稻瘟病菌拮抗微生物的筛选

为宁夏水稻稻瘟病的生物防治提供生防种质资源,开展了稻瘟病菌拮抗微生物的筛选。结果表明:从宁夏稻田土壤300株细菌中筛选出48株拮抗微生物,其中2株鉴定为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens),6株菌为皱缩假单胞菌(P. corrugate);从宁夏水稻叶片213内生菌中筛选出13株拮抗微生物,其中3株鉴定为嗜碱性假单胞菌(P. alcaliphila),1株为油菜假单胞菌(P. brassicacearum),1株为恶臭假单胞菌(P. putida)。7株假单胞菌对镰刀菌(Fusarium)、草莓炭疽病菌(Colletotrichum gloeospoioides)、叶枯病菌(Alternaria)等6种病原菌具有较好的拮抗作用,具有广泛的田间应用潜力,可以用于宁夏水稻稻瘟病的综合治理。     

通过ITS序列分析鉴定云南重楼内生真菌

采用组织分离法从云南重楼(Paris polyphylla var.yunnanensis)根、根状茎和叶3个部位的组织块中分离出内生真菌,并对这些内生真菌进行了传统形态学和分子生物学(ITS序列)鉴定。共分离到内生真菌26株,鉴定为8属9种,其中从叶中分离出24株,从根中分离出2株,鉴定为1属1种,即球毛壳菌(Chaeto miumglobosum)。在分离出的9种内生真菌中,优势菌种为1号菌和3号菌,分别被鉴定为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和博宁炭疽菌(Colleto trichumboninense),分离率分别为23.07%和19.23%。     

通过ITS序列分析鉴定云南重楼内生真菌

采用组织分离法从云南重楼(Paris polyphylla var.yunnanensis)根、根状茎和叶3个部位的组织块中分离出内生真菌,并对这些内生真菌进行了传统形态学和分子生物学(ITS序列)鉴定。共分离到内生真菌26株,鉴定为8属9种,其中从叶中分离出24株,从根中分离出2株,鉴定为1属1种,即球毛壳菌(Chaeto miumglobosum)。在分离出的9种内生真菌中,优势菌种为1号菌和3号菌,分别被鉴定为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和博宁炭疽菌(Colleto trichumboninense),分离率分别为23.07%和19.23%。     

玉米内生联合固氮菌的分离与鉴定

试验对玉米内生固氮菌进行分离、鉴定,并研究内生细菌与玉米的联合固氮活性。结果表明,从玉米中分离出5株具有联合固氮活性的菌株,分别为1株弯曲假单胞菌NFR19(Pseudomonas geniculata),2株产酸克雷伯氏菌NFL28与NFSt18(Klebsiella oxytoca),1株节杆菌NFR7(Arthrobacter sp.),1株纤维化纤维菌NFR10(Cellulosimicrobium cellulans)。研究首次分离出具有固氮活性的纤维化纤维菌,并证实节杆菌具有固氮活性。从环境中筛选新的玉米内生固氮菌资源,促进玉米生长,为玉米内生联合固氮细菌的应用奠定基础。     

2株油菜菌核病拮抗内生细菌的筛选鉴定及其拮抗活性初步分析

油菜菌核病是一种严重危害油菜生长的病害。于2017年3月从湖南农业大学生物科学技术学院试验田采集油菜湘油15盛花期植株的根茎叶,采用纯培养法对内生细菌进行分离纯化,共分离得到68株内生细菌;采用基于16S rRNA基因序列的系统发育分析法对内生菌株的多样性进行分析研究;利用琼脂扩散法对内生菌株进行抗菌活性筛选,共筛选出7株抗菌活性较强菌株,分别为Y171004、Y172014、Y173005、Y174007、Y174017、Y177001和Y177002;利用平板对峙法对油菜菌核病病原菌核盘菌的拮抗菌进行筛选,筛选出2株(Y171004和Y177002)油菜核盘菌的拮抗细菌,经初步鉴定为芽孢杆菌(Bacillus),继而对其拮抗活性进行初步分析,其中菌株Y171004的抗菌物质经鉴定为热不稳定性蛋白。研究结果能为该地区油菜内生细菌资源的进一步研究及其在油菜菌核病生物防治等方面的应用提供试验依据和理论指导。     

油菜内生球毛壳菌抑菌作用初步测定

平板对峙试验显示,从油菜(Brassicanapus)叶、根和种子上分离到的14株内生球毛壳菌(Chaetomiumglobosum)对油菜菌核病原菌和立枯丝核菌均有不同程度的抑制作用,其中以种子上分离到的Dyst-1和MYNS-1的抑制作用最好。Dyst-1和MYNS-1的发酵液通过高压湿热灭菌和细菌过滤器过滤灭菌后,分别对所选用的几株植物病原真菌表现出抑制作用,特别是对油菜种传病害菌核病病菌。油菜内生球毛壳菌的详细抑菌机制需进一步研究。     

毛竹根部解磷细菌的筛选及多样性研究

本研究对毛竹(Phyllostachys pubescens)根部(包括根际、根面及内生细菌)解磷细菌进行了筛选,并通过16S rDNA序列分析对其多样性进行了初步研究。从179株毛竹根部细菌中筛选出26株解磷细菌,包括14株根际细菌、8株根面细菌、4株内生细菌。其中,芽孢杆菌BK24的解磷活性最高,其解磷活性达到369.06 mg/L。16S rDNA序列分析表明:26株解磷细菌中,13株属于厚壁菌门(Firmicutes,50.00%),5株属于变形菌门β亚群(Betaproteobacteria,19.23%),4株属于变形菌门γ亚群(Gammaproteobacteria,15.38%),4株属于放线菌门(Actinobacteria,15.38%)。芽孢杆菌属(Bacillus,38.46%)和伯克霍尔德氏菌属(Burkholderia,19.23%)为优势菌属。     

6种植物中内生镰刀菌的分离和鉴定

对6种植物的内生镰刀菌进行分离和培养,通过显微形态观察对获得的菌株进行分类鉴定,并测定菌落生长速度和ITS序列,初步分析植物中内生镰刀菌的种类和分布情况.结果表明,共分离出62株内生镰刀菌,分属于6种镰刀菌,62株内生镰刀菌中以尖孢镰刀菌和茄病镰刀菌最为常见.     

植原体对冬枣根部可培养内生细菌菌群的影响

枣疯病是枣树上由植原体引起的一种毁灭性病害,但有关枣疯病植原体与寄主根部内生细菌间的相关性鲜有研究。本试验采用常规分离培养方法从春季冬枣根部分离纯化内生细菌,通过PCR扩增出内生细菌16S rRNA基因的DNA片段,测序后利用NCBI中的BLAST软件进行序列同源性比对,对健康和感病冬枣树根部可培养内生细菌进行统计,根据二者对比结果初步判断植原体对冬枣根部可培养内生细菌菌群的影响。结果表明,健康冬枣树分离出18个菌株,鉴定出6个属(除2个仅鉴定到科水平外)的内生细菌,包括芽孢杆菌属(Bacillus)6株、假单胞菌属(Pseudomonas)5株、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)2株、金黄杆菌属(Chryseobacterium)1株、志贺氏菌属(Shigella)1株、埃希氏菌属(Escherichia)1株;感病冬枣树分离出17个菌株,鉴定出2个属的内生细菌,分别为芽孢杆菌属(Bacillus)10株和假单胞菌属(Pseudomonas)7株;感病冬枣树根部可培养内生细菌菌群属水平较健康冬枣树减少4个属,说明枣疯病导致冬枣根部内生细菌菌群在属水平上的降低。     

鱼腥草内生真菌的分离、鉴定及抑菌活性研究

[目的]分离和鉴定鱼腥草中的内生真菌,并检测其发酵液抑菌活性。[方法]用组织块法分离内生真菌,通过形态分类学方法进行鉴定,并用滤纸片法对4种指示菌进行体外抑菌试验。[结果]从鱼腥草各器官中共分离得到13株内生真菌。其中,根中1株,茎中10株,叶中2株;经形态鉴定,其分别属于子囊菌纲的毛壳菌属和半知菌亚门的曲霉属、镰孢属、茎点霉属及丝核菌属;12株内生真菌发酵液对至少1种指示菌有抑菌活性,而2株内生真菌的发酵液具有强抑菌活性。[结论]鱼腥草中存在具抑菌活性的内生真菌,可作为筛选抑菌活性物质的新资源。     

球毛壳菌荧光标记与重寄生现象研究

    球毛壳菌是一种非常重要的生防真菌.为了从分子生物学水平研究球毛壳菌与立枯丝核菌的拮抗机制,选用GFP(green fluorescent protein)作为报告基因对球毛壳菌进行标记.通过构建和转化EGFP(Enhanced GFP)表达载体,得到氯嘧磺隆抗性的转化子.经过几轮验证筛选,包括选择性平板筛选、PCR扩增目的片段验证、Southern杂交、荧光镜检等,确认SUR基因和EGFP基因已经插入球毛壳菌的基因组并在其中表达标记.取一个确认为荧光标记转化子的菌株,进行生防特性分析.主要通过与病原真菌平板共培养、载玻片对峙培养等方法初步研究了球毛壳菌与立枯丝核菌的拮抗机理.结果发现,在对立枯丝核菌的抑制过程中,球毛壳菌的拮抗机理主要是重寄生作用.     

内生真菌球毛壳ND35对植物抗病性及防御酶活性的影响

以植物内生真菌球毛壳菌ND35菌株和病原真菌立枯丝核菌Rs-1菌株及毛白杨树组培苗为试材,分析检测了接种球毛壳菌后立枯丝核菌侵染杨树组培苗的发病情况和4种不同处理的植物产生过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性变化。结果表明:与对照相比接种球毛壳菌后的植物在一定程度上能够阻止立枯丝核菌的扩展,发病率和病情指数均有所降低,明显提高植物POD、PPO和PAL的酶活性。说明接种球毛壳菌后诱导植物产生的3种防御酶对提高植物抗病性有一定的影响。     

病原菌细胞壁诱导下球毛壳菌葡聚糖酶活测定及抑菌试验

通过对峙培养试验,研究球毛壳菌对稻瘟病菌、尖孢镰刀菌、立枯丝核菌及核盘菌4种植物病原菌生长的抑制作用,结果表明,球毛壳菌对稻瘟病菌、尖孢镰刀菌、立枯丝核菌生长抑制作用更明显。在6种植物病原真菌细胞壁诱导下,球毛壳菌可产生β-1,3-葡聚糖酶,但是产酶规律不同。在稻瘟病菌、立枯丝核菌和尖孢镰刀菌细胞壁诱导下,β-1,3-葡聚糖酶活要明显高于杨树烂皮病菌、核盘菌和叶枯菌。其中,在稻瘟病菌细胞壁诱导11 d后,酶活达到最高,为0.61 U;而杨树烂皮病菌和叶枯菌细胞壁的诱导产酶效果最差。球毛壳菌可作为生物防治真菌。     

内生真菌球毛壳ND35对五种植物生长的影响

球毛壳（Chaetomium globosum）ND35是一株优势内生真菌，对多种作物有促生作用。本试验主要研究了球毛壳ND35不同菌剂和接种次数对杨树扦插苗、菜豆、黄瓜、烟草、生姜生长的影响。结果表明，两次接种对杨树苗高生长影响更明显，但对胸径和地径影响不大；菌剂3应用于菜豆、黄瓜时效果较好；育苗时接种对烟草叶片数影响较大，移栽时接种主要影响株高生长；能够增加生姜的产量。     

球毛壳ND35对植物生长的影响及其生防效果初探

［目的］研究球毛壳DN35对植物生长的影响及其生防效果，为该菌的推广应用提供依据。［方法］以植物内生真菌球毛壳（Chaetomiumglobosum）ND35为供试菌株，在温室和大田条件下测定其对植物生长的影响及其对5种植物病害的防治效果。［结果］ND35对杨树侧根和胸径生长有一定的促进作用。接种ND35能诱导杨树对腐烂病菌和叶锈病菌产生抗性；也能诱导番茄和菜豆对灰霉病菌产生系统抗病性；还可有效防治菜豆立枯病。［结论］内生真菌球毛壳ND35引起的诱导系统抗病性在植物病害的生物防治中有重要作用。     

球毛壳ND35对植物生长的影响及其生防效果

[目的]研究球毛壳ND35对植物生长的影响及其生防效果，为该菌的推广应用提供依据。[方法]以植物内生真菌球毛壳ND35为供试菌株，病原菌有杨树腐烂病菌、立枯丝核菌、番茄灰霉菌。（a）调查球毛壳ND35对植物生长的影响。在扦插杨树枝条时，设2个处理：①接种10g长有球毛壳ND35的麦粒培养基；②接种10g无球毛壳ND35的麦粒培养基为对照。出芽后，测量杨树高度、1．3m处的胸径，同时调查侧根（d≥8mm）数量。（b）大田试验测定球毛壳ND35对杨树腐烂病的拮抗作用。采用烫伤接种的方法，在主干距地面高50cm和100cm（约树干的1／3和2／3）处先用火烫伤树皮，再接种含病原菌菌丝体的PDA菌饼。在随后的1个多月统计发病情况，以29d后发病的为0级，26～28d发病的为1级，23～25d发病的为2级，20～22d发病的为3级，19d之内发病的为4级。分级计数，计算发病率、病情指数和拮抗效果。（c）大田试验调查球毛壳ND35对杨树叶锈病的拮抗作用。在杨树1．3、1．7、2．1m处分别调查2个处理组杨树叶片正面（冬孢子堆）及背面（夏孢子堆）的发病情况，在发病杨树上，根据同一高度叶正面和叶背面的病斑面积占叶片总面积的比例确定分级标准：没有发病为0级、0～20％为1级、20％～40％为2级、40％～60％为3级、〉60％为4级。计算发病率、病情指数和拮抗效果。（d）温室试验测定球毛壳ND35对灰霉病的诱导抗病作用。将菜豆、番茄分别分为2个处理：①接种拮抗菌ND35；②不接种ND35。分别测量病斑长短直径，计算病斑面积。（e）温室测定ND35对菜豆立枯病的防治效果。处理组：播种时接种内生菌球毛壳ND35，同时接种立枯丝核菌；对照组：播种时只接种立枯丝核菌。在接种10d后观察发病情况，根据病斑直径占茎基周长的比例确定分级标准：没有发病的植株为0级，〈25％为1级、25％～50％为2级、50％～75％为3级、〉75％为4级。计算病情指数和防治效果。[结果]球毛壳ND35在植物体内定殖后能促进杨树根系和胸径的生长，使植株粗壮，有利于提高植物的抗病性；接种球毛壳ND35能诱导杨树对腐烂病菌和叶锈病菌产生较好的拮抗效果；也能够诱导番茄和菜豆对灰霉病菌产生抗病性，诱导抗性效果分别达58．85％和35．65％；还可有效防治菜豆立枯病，防治效果达50．9％。[结论]内生真菌球毛壳ND35引起的诱导系统抗病性在植物病害的生物防治中有重要作用。     

球毛壳菌生物菌肥对草莓生长和品质的影响

【目的】研究球毛壳菌生物菌肥不同用量对草莓植株生长、果实产量和品质的影响,为球毛壳菌生物菌肥在生产上的应用提供参考。【方法】在温室大棚中开展试验,按不同球毛壳菌生物菌肥施肥量（0.5、1.0、2.0g/株）设3个处理,不施肥为对照处理,检测内生真菌球毛壳菌ND35在草莓上的定殖率;分析不同菌肥用量对草莓生物量和生理指标及果实产量和品质的影响。【结果】球毛壳菌ND35可以在草莓植株内定殖,其定殖率与菌肥用量正相关。不同处理的球毛壳菌生物菌肥对草莓植株生长、果实产量和品质具有显著影响,施用0.5g/株和1.0g/株的菌肥用量有利于草莓的生长和发育。【结论】0.5~1.0g/株用量的球毛壳菌生物菌肥可提高草莓产量和改善其品质,球毛壳菌生物菌肥可应用于草莓田间大规模生产中。     

内生菌混合菌剂田间防治杨树虫害的研究

于2005年用22.5 kg/hm^2内生菌混合菌剂、45.0 kg/hm^2内生菌混合菌剂、22.5 kg/hm^2球孢白僵菌菌剂、22.5 kg/hm^2毛壳菌菌剂、22.5 kg/hm^2角担子菌菌剂、22.5 kg/hm^2莱氏野村菌菌剂、7.5 kg/hm^2敌敌畏（对照）、清水（空白对照）在林场和苗圃进行了田间杀虫剂试验,各菌剂采用高孢粉剂用水稀释500倍后喷雾。研究结果表明,敌敌畏的杀虫效果为81.08%,内生菌混合菌剂45.0 kg/hm2组杀虫效果两地都为95%以上,角担子菌菌剂达到85.35%,只有毛壳菌菌剂杀虫效果为57.19%,低于化学农药杀虫效果,表明内生菌混合菌剂明显优于单一菌剂,也优于敌敌畏杀虫剂。结合试验期间气候及田间种群结构特征,得出45.0 kg/hm^2内生菌混合菌剂对杨树杨扇舟蛾和杨小舟蛾的二龄前期幼虫杀虫效果达到96.23%。     

球毛壳中抗真菌物质对树皮腐烂病菌的抑制作用

[目的]阐明球毛壳中抗真菌物质对树皮腐烂病菌的抑制作用机制。[方法]通过平板对峙培养、发酵液萃取、薄层层析分离和抑菌活性测定等方法,研究毛白杨内生真菌球毛壳ND35产生的抗真菌物质对树皮腐烂病菌的抑制作用。[结果]球毛壳ND35的抗真菌物质粗提物对杨树和苹果树腐烂病菌有较强的抑制作用,对2种病菌的菌丝生长抑制率分别是66.4%和72.6%。对分生孢子萌发的抑制率分别是92.2%和80.4%。薄层层析分离和活性测定结果证明,抗真菌物质2号组分在对树皮腐烂病菌的抑菌过程中起主要作用。[结论]球毛壳中抗真菌物质对于树皮腐烂病有生物防治潜力。