奶山羊乳腺中瘦素及其受体的表达与作用

 【目的】探讨瘦素在奶山羊乳腺发育、泌乳和退化各时期的表达与作用。【方法】采用激光共聚焦技术及Western Blot方法,检测瘦素及其受体（OB-Rb）的表达情况;采用乳腺组织体外培养联合免疫组化及毛细管电泳技术,测定瘦素对乳腺结构及泌乳功能的影响。【结果】乳腺整个发育过程中瘦素与瘦素受体的表达呈显著正相关,青春期最高,妊娠期下降,泌乳期维持在低水平,退化期显著升高,在退化21 d恢复到青春晚期水平。妊娠期瘦素处理组乳腺导管分支增多,泌乳期瘦素处理组乳腺组织培养基中β-酪蛋白（β-CN）含量增加;退化期瘦素处理组乳腺组织导管和腺泡结构发生部分解体,乳腺组织中可以检测到较多的凋亡细胞。【结论】瘦素能够促进妊娠期乳腺上皮细胞的增殖和分化,增加泌乳期乳腺β-酪蛋白基因表达,启动退化期乳腺细胞凋亡和乳腺组织重建。     

miR-200b对奶牛乳腺上皮细胞泌乳功能的影响

为探索miR-200b对奶牛乳腺上皮细胞泌乳能力的影响,以奶牛乳腺上皮细胞为体外研究模型,利用miR-200b mimics转染进行miR-200b过表达;应用生物信息学软件分析预测miR-200b靶基因,qRT-PCR检测miR-200b过表达后预测靶基因及乳成分合成相关信号通路关键基因mRNA表达的变化;通过CASY细胞活力分析仪及5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(Ed U)标记法分别检测miR-200b过表达对细胞活力及增殖的影响;应用CSN2(β-酪蛋白)试剂盒、TG试剂盒及乳糖试剂盒检测细胞胞外分泌β-酪蛋白、甘油三酯及乳糖含量的变化。生物信息学分析显示,miR-200b与乳腺泌乳功能基因Pten、Dnmt3a、Dnmt3b的3'UTR区序列具有互补结合的位点;qRT-PCR分析结果显示,与对照组相比,过表达miR-200b后的奶牛乳腺上皮细胞中Pten mRNA的表达量显著降低,而乳成分合成相关信号通路关键基因Akt、Srebp1、Csn2、Glut1 mRNA的表达量显著上调;miR-200b过表达能够提高奶牛乳腺上皮细胞活力,促进奶牛乳腺上皮细胞增殖及β-酪蛋白、甘油三酯和乳糖的合成分泌。综上,miR-200b能够负调控靶基因Pten的表达进而在奶牛乳腺泌乳过程中发挥重要的正调控作用。     

应用免疫荧光技术研究中国荷斯坦奶牛泌乳期GLUT1和GLUT4的变化

中国荷斯坦牛是我国产乳量最高、数量最多、分布最广的奶牛品种,开展其乳腺生物学方面的研究具有重要意义。目前,国内外研究多集中于中国荷斯坦牛泌乳性状相关基因的筛选和分析,而对于其乳腺发育和泌乳机能分化的组织学研究甚少。该研究采用免疫荧光法检测乳腺中乳腺能量和物质代谢关键因子——葡萄糖转运蛋白的变化。研究结果表明乳腺发育过程中,GLUTs蛋白水平和转录水平表达趋势相似。     

小鼠乳腺发育、泌乳和退化的组织形态学(Ⅱ)——超微组织形态学变化和β-酪蛋白分泌

研究小鼠乳腺发育、泌乳和退化的超微组织形态学以及蛋白质分泌功能变化,为产奶动物泌乳生物学与乳腺功能调控奠定实验基础;将小鼠青春期、妊娠期、泌乳期和退化期乳腺,一部分制成超薄切片复染法染色后在透射电镜下进行超微结构观察,另一部分制成冰冻切片应用免疫组织化学染色方法进行β-酪蛋白分泌跟踪。结果为透射电镜观察见青春期(性成熟前期和退化期)或静止阶段乳腺上皮细胞胞质内含细胞器相对较少,泌乳期上皮细胞变成高柱状或立方形,胞质内内质网丰富,近腺腔处见大量分泌颗粒,泌乳期乳腺肌上皮细胞内可见少量分泌小泡;β-酪蛋白跟踪染色发现,β-酪蛋白在妊娠初期就有表迭,到泌乳期达到相对稳定水平;小鼠青春期、妊娠期、泌乳期和退化期乳腺结构呈现有规律的周期性变化。     

通草提取物对奶牛乳腺上皮细胞乳糖合成及相关基因表达的影响

为探讨通草对奶牛乳腺上皮细胞乳糖合成及相关基因表达的影响,采用不同剂量通草提取物处理奶牛乳腺上皮细胞,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测乳腺上皮细胞增殖能力,乳糖/半乳糖检测试剂盒(Lactose/D-Galactose (Rapid) Assay Kit)检测乳腺上皮细胞培养液中乳糖含量,实时荧光定量PCR技术检测乳腺上皮细胞乳糖合成相关基因葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、葡萄糖转运蛋白8(GLUT8)、葡萄糖转运蛋白12(GLUT12)、己糖激酶Ⅰ(HKⅠ)、己糖激酶Ⅱ(HKⅡ)、β-1,4-半乳糖基转移酶-1(β-4GALT1)和α-乳清白蛋白(α-LA)基因mRNA表达水平。结果表明,200、400、600μg(生药)·mL-1通草提取物提高奶牛乳腺上皮细胞增殖能力(P<0.05),促进奶牛乳腺上皮细胞合成分泌乳糖(P<0.05),并显著上调细胞GLUT1、GLUT8、HKⅡ、β-4GALT1及α-LA mRNA表达水平(P<0.05),但对GLUT4、GLUT12和HKⅠmRNA表达水平无显著影响(P>0.05)。研究表明,适当浓度通草提取物可提高奶牛乳腺上皮细胞增殖能力,并通过上调乳腺上皮细胞GLUT1、GLUT8、HKⅡ、β-4GALT1和α-LA的mRNA表达,促进乳腺上皮细胞合成乳糖。     

FLCN对奶牛乳腺上皮细胞增殖及泌乳功能的影响

FLCN基因参与多种代谢途径和细胞过程,国内外关于FLCN在奶牛乳腺发育过程中表达及调节的研究鲜有报道。应用RNA干扰技术和质粒转染技术改变FLCN基因在奶牛乳腺上皮细胞中表达量,流式细胞仪检测细胞增殖,采用qRT-PCR和Western blot检测FLCN对泌乳相关功能基因AMPK、mTOR、CyclinD1、Caspase3和β-酪蛋白表达的影响。结果表明,FLCN正向调节mTOR磷酸化水平,促进乳蛋白合成和细胞增殖,抑制细胞凋亡,负调控能量代谢调节子AMPK。FLCN在奶牛乳腺上皮细胞中可通过mTOR信号通路调控细胞增殖及乳蛋白合成,研究对揭示FLCN调控奶牛乳腺上皮细胞增殖和泌乳具有重要作用。     

过瘤胃胆碱对围产期奶牛生产性能和能量代谢的影响

为阐明日粮中添加过瘤胃胆碱对围产期奶牛生产性能和能量代谢的影响,选取年龄、胎次和泌乳量相近的健康荷斯坦奶牛40头,随机分为4组,每组10头。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组每天分别在基础日粮中添加5、10和20g过瘤胃胆碱,Ⅳ组饲喂基础日粮。试验期内(产前14d～产后42d)分别调查和检测奶牛的生产性能(泌乳量和干物质摄入量)、血液生化指标(葡萄糖、β-羟丁酸、游离脂肪酸、甘油三酯和胆固醇)和内分泌指标(胰岛素和胰高血糖素)。结果显示:1)围产期奶牛日粮中添加过瘤胃胆碱能明显提高奶牛泌乳量(MY)和干物质摄入量(DMI),以每头奶牛每天添加10g过瘤胃胆碱效果最好。2)围产期奶牛日粮添加过瘤胃胆碱,能延缓血浆葡萄糖(Glu)水平的下降(P<0.05),显著降低试验奶牛血浆β-羟丁酸(BHBA)、游离脂肪酸(NEFA)总胆固醇(TCHO)含量(P<0.05),与对照组相比,血浆甘油三酯(TG)有升高的趋势(P>0.05)。3)添加过瘤胃胆碱,有提高试验奶牛血浆胰岛素(Ins)含量、降低胰高血糖素(Gn)含量的趋势,但差异不显著(P>0.05)。上述结果表明围产期奶牛日粮添加过瘤胃胆碱能够提高奶牛的生产性能,改善奶牛体内脂肪代谢,促进体内糖异生作用,缓解围产期和泌乳早期奶牛的能量负平衡。     

(-)-羟基柠檬酸调控鸡胚原代肝细胞脂滴沉积的机制

[目的]本文旨在研究(-)-羟基柠檬酸[(-)-HCA]对鸡胚原代肝细胞脂滴沉积的影响及其机制。[方法]选用含(-)-HCA的培养液孵育鸡胚原代肝细胞后,油红染色法检测鸡胚原代肝细胞中脂滴的数量和总面积;试剂盒法检测鸡胚原代肝细胞中甘油三酯、葡萄糖含量及糖代谢、呼吸链关键酶活性。[结果](-)-HCA处理显著降低鸡胚原代肝细胞中甘油三酯含量、脂滴数量和总面积,但对细胞活力和死亡率无显著影响。(-)-HCA处理提高了鸡胚原代肝细胞中葡萄糖消耗量,显著降低了柠檬酸裂解酶活性和细胞质中乙酰辅酶A含量。(-)-HCA处理显著提高了鸡胚原代肝细胞中葡萄糖激酶、磷酸果糖激酶1、丙酮酸激酶、丙酮酸脱氢酶(E1)、乌头酸酶、琥珀酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、柠檬酸合酶、NADH脱氢酶和ATP合酶活性。[结论](-)-HCA通过抑制柠檬酸裂解酶的活性减少细胞质中乙酰辅酶A的供给,并通过增强糖代谢和呼吸链中关键酶活性而加速能量代谢,最终抑制了鸡胚原代肝细胞中脂滴的沉积。     

不同类型音乐对荷斯坦奶牛能量代谢及泌乳性能的影响

为研究哈萨克族音乐、贝多芬《田园交响曲》、维吾尔族音乐对奶牛能量代谢及血液激素水平的影响。2016年6月1日至2016年8月20日在新疆伊犁新生源公司巴彦岱牛场选取年龄、胎次、产奶量接近,饲养管理水平完全相同的荷斯坦泌乳牛80头,随机分成4组,每组20头,试验组每日各播放哈萨克族音乐(《玛依拉》等10首)、贝多芬《田园交响曲》、维吾尔族音乐(《花园》等10首),对照组常规饲喂。结果表明,哈萨克族音乐可提高柠檬酸(CA)含量,降低琥珀酸脱氢酶(SDH)含量,促进乳脂肪的产生;贝多芬《田园交响曲》可提高乳酸脱氢酶(LDH)、CA含量,降低SDH含量,促进乳糖及乳脂肪的生成;维吾尔族音乐可提高LDH、CA含量,降低β-羟丁酸(BHBA)含量,促进乳糖及乳脂肪的生成;3种类型音乐之间,贝多芬《田园交响曲》较哈萨克族音乐可提高LDH、血糖(GLU)含量,降低BHBA、CA含量;维吾尔族音乐较贝多芬《田园交响曲》可提高SDH、甘油三酯(TG)、CA含量,降低LDH、胆固醇(TC)含量;维吾尔族音乐较哈萨克族音乐可提高BHBA、SDH、TG含量。     

烟酰胺对高产奶牛泌乳中期生产性能及血液指标的影响

本试验旨在研究烟酰胺对高产奶牛泌乳中期产奶性能、血液生化指标和经济效益的影响。选取40头泌乳中期的中国荷斯坦奶牛,随机分为4组,每组每头在基础日粮中分别添加0、6、10、14 g/d烟酰胺,检测采食量、产奶量、乳成分、血液生化指标。结果表明:各组奶牛干物质和粗蛋白质采食量差异不显著(P>0.05);烟酰胺的添加对乳脂率、乳蛋白率、乳糖率、乳脂产量、乳蛋白产量无显著影响(P>0.05);添加NAM后,显著降低了血清NEFA含量(P<0.05);而对血清葡萄糖、丙氨酸转氨酶、天门冬氨酸转氨酶、甘油三酯、碱性磷酸酶、尿素氮和胆固醇的影响差异不显著(P>0.05);添加10、14 g/d烟酰胺可比对照组显著增加产奶量0.86和1.34 kg/d(P<0.05)。在泌乳中期奶牛日粮中添加10~14 g烟酰胺,有助于奶牛生产潜力的发挥,经济效益显著。     

Galactopoietic Activity of Dibutyl Phthalate Isolated from Vaccaria segetalis

A galactopoietic compound, identified as dibutyl phthalate（DBP）, was isolated from Vaccaria segetalis. The activity of DBP on lactation ability of dairy cow mammary gland epithelial cells（DCMECs） cultured in vitro and dairy cow was evaluated. Results showed that DBP could promote cell viability, proliferation ability, lactose and β-casein secretion of DCMECs, which could also raise the milk yields of dairy cows significantly.     

Role of miRNA in Mammary Gland Development and Lactation

miRNA can regulate development and milk yield of the mammary gland through epigenetic mechanism.miRNA can directly and indirectly modulate the activity of the epigenetic machinery,target genes through post-inhibition of translation initiation,mediate miRNA decay,target genes and inhibit the positive regulation,regulate tone modification,and regulate DNA methylation of target genes.Here we reviewed the role of miRNAs in mammary gland development and lactation.Researching miRNA in mammary gland development and lactation process,and understanding the response of the epigenetic mechanisms to external stimuli will be an important necessity to devise new technologies for maximizing their activity and milk production in the dairy cow.     

奶牛乳腺上皮细胞体外培养技术研究进展

奶牛乳腺上皮细胞具有合成和分泌乳汁的特殊功能,是制作乳腺生物反应器的靶细胞。以奶牛乳腺上皮细胞为试验模型,能够真实反应乳腺生长、发育及泌乳的细胞或分子生物学机制,验证乳腺组织特异性表达载体构建的合理性和有效性,对研究奶牛乳腺生物反应器、乳蛋白基因表达具有重要的意义。文章主要从培养方法、培养体系的建立、形态结构与细胞增殖分化方面阐述乳腺上皮细胞体外培养技术研究进展。     

乳腺特异表达载体缺失片段的鉴定与修复

通过对pBC1中的乳腺特异表达启动子成分进行分析,鉴定了位于β酪蛋白启动子上游两个EcoRⅠ位点(-89~-94和-120~-125)之间的缺失片段,31bp的缺失使得该载体中的一个乳控盒元件(-112~-141)和一个乳腺因子识别序列(-92~-102)遭到破坏,并使得位于TATA框上游的所有启动子成分发生了位置改变。通过与山羊β酪蛋白启动子序列进行比较,设计并合成了缺失片段,经一系列的酶切和连接处理,使得该缺失得到了修复,修复后的载体具有所有乳蛋白表达需要的启动子调控原件。本试验结果为利用修复后的乳腺特异高效表达载体进行乳腺生物反应器的研究奠定了分子生物学基础。     

奶牛乳腺长链脂肪酸转运的研究进展

奶牛乳脂中的长链脂肪酸（LCFA）JL乎全部来源于从消化道吸收并转运人血液的食物外源性LCFA,然后跨膜进入乳腺上皮细胞参与乳脂合成,而参与LCFA跨膜运输的脂肪酸转运蛋白有：脂肪酸转运蛋白家族（Fattyacid transport proteins,FAPTs）、脂肪酸转位酶（Fatty acid translocase,FAT／CD36）、脂肪酸结合蛋白家族（Fattyacid binding proteins,FABPs）和小窝蛋白（Caveolinproteins）。文章在综述LCFA跨膜运输研究的基础上,重点介绍4种LCFA转运蛋白的研究进展,发现在奶牛乳腺中表达的只有FAT／CD36和FABPs,而FATPs和小窝蛋白在奶牛乳腺中是否表达并参与LCFA的转运仍有待进一步研究确定。因此,应利用营养学、分子生物学和细胞生物学等方法,在体内和体外对FAT／CD36、FABPs、FATPs和小窝蛋白在泌乳期奶牛乳腺中的表达规律、作用机理进行深入研究,以探明其在乳腺LCFA转运中的作用及调控机制．并为优化乳脂组成实施的营养调控提供科学依据。     

低酸度酒精阳性乳患牛颈、乳静脉中矿物质含量变化的研究

通过对酒精阳性乳患牛及正常牛颈、乳静脉中8种离子含量的测定与对比分析,发现酒精阳性乳患牛的乳腺分泌上皮细胞选择性吸收钠、钾、钙、镁的功能异常,进而引起乳中的相应含量发生变化;以及患牛乳腺组织利用锌、铜、锰、铁的量发生了变化。这对深入探讨酒精阳性乳症的发生机理以及对患牛乳腺代谢的影响都提供了有力的证据。     

奶山羊乳腺发育过程中生长激素、胰岛素及其受体的变化规律研究#br#

 【目的】探讨奶山羊乳腺发育过程中生长激素、胰岛素及其受体表达规律。【方法】关中奶山羊乳腺发育的4个时期即青春期、妊娠期、泌乳期及退化期用放射性免疫学方法（RIA）测定激素的含量,用免疫荧光法（IF）检测激素受体含量。【结果】在乳腺发育过程中血清中生长激素（GH）变化不显著（P＞0.05）,而组织中的GH在妊娠5月（P5M）时出现分泌高峰2.599±0.459 ng&#8226;mL-1（P＜0.01）。血清中胰岛素（INS）在青春期含量变化差异不显著（P＞0.05）,到妊娠1月（P1M）时INS含量高达31.664±6.416 µIU&#8226;mL-1（P＜0.01）,泌乳高峰过后回到正常水平。组织中的INS在进入妊娠期后含量开始增加并持续到泌乳10日（L10D）,之后下降。生长激素受体（GHR）在妊娠期比青春期和泌乳早中期高,在泌乳晚期达到高峰,之后下降。胰岛素受体（INSR）从青春期开始缓慢上升,在泌乳启动后达到高峰。【结论】在乳腺发育过程中血清和乳腺中的GH变化不明显。血清中的INS水平在妊娠初期最高,至分娩时最低,而乳腺中INS在泌乳期处于高水平。GHR在妊娠期和泌乳后期、退化前期表达量较高。INSR在妊娠期和泌乳期维持在一个较高水平,至泌乳中后期下降。     

高产奶牛适宜干奶期长度研究进展

为分析缩短或取消干奶期在高产奶牛生产中的可行性和经济性,本文主要分析了2003—2020年有关干奶期长度对奶牛的泌乳、健康、繁殖力和经济效益影响的研究文献。结果表明:1)缩短干奶期至30d或取消干奶期可导致下一周期泌乳量下降,但分娩前额外的产奶量可部分弥补产奶损失。2)缩短或取消干奶期可显著改善奶牛泌乳初期的能量负平衡问题,且缓解由能量负平衡导致的代谢紊乱,提高奶牛繁殖力。奶牛健康水平和繁殖力提高带来的收益,可部分弥补产奶量降低带来的经济损失。3)缩短或取消干奶期对犊牛健康水平无显著影响。目前该干奶策略在实际生产中推广和应用仍需要更多的研究数据支撑,未来研究可聚焦于30或0d干奶期相匹配的饲养管理策略研发,适宜干奶期长度预测模型的建立和干奶期乳腺退化和乳腺组织更新的分子机制探究,为将来奶牛适宜干奶期长度的研究提供参考,也为实际生产中奶牛干奶期长度选择提供依据。