瘟疫苗免疫效果的影响,遂将某规模化猪场的一栋存在PCV-2感染的150头产房仔猪随机分为试验组和对照组,每组75头,试验组在14日龄免疫某进口PCV-2杆状病毒载体灭活疫苗,对照组不免疫,并分别在PCV-2疫苗免疫前和猪瘟疫苗二免后30天每组随机采血18头仔猪检测猪瘟抗体。结果显示:PCV-2疫苗免疫前两组仔猪的猪瘟抗体水平无明显差异,猪瘟疫苗二免后30天,试验组的猪瘟抗体平均值和猪瘟抗体离散度均显著好于对照组。表明,PCV-2的感染会对猪的免疫系统造成损害从而抑制猪瘟疫苗的免疫应答,在PCV-2阳性猪场免疫猪圆环病毒疫苗能够显著增强猪瘟疫苗的免疫效果。     

不同剂量猪瘟疫苗对免疫效果的影响

猪瘟是南猪瘟病毒（HCV）引起的高度传染性疾病,该病各种年龄猪均易发生,一年四季流行．严重威胁着养猪业发展。猪瘟最有效的控制方法是疫苗免疫．为研究猪瘟疫苗不同剂量对免疫效果的影响,本人在当地某猪场进行了免疫试验。本试验设计了4种不同的免疫剂量,其目的在于通过考察猪瘟疫苗的不同剂量对免疫效果的影响,以确定适宜的疫苗剂量,为科学制定猪瘟免疫程序,提供依据。     

猪瘟病毒E2基因的哺乳动物细胞表达

利用PCR技术扩增出猪瘟病毒主要结构蛋白E2基因的全序列,将其克隆到真核表达载体PEGPF-C1中,获得重组质粒PEGPF-E2,经PCR,酶切鉴定和序列分析证明目的基因的大小、插入位置和读码框完全正确。利用脂质体将阳性质粒PEGFP-E2转染入猪肾来源的细胞PK-15中,G418筛选出阳性的细胞克隆,通过PCR证明E2基因存在于筛选出的阳性细胞克隆中。利用荧光倒置显微观察阳性细胞发现有融合蛋白的表达,利用夹心ELISA猪瘟病毒抗原检测试剂盒检测证明表达的融合蛋白为猪瘟病毒E2基因编码蛋白。     

RT-PCR技术检测猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)

根据猪PRRSV的ORF7基因序列,设计并合成了1对引物,以PRRSV RNA为模板,筛选最佳反应条件,建立了检测PRRSV的RT-PCR方法。应用该方法对病毒细胞培养物进行基因扩增,均获得了分子量为443bp的特异性目的片段,而对PCV2、PRV、CSFV及Marc-145细胞进行同条件检测,结果均为阴性;PRRSV扩增产物测序结果与文献报道的PRRSV其他毒株序列同源性达92%~98%。敏感性试验表明,该体系可检测到2.39TCID50的PRRSV;对2004~2005年送检的81份临床样品进行检测,阳性率为23.4%。上述研究结果表明,建立的RT-PCR特异性好、敏感性高,可用于猪繁殖与呼吸综合征的诊断和流行病学调查。     

R-phycoerythrin标记抗猪瘟病毒荧光抗体的制备及其与FITC标记荧光抗体检测的比较研究

用摩尔比100∶1的化学交联剂SPDP分别将RPE、抗猪瘟病毒抗体衍生,两种衍生物再以摩尔比1∶1液相交联,HPLC纯化制备出RPE标记的抗猪瘟病毒荧光抗体.对制备的荧光抗体从荧光特性、抗体活性、稳定性及纯度等方面进行鉴定.以澳化氰活化的琼脂糖微球为固相载体,采用固相免疫荧光检测法,以制备的RPE、FITC分别标记的荧光抗体检测猪瘟病毒细胞毒.结果表明,RPE标记的荧光抗体检测阳性微球在蓝绿光激发下发射桔黄色荧光,荧光明亮,无本底光干扰,检测灵敏度高达2.67×10-6mg·mL-1,是FITC标记的荧光抗体检测灵敏度的10倍.RPE可替代FTTC或与FITC等荧光染料一起用于多色荧光免疫检测.     

抗猪瘟IgY的制备及临床应用初报

应用合理的免疫程序,用猪瘟抗原免疫蛋鸡,并以水稀释法、聚乙二醇萃取法结合透析对所产蛋的卵黄部分进行处理,成功地提取到抗猪瘟IgY(SF-IgY),获得率为6.83mg/mL。该制剂纯度为45.14％,能中和1000MID猪瘟兔化种毒,用于紧急治疗猪瘟后,临床应用效果确实。     

猪瘟病毒石门重组标记毒株的构建与拯救

【目的】中国控制猪瘟主要采用疫苗免疫,现有的猪瘟兔化弱毒疫苗有较好的免疫保护效果,但是不能从血清学上区分疫苗免疫猪与自然感染猪,猪瘟标记疫苗的研制与配套检测技术的开发可有效解决这一问题。【方法】利用猪瘟病毒低温诱变弱毒T株感染性克隆,将其全长结构蛋白基因替换为猪瘟病毒石门毒株全长结构蛋白基因,得到猪瘟石门重组病毒的全长感染性克隆pSMT;随后在pSMT E1蛋白的C端插入Flag抗原基因作为鉴别标记,构建猪瘟石门重组标记病毒的感染性克隆pSMT-Flag。经电转染法拯救出两株重组病毒vSMT和vSMT-Flag,通过SK6细胞进行病毒传代以获得重组病毒。【结果】多组酶切鉴定表明两株重组质粒成功构建,PCR扩增及测序、免疫过氧化酶单层细胞试验（IPMA）表明重组病毒已成功拯救且能成功传代。【结论】该标记病毒能够与Flag单抗发生特异性反应,且不影响E2蛋白中和表位与猪瘟单抗的结合,因此该毒株为研制CSFV新型标记疫苗提供了思路。     

猪瘟抗体ELISA效价与保护力的相关性

对不同猪瘟抗体水平的6个试验组的24头猪及4头对照组猪用已建立的“ELISA间接法检测猪瘟抗体”法进行血清猪瘟抗体ELISA效价的测定,用石门系猪瘟强毒攻击受试猪测定保护力.研究结果表明,血清猪瘟抗体ELISA效价在1:30以上多数能够抵御猪瘟强毒的攻击.该临界线的确定为“ELISA间接法检测猪瘟抗体”技术在猪群免疫监测及防疫注射质量考核中的推广应用提供了依据.     

猪瘟病毒流行病学、病原致病特性及猪瘟综合防制研究

猪瘟是由猪瘟病毒引起猪的高度致死性、接触性传染病，严重危害全球养猪业的重要传染病，也是我国计划要消灭的重大动物疫病之一。近年流行态势十分复杂，本文就CSF的流行情况、病原致病特征及综合防治技术研究等方面进行全面概述，井为猪瘟的防制提出具体实施方案。     

屠宰厂猪瘟、猪丹毒检验方法优化

收集疑似猪丹毒、猪瘟病例,整理在宰前检疫、宰后检验过程中皮肤、体内各器官系统出现的病理变化特点,用微生物学检查和血清学检查佐证屠宰检验结果,对检出猪丹毒、猪瘟生猪按规定处理。结果屠宰检验过程收集到出现典型的皮肤病理变化特征及其他组织器官病变的疑似猪丹毒、猪瘟病例,从疑似猪丹毒病料中分离到猪丹毒杆菌,且分离株可使小鼠感染死亡;对疑似猪瘟病例30份血清进行血清学检查,阳性率达73.3%。表明熟练地掌握猪丹毒、猪瘟病理变化鉴别要点可以提高不合格生猪的检出率。     

苜蓿花叶病毒复制酶(P2亚基)基因3''''端cDNA植物表达载体的构建

将克隆的苜蓿花叶病毒中国分离株(AlMV—Ch)复制酶(R亚基)基因3’端约1／2序列及其3’端非编码区(1234bp)cDNA重组于植物表达载体pROKⅡ中，构建了其正链RNA的表达载体pAMR3T，为进一步开展转基因研究创造条件。     

仔猪血清猪瘟抗体动态的数学模型

作者对8窝104头仔猪血清的猪瘟抗体用酶联免疫吸附试验间接法进行测定,在获得大量数据的基础上,使用多项式回归分析方法,建立了仔猪血清猪瘟抗体酶联免疫吸附试验测定A值(y)关于日龄(x)的回归方程,本模型的意义在于对各日龄(3日龄～25日龄)仔猪血清猪瘟抗体A值的观察值能进行点预测及区间预测。另4窝45头仔猪血清猪瘟抗体A值作为考验样本,考验样本值都落在置信度:勾0.90的预测区间之内。模型提示,猪瘟抗体水平的最低点在20～21日龄;猪瘟母源抗体的半衰期为11.86天。