钝顶螺旋藻藻蓝蛋白的提取及分子量研究

以藻蓝蛋白(CPC)的提取率为指标,用冻融法对藻蓝蛋白进行提取,最后用SDS-PAGE和排阻色谱法对藻蓝蛋白的分子量分别进行了测定,结果表明,冻融法提取藻蓝蛋白的最优工艺参数为:料液比为1∶22,提取温度35℃,提取时间2.5h,藻蓝蛋白的提取率为3.19%。SDS-PAGE法测得藻蓝蛋白的分子量为40000 Da,排阻色谱法测得藻蓝蛋白的分子量为43200 Da,这2种方法所得的CPC蛋白分子量基本一致。     

普通念珠藻(Nostoc commune Vauch.)藻蓝蛋白的提取

[目的]为普通念珠藻藻蓝蛋白的提取及开发提供试验及理论基础。[方法]以普通念珠藻为材料,比较藻体及细胞的破碎方法、提取液类型及饱和硫酸铵浓度对藻蓝蛋白提取的影响。[结果]结果表明:利用发酵法破碎藻体和细胞,0.05 mol/L的KP缓冲液(pH值7.2)作为提取液,经过30%~50%饱和硫酸铵盐析和DEAE-Toyopeal 650 S离子交换柱层析后,藻蓝蛋白纯度达2.51,最大紫外-可见吸收峰位于616 nm。[结论]普通念珠藻藻蓝蛋白分离提取较为理想的程序为:藻粉→0.05 mol/L KP缓冲液(pH值7.2)浸泡→发酵法破碎细胞→35%~50%饱和硫酸铵盐析→DEAE-Toyopeal 650 S柱层析→较纯的藻蓝蛋白。     

坛紫菜藻红蛋白分离纯化研究

[目的]建立一种新型、高效、快速的藻红蛋白分离纯化方法,并对其分离机理进行探讨。[方法]以坛紫菜的藻红蛋白搅切法提取物为原料,首先通过100和500 kDa的超滤离心管对其进行超滤分离,再在Superose 12色谱柱上以不同种类和不同浓度的流动相对藻红蛋白粗提物进行等度洗脱,分析其分离机理,并优化分离条件。[结果]在0.05 mol/L NaCl等度洗脱的条件下,藻红蛋白在Superose12色谱柱上表现为典型的氢键吸附模式;在优化的条件下,通过超滤-Superose 12氢键吸附分离的方法,可以使坛紫菜藻红蛋白提取物纯度(A565/A280)达到7.98,总回收率52.9%。[结论]该研究结果表明藻红蛋白在Superose 12色谱柱上存在氢键吸附作用,同时,该研究所建立的超滤-Superose 12氢键吸附分离方法是一种新型、高效、快速的藻红蛋白分离纯化方法。     

螺旋藻藻蓝蛋白在水和磷酸缓冲液中稳定性的对比研究

[目的]为了寻找一种代替磷酸缓冲液的提取溶液,满足尽量保持其活性的要求。[方法]分别用蒸馏水和磷酸缓冲液,采用研磨法提取藻蓝蛋白并保存。[结果]两者提取效果差别不大。但是,水保存的藻蓝蛋白溶液比磷酸缓冲液保存的藻蓝蛋白溶液易分解。[结论]综合试验条件及藻蓝蛋白稳定性影响因素考虑,可确定pH变化为藻蓝蛋白分解的主要原因;蒸馏水可代替磷酸缓冲液用于提取藻蓝蛋白,活性维持时间不超过15d。     

粉末活性炭联合柱层析法纯化藻蓝蛋白的研究

以巢湖新鲜蓝藻藻泥为原料，通过冻融破壁的方法获得藻蓝蛋白粗提液，采用粉末活性炭法-羟基磷灰石柱层析法纯化藻蓝蛋白。在粉状活性炭法的研究中，通过单因素试验研究了粒径、添加量、藻蓝蛋白浓度和时间对藻蓝蛋白的提纯效果，并与羟基磷灰石柱层析法联用以优化高纯度藻蓝蛋白的提取纯化工艺组合。结果表明，粉末活性炭法纯化藻蓝蛋白的最优条件是粒径400~500目，藻蓝蛋白浓度1.0 mg·mL^-1，添加量100 g·L^-1和吸附时间15 min，经羟基磷灰石柱层析法纯化后，藻蓝蛋白纯度可达4.51，回收率为36%。     

蓝细菌螺旋拟柱孢藻的抑菌活性研究

[目的]探讨螺旋拟柱孢藻藻株是否具有潜在的抑菌活性。[方法]从汕头澄海人工对虾养殖池分离纯化藻株，通气扩大培养、离心收集、冷冻干燥后，采用乙醇提取并用柱层析分离，先后得到藻体的乙醇提取物和叶绿素提取物。以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为受试菌种，采用圆形纸片法进行抑菌活性研究。[结果]藻体乙醇提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有抑菌作用，其抑菌直径分别为11.8、10.3 mm;藻叶绿素粗提物仅对金黄色葡萄球菌有抑菌作用，抑菌直径为24.2 mm。[结论]螺旋拟柱孢藻乙醇提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有中等强度的抑菌活性，而藻体叶绿素提取物仅对金黄色葡萄球菌抑菌，但呈高灵敏抑菌效应，该藻株有望成为生物抑菌来源物质的新型材料而得到进一步开发利用。     

不同试验条件对藻蓝蛋白提取效率的影响

以实验室培养的水华蓝藻单种[铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa,M.A)、水华微囊藻(Microcystis flos-aquae,M.F)、惠氏微囊藻(Microcystis wesenbergii,M.W)、鱼腥藻(Anabaena sp,A.s)]以及野外新鲜水华蓝藻为研究对象,通过设置不同细胞破碎方法和提取剂种类,筛选并优化藻蓝蛋白荧光分析法的前处理技术。结果表明,冻融试验中,冷冻温度与提取剂添加顺序对蓝藻细胞破碎率无显著影响;以去离子水为提取剂时,冻融2次即可达到最佳破壁条件;在冻干试验中,蓝藻真空抽滤在滤膜上能提高蓝藻细胞的破碎率;综合比较冻融和冻干,后者对蓝藻细胞的破碎效率高于前者;对比3种提取剂对藻蓝蛋白的提取效率,去离子水对藻蓝蛋白的提取效率最高。     

不同冻融条件对破壁提取巢湖水华新鲜蓝藻中藻蓝蛋白的影响

[目的]研究不同冻融条件对破壁提取巢湖水华新鲜蓝藻中藻蓝蛋白的影响,为后续提取纯化试剂级藻蓝蛋白提供支持。[方法]在各种条件下,冻融破壁后,利用粗提液中藻蓝蛋白即PC纯度和得率为评价指标,研究不同冻融次数、不同含水率和不同冻融介质对藻蓝蛋白提取效果的影响。[结果]粗提液中PC纯度随着冻融次数的增加而依次减小,PC得率随着冻融次数的增加呈现下降的趋势;PC纯度和得率随着含水量的增大呈现先持平后降低的趋势;在不同冻融介质的试验中,通过比较得出最优的冻融介质为浓度0．0025mol／L的PBS缓冲溶液。[结论]对于冻融储存时间较长的巢湖新鲜蓝藻,最优的试验条件是选用浓度为0．0025mol／L的PBS缓冲液作为冻融介质,在含水率为96．O％～97．5％区间冻融次数仅需1次,即可得到最优的PC的纯度和得率。     

鱼腥藻对重金属污水中Zn2+的吸附研究

[目的]研究鱼腥藻对电镀废水中Zn~(2+)的吸附效率。[方法]以鱼腥藻为材料,利用原子吸收分光光度法,测定鱼腥藻在5 min内对电镀废水中Zn~(2+)的吸附去除效果。[结果]鱼腥藻浓度为629.2 mg/L时,电镀废水中Zn~(2+)浓度由3.296 5降至0.748 5 mg/L,单位吸附量达4.859 5 mg/g,对Zn~(2+)的吸附效率最高,达77.3%。[结论]该研究为重金属污水的治理提供了理论依据。     

球等鞭金藻中岩藻黄素的提取及其纯化工艺研究

以球等鞭金藻藻粉为原料,研究了球等鞭金藻中的岩藻黄素有机溶剂提取条件工艺优化、硅胶层析柱分离纯化和超高效液相色谱-串联质谱联用仪定性分析。主要通过单因素试验法和正交优化法确定了提取条件的工艺优化参数,硅胶层析柱分离纯化岩藻黄素,并通过超高效液相色谱(UPLC)定量检测和LCQ Fleet离子阱液质联用仪定性分析岩藻黄素。试验结果表明,最佳提取工艺为提取温度35℃、料液比1∶30 (g/mL)、提取时间15min、提取次数2次,岩藻黄素的提取率达到12.03mg·g~(-1)。硅胶层析柱分离纯化后最佳回收率为86.35%,纯度为29.78%,LCQ Fleet离子阱液质联用仪定性分析质量分数为659.090 2。本研究结果为工业化快速提取球等鞭金藻中的岩藻黄素活性物质提供了理论基础。     

番茄幼苗根系总蛋白SDS-PAGE方法的优化

[目的]建立一套适合番茄幼苗根系蛋白质组分析的SDS-PAGE方法和获得清晰的电泳图谱。[方法]以番茄幼苗根系为试材,对根系蛋白的提取方法和上样量等因素进行了优化。[结果]上样量为60μg时,改良后的TCA-丙酮沉淀法提取的蛋白能够获得分辨率较高、图像清晰、重复性好的SDS-PAGE图谱。[结论]该法可以基本满足番茄幼苗根系蛋白质组学的研究。     

番茄幼苗根系总蛋白SDS-PAGE方法的优化

[目的]建立一套适合番茄幼苗根系蛋白质组分析的SDS-PAGE方法,获得清晰的电泳图谱。[方法]以番茄幼苗根系为试材,对根系蛋白的提取方法和上样量等因素进行了优化。[结果]上样量为60μg时,改良后的TCA-丙酮沉淀法提取的蛋白能够获得分辨率较高、图像清晰、重复性好的SDS-PAGE图谱。[结论]该法可以基本满足番茄幼苗根系蛋白质组学的研究。     

枣树叶片蛋白质提取及SDS-PAGE单向电泳条件优化

[目的]对枣树叶片蛋白质提取方法及其SDS-PAGE单向电泳条件进行优化。[方法]对枣树5种蛋白质提取方法和影响SDS-PAGE单向电泳的因素进行比较研究。[结果]改良丙酮沉降法提取出的蛋白质杂质较少,条带数量多且清晰,同时通过研究确定了一套适用于枣树蛋白检测的SDS-PAGE凝胶制备及电泳方法。[结论]该研究为进一步从分子生物学的角度研究枣树与枣疯病植原体的互作机制提供了技术的基础。     

木霉几丁质酶和几丁寡糖的制备及提纯

[目的]为木霉几丁质酶和几丁寡糖的开发应用提供必要的技术支持。[方法]由高产几丁质酶的木霉菌株YHS-1液体振荡培养得到木霉几丁质酶粗酶液,分别测定了木霉菌株YHS-1在不同时间、不同温度下的几丁质酶活值,优化木霉产酶条件。并研究了几丁寡糖的制备及提纯方法。[结果]供试木霉最佳产酶温度为35℃,最佳产酶时间为4 d,此时酶活值为55 U。几丁质酶粗酶液通过(NH4)2SO4分级沉淀、阴离子交换柱层析、SDS-PAGE提纯后可以达到层析纯,出现单一并且峰值很高的层析峰,电泳确认2条带,分别为几丁质外切酶和几丁质内切酶。几丁寡糖用初提纯的几丁质酶与过量的胶态几丁质反应得到粗溶液,再经过蛋白质沉淀和冷冻离心后得到纯化。[结论]建立了木霉几丁质酶和几丁寡糖的制备及提纯方法,为木霉几丁质酶和几丁寡糖的开发应用提供了必要的技术支持。     

微波预处理提取辣椒碱工艺及抑菌效果的研究

[目的]对微波预处理法提取辣椒碱工艺及辣椒碱的抑菌效果进行较为系统的研究。[方法]在常规溶剂浸提法的基础上,在浸提之前加入微波预处理过程;参照GB 10783—2008方法,采用FAO紫外双比色法测定辣椒碱含量;采用抑菌圈法测定提取所得辣椒碱的抑菌效果。[结果]提取辣椒碱的适宜工艺为：浸润剂为95%乙醇溶液,料液比为1∶10,微波功率200 W,微波预处理时间2 min,浸取温度40～50℃,浸取时间2 h,浸提次数3次。体外抑菌试验结果表明,辣椒碱提取液对细菌、霉菌和酵母菌均表现出一定的抑菌作用,其抑菌效果随浓度的增大而增强;其中对裂殖酵母的抑菌效果最明显,对细菌抑菌效果最弱。[结论]微波预处理法显著提高了辣椒碱提取速度以及提取效率;辣椒碱提取物具有广谱抑菌活性。     

柠檬皮中柠檬苦素的提取及其抑菌稳定性研究

[目的]优化得到一种高效快速在柠檬果皮中提取柠檬苦素的方法,同时以其提取液对7种菌进行抑菌试验筛选。[方法]以乙醇为提取溶剂,提取率为评价标准,优化了柠檬皮中柠檬苦素的提取条件,并采用牛津杯法对柠檬苦素抑菌性进行了研究,同时探讨柠檬苦素提取液在不同紫外线、p H及温度条件下的抑菌稳定性。[结果]柠檬皮中柠檬苦素的最佳提取条件为90%乙醇溶液在料液比为1∶40(W/V),提取温度为60℃,提取120 min,提取量47.555 mg/g。柠檬皮中柠檬苦素提取液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、枯草芽孢杆菌、根霉、青霉和黑曲霉均有一定的抑制效果。[结论]该研究可为柠檬的开发利用和柠檬苦素的高效提取提供理论依据和试验参考。     

超声波辅助提取大黄抑菌物质的工艺研究

[目的]为进一步开发利用大黄资源提供理论依据。[方法]以抑菌圈直径作为评价指标,通过对乙醇浓度、回流温度、超声波时间、液料比4个单因素分析和正交试验优化出最佳工艺条件。[结果]最佳工艺条件为:乙醇浓度70%、回流温度60℃、超声波处理时间35 min、液料比20∶1。在此条件下所得提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的抑菌圈直径分别为20.0、18.9和18.1 mm。[结论]超声波辅助法提取明显优于常规回流法。     

海带多酚的提取和抑菌研究

[目的]对海带多酚的提取进行优化,并研究其分离纯化和抑菌作用。[方法]以新鲜海带为试验材料,采用以乙醇为溶剂反复冻融法提取海带多酚,液相色谱分离纯化海带多酚,并利用96孔板进行抑菌试验。[结果]海带多酚提取的最佳条件为:80%的乙醇浸提,60℃浸提3～5 h,提取效果最好。海带多酚的最大吸收在波长574 nm。高效液相色谱分析得到9种组分,经过抑菌试验获得5种抑菌组分。多酚对副溶血弧菌、大肠杆菌、藤黄叠球菌和金黄色葡萄球菌有一定的抑菌作用,对枯草芽孢杆菌无抑菌效应。[结论]试验为深入研究海带多酚提供了参考依据,同时也为海带的高值化利用及新的抗肿瘤药物开发提供一种新的思路。     

贻贝抗菌肽的分离纯化

[目的]从贻贝中提取具有抗菌作用的多肽。[方法]以紫贻贝为原料,采用0.5%的乙酸直接提取方式提取抗菌肽,再经过Sephacryl S-100聚丙烯酰胺凝胶色谱进行纯化,收集各馏分并用滤纸片扩散法测定其抗菌活性及对各种细菌的最低抑菌浓度,使用SDS-PAGE测定抗菌肽的分子质量,测定其在100℃条件下不同处理时间和不同pH条件下抗菌活性的变化。[结果]使用0.5%的乙酸作为提取液粗提取抗菌肽具有较高的提取效率,使用Sephacryl S-100纯化抗菌肽,可将抗菌肽纯化为单一物质。分离纯化出的贻贝抗菌肽具有较强的抗菌性,分子质量为5 908,且具有耐高温、耐酸碱的性质。[结论]该研究为抗菌肽的大规模生产奠定了基础。