不同冻融条件对破壁提取巢湖水华新鲜蓝藻中藻蓝蛋白的影响

[目的]研究不同冻融条件对破壁提取巢湖水华新鲜蓝藻中藻蓝蛋白的影响,为后续提取纯化试剂级藻蓝蛋白提供支持。[方法]在各种条件下,冻融破壁后,利用粗提液中藻蓝蛋白即PC纯度和得率为评价指标,研究不同冻融次数、不同含水率和不同冻融介质对藻蓝蛋白提取效果的影响。[结果]粗提液中PC纯度随着冻融次数的增加而依次减小,PC得率随着冻融次数的增加呈现下降的趋势;PC纯度和得率随着含水量的增大呈现先持平后降低的趋势;在不同冻融介质的试验中,通过比较得出最优的冻融介质为浓度0．0025mol／L的PBS缓冲溶液。[结论]对于冻融储存时间较长的巢湖新鲜蓝藻,最优的试验条件是选用浓度为0．0025mol／L的PBS缓冲液作为冻融介质,在含水率为96．O％～97．5％区间冻融次数仅需1次,即可得到最优的PC的纯度和得率。     

粉末活性炭联合柱层析法纯化藻蓝蛋白的研究

以巢湖新鲜蓝藻藻泥为原料,通过冻融破壁的方法获得藻蓝蛋白粗提液,采用粉末活性炭法-羟基磷灰石柱层析法纯化藻蓝蛋白。在粉状活性炭法的研究中,通过单因素试验研究了粒径、添加量、藻蓝蛋白浓度和时间对藻蓝蛋白的提纯效果,并与羟基磷灰石柱层析法联用以优化高纯度藻蓝蛋白的提取纯化工艺组合。结果表明,粉末活性炭法纯化藻蓝蛋白的最优条件是粒径400~500目,藻蓝蛋白浓度1.0 mg·mL^-1,添加量100 g·L^-1和吸附时间15 min,经羟基磷灰石柱层析法纯化后,藻蓝蛋白纯度可达4.51,回收率为36%。     

普通念珠藻(Nostoc commune Vauch.)藻蓝蛋白的提取

[目的]为普通念珠藻藻蓝蛋白的提取及开发提供试验及理论基础。[方法]以普通念珠藻为材料,比较藻体及细胞的破碎方法、提取液类型及饱和硫酸铵浓度对藻蓝蛋白提取的影响。[结果]结果表明:利用发酵法破碎藻体和细胞,0.05 mol/L的KP缓冲液(pH值7.2)作为提取液,经过30%~50%饱和硫酸铵盐析和DEAE-Toyopeal 650 S离子交换柱层析后,藻蓝蛋白纯度达2.51,最大紫外-可见吸收峰位于616 nm。[结论]普通念珠藻藻蓝蛋白分离提取较为理想的程序为:藻粉→0.05 mol/L KP缓冲液(pH值7.2)浸泡→发酵法破碎细胞→35%~50%饱和硫酸铵盐析→DEAE-Toyopeal 650 S柱层析→较纯的藻蓝蛋白。     

钝顶螺旋藻藻蓝蛋白的提取及分子量研究

以藻蓝蛋白(CPC)的提取率为指标,用冻融法对藻蓝蛋白进行提取,最后用SDS-PAGE和排阻色谱法对藻蓝蛋白的分子量分别进行了测定,结果表明,冻融法提取藻蓝蛋白的最优工艺参数为:料液比为1∶22,提取温度35℃,提取时间2.5h,藻蓝蛋白的提取率为3.19%。SDS-PAGE法测得藻蓝蛋白的分子量为40000 Da,排阻色谱法测得藻蓝蛋白的分子量为43200 Da,这2种方法所得的CPC蛋白分子量基本一致。     

分段盐析联合两步柱层析纯化巢湖蓝藻藻蓝蛋白

以巢湖打捞的新鲜蓝藻藻泥为处理对象,利用冻融破壁的方式获得藻蓝蛋白(phycocyanin,PC)粗提液。采取两步盐析初步纯化粗提液获得PC,再用纤维素(Cellufine A-500)阴离子交换树脂中度纯化PC,最后用羟基磷灰石(HA)柱高度纯化PC。结果表明,在室温25℃下,两步盐析(NH_4)_2SO_4的最佳摩尔浓度分别为1.0mol·L~(-1)和1.8 mol·L~(-1),PC纯度(A_(620)/A_(280))达到2.168,PC回收率可达37.5%。再经Cellufine A-500和HA两步柱层析纯化,PC纯度(A_(620)/A_(280))分别达到3.211和4.133,回收率分别为20.3%和7.2%,纯度达到试剂级纯度要求。     

鱼腥藻藻蓝蛋白的提取·分离纯化和抑菌研究

[目的]对鱼腥藻藻蓝蛋白的提取进行优化,并对藻蓝蛋白粗品进行分离纯化、凝胶电泳以及抑菌作用研究。[方法]采用反复冻融法提取藻蓝蛋白,液相色谱分离纯化藻蓝蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白质成分,并利用96孔板法培养、酶标仪浓度检测,进行抑菌作用研究。[结果]藻蓝蛋白提取的最佳条件为固液比1∶1 g/ml,冷冻时间60 min,硫酸铵饱和度为60%。藻蓝蛋白的最大吸收光是620nm。高效液相色谱分离得到3种蛋白质,标记为PC-1、PC-2、PC-3。SDS-PAGE电泳可知,PC-1和PC-2的分子量在14～18 kD。PC-2对苏云金芽孢杆菌和藤黄叠球菌有较弱的抑菌作用。[结论]为鱼腥藻藻蓝蛋白的提取、纯化和性质研究提供了试验依据。     

地木耳藻蓝蛋白α和β亚基分离纯化的研究

经过研究建立了盐析、离子交换层析和凝胶过滤层析的分离纯化程序,从地木耳（Nostoc commune）细胞中分离纯化出藻蓝蛋白的α和β两个亚基,其纯度（A615/A280）为5.7,最大吸收峰为615 nm,荧光发射峰为560 nm,α和β亚基的分子量分别为18.1 kD和19.1 kD。     

不同试验条件对藻蓝蛋白提取效率的影响

以实验室培养的水华蓝藻单种[铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa,M.A)、水华微囊藻(Microcystis flos-aquae,M.F)、惠氏微囊藻(Microcystis wesenbergii,M.W)、鱼腥藻(Anabaena sp,A.s)]以及野外新鲜水华蓝藻为研究对象,通过设置不同细胞破碎方法和提取剂种类,筛选并优化藻蓝蛋白荧光分析法的前处理技术。结果表明,冻融试验中,冷冻温度与提取剂添加顺序对蓝藻细胞破碎率无显著影响;以去离子水为提取剂时,冻融2次即可达到最佳破壁条件;在冻干试验中,蓝藻真空抽滤在滤膜上能提高蓝藻细胞的破碎率;综合比较冻融和冻干,后者对蓝藻细胞的破碎效率高于前者;对比3种提取剂对藻蓝蛋白的提取效率,去离子水对藻蓝蛋白的提取效率最高。     

R-藻蓝蛋白的分离纯化及抗食物过敏活性研究

为探究R-藻蓝蛋白抗过敏功效,以坛紫菜为原料,通过25%～35%硫酸铵盐析和DEAE-Sepharose Fast Flow、Sephacryl S-200 HR两步柱层析获得了高纯度的目的蛋白（A620/A280〉6.0）.SDS-PAGE显示,该蛋白质由分子质量为17.7 ku和20.5 ku的两个亚基组成,紫外可见分光光度法测得其在620 nm、555 nm有两个特征吸收峰,可确认其为R-藻蓝蛋白.热稳定性和pH值稳定性实验结果显示,R-藻蓝蛋白在低于35℃、pH=4.0～9.0条件下光谱性质相对稳定.动物实验结果表明,100μg/mL高纯度R-藻蓝蛋白能够显著降低小鼠血清中IgE水平;细胞实验结果表明,40μg/mL R-藻蓝蛋白能够降低细胞因子IL-4、IL-13的蛋白质分泌量;基因表达量分析结果显示,R-藻蓝蛋白能够降低IL-4在淋巴细胞中的表达量.可见,坛紫菜R-藻蓝蛋白通过促使CD4＋T cell向TH1型转化发挥抗食物过敏活性.     

藻蓝蛋白生理活性及作用机制研究进展

就近年来藻蓝蛋白的生理活性尤其是抗癌活性、抗氧化、抗炎、免疫调节等方面的研究进展进行了综述。     

蓝藻堆肥中养分及微囊藻毒素含量变化

为探索和优化开放环境中脱水藻泥堆肥化处理工艺,以滇池打捞的蓝藻藻泥为原料,采用室外堆肥方法,研究米糠、麦麸、酒糟作为填充剂对蓝藻堆体的养分含量、发芽指数和微囊藻毒素(MCs)含量的影响,并对这些因子之间的相关性进行了分析。结果表明:堆肥结束后,碳素损失率为23.2%～36.2%,氮素损失率为40.7%～56.9%,总磷、总钾和灰分含量均增加;堆肥结束后,各处理的总养分含量(N+P2O5+K2O)均能满足有机肥料标准,堆肥50 d后各处理发芽指数都超过80%,MC-RR低于检测底限10μg/kg,MC-LR的降解率也达到90%以上。综合各类指标,麦麸作为填充剂的效果最好。堆肥过程中MC-RR含量和MC-LR含量间有极显著的相关性,微囊藻毒素含量与堆体有机碳和总氮含量呈显著正相关,而与总磷、总钾、总养分含量以及灰分呈显著负相关。     

蔷薇红景天中原花青素提取与纯化研究

该文以蔷薇红景天为原料,对其中的原花青素提取工艺进行了研究,以乙醇为提取剂,考察了乙醇浓度、提取时间、料液比、pH值及提取温度5个因素的影响,在单因素试验的基础上,通过正交试验筛选出最佳的提取工艺条件,即乙醇浓度70%、提取时间90 min、料液比1∶25、pH5.0、提取温度80℃,在此条件下测得红景天中原花青素含量为3.6%,提取率为96.5%.再对原花青素进行多次萃取纯化,最后冷冻干燥为固体粉末,所得产品纯度为35.0%,原花青素的回收率为95.6%.     

油菜秸秆与蓝藻混合堆肥及其产物对玉米生长的影响

为了研究油菜秸秆与蓝藻无害化处理及资源化利用技术,开展了油菜秸秆与蓝藻混合及堆肥盆栽玉米的实验。设置了4组不同比例的油菜秸秆与蓝藻混合高温好氧堆肥处理,根据堆肥腐熟水平和肥效,筛选出油菜秸秆:蓝藻为3:2的处理,将其堆肥盆栽玉米,与施复合肥和不施肥处理比较分析玉米生长及品质指标。结果表明,油菜秸秆和蓝藻按不同比例混合堆肥过程中p H均维持在7~9,符合好氧堆肥对p H的要求,35 d后堆肥GI(germination index)在80%以上,达到完全腐熟标准。油菜秸秆与蓝藻按照3:2混合堆肥腐熟后,C/N从22.9降低为18.4,肥效(N+P2O5+K2O)为6.73%,优于其他各组。盆栽实验结果表明施堆肥和复合肥处理在玉米大喇叭口期株高与叶面积显著高于不施肥处理(P0.05),在玉米收获后株高、穗粗、穗粒数和百粒重、粗脂肪和粗蛋白含量均显著高于不施肥处理(P0.05),但堆肥处理与复合肥处理玉米生长、品质指标没有显著差异。油菜秸秆与蓝藻按照3:2比例混合好氧堆肥,35 d后完全腐熟,在肥效与安全性方面可以替代普通复合肥。     

甘薯紫色素的提取、纯化及稳定性研究

以体积分数为1％盐酸溶液作为提取剂,紫甘薯根块与提取剂比例为1 g:2 mL,4℃提取24 h,抽滤后得到色素粗提液;用AB-8大孔树脂吸附,pH 2.6柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液除杂,70％乙醇溶液洗脱,得到色素纯化液.分析不同pH条件下与常用食品添加剂共存时紫色素的稳定性.结果表明,在pH 1～10的范围内,甘薯紫色素的色泽变化为红色→淡红→紫红.防腐剂、抗氧化剂、氧化剂对甘薯紫色素有不同程度的破坏作用,甘薯紫色素对防腐剂丙酸钠、抗氧化剂D-异抗坏血酸钠和氧化剂H2O2较敏感,稳定性较差,使用时应尽量避免与这几种物质共存;对还原剂Na2SO3不太敏感,稳定性较好.而蔗糖、咸味物质NaCl、柠檬酸和磷酸对甘薯紫色素有不同程度的增色作用.     

黑果花楸花色苷提取、纯化工艺研究

以黑果花楸花色苷得率为考察指标,分别用水,50%、60%、70%、80%、90%、100%的乙醇和50%、60%、70%、80%、90%、100%的甲醇作为溶剂提取黑果花楸花色苷,得出80%乙醇为较好的提取溶剂。以80%乙醇为提取溶剂,进行提取时间、料液比、pH值、提取温度4个单因素试验。在单因素试验基础上,运用Box-Behnken响应面设计建立数学模型。结果表明最佳提取条件为:提取时间110 min、pH值2、提取温度34 ℃、料液比1∶16.5,黑果花楸花色苷得率为6.648 mg/g。通过静态吸附和解吸筛选出黑果花楸花色苷的最佳纯化树脂为AB-8,最佳纯化条件为上样质量浓度2 mg/mL,径长比1∶25,用2.2 BV、pH值2的80%乙醇以2.0 BV/h的流速洗脱,可使花色苷纯度提高11.5倍。      

Extraction and purification of the polysaccharides in Hippohaere rhamnoides L.

The different extraction technology and purification technology of Hippohpae rhamoides polysaccharides were researched in the paper.The best method of papain extraction were obtained,the ratio of papain 2%,pH at 5.5,temperature at 45℃and extraction time of 20 min were suitable for papain extraction.The highest content of Hippohpae rhamoides polysaccharides was 44.28 mg·g~(-1). The optimum process of ultrasonic extraction were obtained,namely extracted for 55 min at 480 W with the material ratio of 1:20. The highest content of Hippohpae rhamoides polysaccharides was 48.63 mg·g~(-1).The results showed that the ultrasonic and papain extraction together was the best method,the content was 54.30 mg·g~(-1).After the removing protein,pigment and dialysis.Two fraction were separated from the purified Hippohpae rhamoides by DEAE-cellulose chromatography,the main fraction was collected finally. The fraction was identified by Sepharose CL-4B gel filtration.Ultraviolet spectrometry,freeze-thawing analysis showed that fraction was purified.Its molecular weight was probably 109.4 ku.     

太湖沉水植物附生藻类群落对水盾草入侵能力的影响

为探究冬季乡土沉水植物表面附生藻类群落对水盾草的入侵是否存在抵抗力,在冬季采用透析袋对接种有来自乡土种、入侵种沉水植物及二者混合的附生藻类群落的水盾草断枝进行为期4周的培养,收获后分析不同附生藻类群落对水盾草附生藻类群落密度、组成情况和生长、拓殖再生能力的影响。结果表明,不同处理下,水盾草的附生藻类群落密度与组成有显著区别。入侵沉水植物附生藻类群落处理组中的水盾草断枝生长速率与再生拓殖能力均高于乡土和混合附生藻类群落处理;相较于水盾草表面原生附生藻类群落,乡土附生藻类群落短期内可显著抑制水盾草的生长和拓殖,表现出抵抗作用。但在冬季,随着太湖中乡土沉水植物相继死亡,其附生藻类群落随之消亡,无法继续抵抗水盾草的入侵。这在一定程度上解释了水盾草在冬季太湖入侵并形成单一优势群落的原因,为沉水植物生物入侵的治理提供了理论依据。     

奶牛瘤胃胃液微生物总DNA的提取和纯化

本研究建立了从奶牛瘤胃液中提取混合微生物总DNA的方法，对现有的方法进行改进使其适合于瘤胃混合微生物总DNA的提取。粗提后的瘤胃DNA可以直接扩增出16SrDNA。提取效率为每毫升瘤胃液的DNA提取量为0.1～0.3μg。通过SiO2回收进行纯化，纯化回收率达到34%～50％；用clean-up试剂盒纯化，纯化率可达到85％以上。经过纯化后的DNA可进行其它的分子生物学操作。