中草药添加剂对绵羊瘤胃微生物区系的影响

为研究中草药添加剂对绵羊瘤胃微生物区系的影响,选用15只装有永久性瘤胃瘘管的绵羊羯羊,按完全随机试验设计分为5组。其中4个试验组1个对照组,4个试验组分别添加4个中草药配方。运用分子生物学方法,对瘤胃内三种主要纤维分解菌:黄色瘤胃球菌(Ruminococcus flavefaciens)、白色瘤胃球菌(Ruminococcus albus)和产琥珀酸丝状杆菌(Fibrobacter succinogenes)进行实时定量PCR(real-time qPCR)测定。试验表明:添加中草药添加剂促进纤维分解菌的生长,各试验组中纤维分解菌数量均高于对照组。其中配方Ⅲ能够促进黄色瘤胃球菌(P0.05)和白色瘤胃球菌(P0.05)的生长。配方Ⅱ则有效地促进产琥珀酸丝状杆菌的生长(P0.05)。     

发酵玉米蛋白粉对犊牛生长、血液指标、瘤胃菌群和营养物质消化的影响

选取20头健康荷斯坦公犊,经两周适应期后,将犊牛按体重和日龄随机分为两组:①对照日粮组(未处理基础日粮);②FCGM日粮组(50 kg FCGM·kg~(-1)基础日粮;DM基础),试验期42 d。结果表明,日粮中添加FCGM显著(P<0.05)提高犊牛平均日增重和饲料效率;饲喂FCGM犊牛血浆TP、CAT、T-SOD、T-AOC、IgA和IgG含量显著(P<0.05)增加,UN和CHOL含量显著降低(P<0.05);试验组黄色瘤胃球菌、白色瘤胃球菌、栖瘤胃普雷沃氏菌、溶纤维丁酸弧菌和原虫相对丰度均显著(P<0.05)高于对照组;日粮中添加FCGM显著(P<0.05)增加CP和NDF表观消化率。日粮中添加FCGM可提高犊牛生长性能,改善血浆生化指标,提高犊牛抗氧化和免疫能力,调节瘤胃微生物菌群结构,促进营养物质消化。     

山羊痘口服疫苗免疫后对其瘤胃中主要细菌含量的影响

为弄清山羊痘口服疫苗免疫后对山羊的安全性,采用实时定量PCR方法,对山羊免疫后瘤胃中主要细菌的含量进行了测定。结果表明:口服疫苗组山羊瘤胃中白色瘤胃球菌、产琥珀酸丝状杆菌和黄化瘤胃球菌3种纤维分解菌在30d前会产生一定程度的变化,但30d后,瘤胃中的3种纤维分解菌的含量变化与空白对照组差异不显著,口服疫苗未造成瘤胃微生态紊乱,具有较好的安全性。     

牛瘤胃内主要细菌结构与功能探查

正通常年每毫升瘤胃液含10~9~10~(10)个细菌,种类达300多种以上,现已鉴定出60种瘤胃细菌。1纤维分解菌1.1瘤胃球菌白色瘤胃球菌和黄色瘤胃球菌是瘤胃中主要的纤维分解菌,均为严格厌氧型革兰氏阳性球菌。两种菌能产生大量的纤维素酶和半纤维素酶,将纤维素降解。黄色瘤胃球菌能产生结构复杂的木聚糖酶、多种内切酶和一种外切酶,可将结构复杂的纤维物质降解成纤维二糖、戊糖和挥发性脂肪     

纳豆芽孢杆菌分离纯化及对大白鼠肠道微生态系统的影响

研究了大白鼠肠道细菌的分离纯化,SD大白鼠口服纳豆芽孢杆菌1周后粪便中细菌、厌氧菌群和需氧菌群的变化,及纳豆芽孢杆菌与肠道细菌在体外的生长竞争表现.结果表明,肠道厌氧菌群中的双歧杆菌、乳酸杆菌、梭菌和拟杆菌数量均有不同程度增多,其中双歧杆菌从8.510±0.449 Log10N cfu/g增加至9.278±0.244 Log10N cfu/g;而肠杆菌、肠球菌等需氧菌群数量则明显减少,肠杆菌从8.213±0.426 Log10N cfu/g减少到7.709±0.372 Log10N cfu/g.体外竞争试验表明,纳豆芽孢杆菌能促进肠道厌氧菌群的生长,而抑制需氧菌群的生长.可见,纳豆芽孢杆菌能有效调整大白鼠肠道菌群数量的变化,起到维持肠道微生态平衡的作用.     

采用实时荧光定量PCR法分析小熊猫胃肠道菌群

运用实时荧光定量PCR技术,分析1只临床死亡小熊猫胃肠道13种菌群的差异性。结果显示:检测的13种菌群在小熊猫不同肠段的数量有差异,肠杆菌科(Enterobacteriaceae)在各肠段的菌群丰度差异显著(P0.05),其菌群丰度在空肠高达9.35;白色瘤胃球菌(Ruminococcus albus)和黄色瘤胃球菌(Ruminococcus flavefaciens)的数量在直肠最多,菌群丰度分别达5.29和3.91;其他菌群的数量均在结肠最多,其中溶纤维丁酸弧菌(Butyrivibrio fibrisolvens)、埃氏巨球形菌(Megasphaera elsdenii)和梭菌类群IV(Clostridium cluster IV)的数量在结肠中较高,菌群丰度分别为9.03、6.06和9.13;与胃相比,菌群丰度在小熊猫空肠、结肠和直肠差异显著(P0.05)。综合分析,小熊猫的空肠、结肠和直肠对其健康生长可能起着重要的作用,肠杆菌科的细菌数量最多且在不同肠段差异显著,是今后小熊猫胃肠道菌群研究值得关注的菌群之一。     

不同品质粗饲料日粮对瘤胃发酵及主要纤维分解菌的影响

 【目的】研究不同品质粗饲料组成的混合日粮对绵羊瘤胃发酵功能和3种主要纤维分解菌的影响。【方法】以粗饲料分级指数GI为指标对粗饲料品质进行调配,在精粗比为2﹕8条件下配制3种混合日粮,其中含高GI粗饲料日粮组（H组,GI值＝2.89）、含中GI粗饲料日粮组（M组,GI值＝1.73）和含低GI粗饲料日粮组（L组,GI值＝0.65）。利用16S rRNA特异性寡核苷酸探针杂交法测定3种纤维分解菌的数量变化。【结果】三组试验动物瘤胃液pH维持在正常范围,各组间差异不显著（P＞0.05）,但H组pH变化更为平缓。随着GI指数的升高,瘤胃液NH3-N浓度呈升高势态,H组显著高于L组（P＜0.05）,乙酸浓度有降低的趋势,而丙酸浓度则有上升的趋势,乙酸/丙酸出现降低趋势,各试验组TVFA浓度的平均值差异不显著（P＞0.05）。黄化瘤胃球菌在绵羊瘤胃中相对含量的总平均值为1.18%,白色瘤胃球菌的相对含量为2.44%,琥珀酸拟杆菌的含量为10.07%。【结论】不同品质粗饲料日粮显著影响绵羊瘤胃产琥珀酸丝状杆菌的数量,随着粗饲料品质的升高,该菌的数量有增加的趋势;不同品质粗饲料日粮改变了瘤胃的发酵方式和发酵功能。     

斜带石斑鱼稚鱼和早期幼鱼消化道可培养菌群研究

利用常规微生物分离鉴定方法结合16S rRNA基因序列分析研究斜带石斑鱼Epinephelus coioides 40d稚鱼和70d早期幼鱼消化道可培养菌群.结果表明,副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus、哈维弧菌Vibrio harveyi、短小芽孢杆菌Bacillus pumilus、鲍氏不动杆菌Acinetobacter baumannii、恶臭假单胞菌Pseudomonas putida、嗜冷杆菌Psychrobact-er sp.和洋葱伯克霍尔德菌Burkholderia cepacia均从稚鱼和早期幼鱼消化道分离.系统进化分析结果表明,斜带石斑鱼消化道细菌可归为3类:γ-变形杆菌纲γ-Proteobacteria、β-变形杆菌纲β-Proteobacteria和芽孢杆菌纲Bacil-li.稚鱼和早期幼鱼消化道的优势菌相似,稚鱼消化道的优势菌为芽孢杆菌Bacillus、嗜冷杆菌Psychrobacter、葡萄球菌Staphylococcus和不动杆菌Acinetobacter,而早期幼鱼消化道的优势菌为芽孢杆菌、不动杆菌、嗜冷杆菌和假单胞菌Pseudomonas.芽孢杆菌为稚鱼与早期幼鱼消化道的最优势菌,分别占可培养细菌总数的78.6%和75.6%,而弧菌在稚鱼和早期幼鱼消化道中的数量均较低,分别仅占消化道可培养细菌总数的2.8%和1.1%.乳酸乳球菌Lactococcus lactis、干酪乳杆菌Lactobacillus casei和屎肠球菌Enterococcus faecium等3种乳酸菌仅见于早期幼鱼消化道.     

斜带石斑鱼幼鱼消化道与养殖水体中可培养菌群的研究

利用海水琼脂、TCBS和MRS培养基对斜带石斑鱼Epinephelus coioides幼鱼消化道和养殖水体中的细菌进行分离纯化,采用生理生化鉴定结合16SrRNA基因测序进行细菌鉴定,探讨了幼鱼消化道中的菌群与养殖水体中菌群的关系。结果表明：幼鱼消化道中可培养细菌总数（9．0×106cfu／g）高于养殖水体中可培养细菌总数（5．4×105cfu／mL）,幼鱼消化道中细菌种类也明显多于养殖水体;在幼鱼消化道和养殖水体中均检测到副溶血弧菌、哈维氏弧菌、短小芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、鲍氏不动杆菌、嗜冷杆菌和洋葱伯克霍尔德菌等7种细菌。细菌系统进化分析结果表明,这些细菌隶属于β-变形杆菌纲、γ-变形杆菌纲和芽孢杆菌纲。幼鱼消化道和养殖水体的优势菌中均有芽孢杆菌和嗜冷杆菌,提示芽孢杆菌和嗜冷杆菌能通过养殖水体很好地进入消化道。3种乳酸菌（乳酸乳球菌、干酪乳杆菌和屎肠球菌）仅见于幼鱼消化道,且仅占消化道菌群数量的0．70％。弧菌在消化道和养殖水体中所占比例均很小,分别仅占细菌总数的1．07％和0．10％。     

日粮补给罗伊乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌对断奶仔猪消化道主要微生物的影响

断奶会显著改变仔猪肠道菌群结构,保持仔猪在断奶过程中肠道微生物结构的稳定性和健康,是缓解仔猪断奶应激的一个有效方法。本研究通过日粮中补给罗伊乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌,探讨罗伊乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌对仔猪胃肠道主要细菌的影响。结果表明,与对照相比,日粮补给枯草芽孢杆菌降低胃和十二指肠中乳酸杆菌含量,提高空肠、回肠和结肠中乳酸杆菌含量,显著降低大肠杆菌在各肠段的含量。日粮补给罗伊乳酸杆菌或者金霉素,显著提高各肠段乳酸杆菌含量,降低各肠段大肠杆菌含量。这些结果为微生物制剂在仔猪断奶上的应用提供肠道微生物方面的依据。     

纳豆提取物和纳豆菌培养液对仔猪肠道菌体外抑菌试验

从纳豆中分离纯化得到纳豆菌,并从纳豆中提取纳豆激酶、纳豆抑菌物质2种粗提物,分别用2种粗提物和纳豆菌培养液对仔猪肠道乳杆菌、大肠杆菌等6种常见菌作体外抑菌试验,结果显示:纳豆菌培养液的抑菌作用较其它2种提取物强,对葡萄球菌、大肠杆菌等表现出明显的抑菌作用,而对沙门氏菌、乳酸杆菌抑菌作用不明显。     

纳豆生产优良菌株的筛选研究

[目的]筛选出最优的纳豆生产菌株。[方法]以实验室现有的16株纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)为出发菌株,通过蛋白酶、纳豆激酶及产黏(r-PGA)性能的综合指标,筛选出适合纳豆生产的纳豆芽孢杆菌。[结果]综合考虑,菌株DL-1521具有最高的蛋白酶、纳豆激酶和较高的产黏特性,具备作为纳豆生产优良菌种的特性。[结论]筛选结果可为纳豆直投式菌剂的制备提供优良菌株。     

白头翁皂苷B4对犊牛生长性能、消化代谢和瘤胃发酵的影响

【目的】通过探究白头翁皂苷B4对犊牛生长性能、消化代谢和瘤胃发酵参数的影响。为新型饲料添加剂的开发提供理论基础。【方法】试验选取60头新生荷斯坦公犊牛,随机分为4组(每组15头),分别饲喂0(C组)、15(A1组)、30(A2组)、45(A3组)mg·d^-1的白头翁皂苷B4。试验周期为56d。在犊牛14、28、42和56日龄晨饲前称量体重,并在28、42和56日龄晨饲后2 h采集瘤胃液,测定瘤胃发酵参数。分别在42和63日龄进行两期消化代谢试验,测定营养物质表观消化率和能氮代谢指标。【结果】(1)白头翁皂苷B4对哺乳期犊牛体重和干物质采食量无显著影响(P>0.05),但犊牛14—28日龄的平均日增重与白头翁皂苷B4呈显著正相关(P<0.05),饲料转化比与添加量呈显著负相关(P<0.05),其中A3组犊牛的平均日增重显著高于C组(P<0.05),饲料转化比显著低于C组(P<0.05)。(2)A3组犊牛7—56日龄和7—14日龄的粪便评分和腹泻率显著低于C组(P<0.05),A2组犊牛15—28日龄的粪便评分和腹泻率显著低于C组(...     

大豆寡糖和纳豆芽孢杆菌在肉鸡日粮中的应用

选取576只1日龄AA肉仔公鸡,随机分为12组,每组6个重复。以玉米—豆粕型日粮为基础日粮,添加不同水平的大豆寡糖(0,0.1%和0.3%)和纳豆芽孢杆菌(0,0.1%,0.3%和0.5%),研究大豆寡糖和纳豆芽孢杆菌组合对肉仔公鸡生产性能和十二指肠消化酶的影响,试验期为42 d。结果表明:大豆寡糖能提高AA肉仔公鸡日增重(P>0.05),极显著降低料肉比(P<0.01),提高十二指肠淀粉酶活性(P<0.05),胰蛋白酶活性(P>0.05);纳豆芽孢杆菌能极显著提高AA肉仔公鸡日增重(P<0.01),降低料肉比(P<0.01),极显著提高十二指肠淀粉酶、胰蛋白酶活性(P<0.01);大豆寡糖与纳豆芽孢杆菌组合在生产性能和十二指肠淀粉酶、胰蛋白酶活性上表现出互作效应,0.1%大豆寡糖、0.3%纳豆芽孢杆菌组合提高日增重,降低料肉比效率最好0.3%大豆寡糖、0.5%纳豆芽孢杆菌组合提高肉仔公鸡十二指肠淀粉酶、胰蛋白酶活性效果最好。     

纳豆芽孢杆菌对健康和鳗弧菌感染牙鲆肠粘液粘附的研究

[目的]研究纳豆芽孢杆菌在对健康和鳗弧菌感染牙鲆肠粘液粘附中的作用。[方法]应用5 mol/L LiCl提取纳豆芽孢杆菌表面蛋白,利用蛋白印迹法鉴定在纳豆芽孢杆菌表面蛋白中分子量及参与粘附的特异蛋白。[结果]对提取的纳豆芽孢杆菌表面蛋白进行SDS-PAGE后,发现仅出现一条明显的主要蛋白条带,分子量为29.58 kDa。经蛋白印迹分析,该蛋白质参与了健康和鳗弧菌感染牙鲆肠粘液的粘附过程;纳豆芽孢杆菌全菌蛋白在健康和鳗弧菌感染牙鲆肠粘液中有一个相同的粘附受体,蛋白分子量为13.91 kDa;健康个体还有一个粘附受体,分子量是29.86 kDa。[结论]纳豆芽孢杆菌的表面蛋白在对牙鲆肠粘液的粘附过程中起着重要作用。     

黏红酵母对牙鲆肠黏液黏附及肠道定植规律的研究

[目的]研究黏红酵母(Rhodotorula glutinis)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus casei)对牙鲆肠黏液的黏附能力,探讨黏红酵母在牙鲆肠道中的定植规律及对牙鲆抗病能力的影响。[方法]采用体外黏液黏附模型测定上述4株益生菌的黏液黏附能力,平板菌落计数法测定黏红酵母在肠道的数量。[结果]黏红酵母对牙鲆肠黏液黏附能力最强,其次是鼠李糖乳杆菌,纳豆芽孢杆菌黏附能力最弱。投喂含黏红酵母饲料的牙鲆肠道其酵母数量达到了103～104cfu/g内含物。鳗弧菌攻毒后,对照组牙鲆死亡率显著高于黏红酵母组。[结论]黏红酵母在牙鲆肠道具有较好定植潜能并能降低牙鲆因弧菌引起的死亡率,因此具有较好的应用前景。     

新疆棉花苗期病害拮抗细菌的筛选和应用

1998～1999年从新疆五个主要植棉区健壮棉苗的根际土壤中分离到1 288株细菌.通过LB平板对峙测定,选出对强致病菌R105(R.Solani)和致病菌F106、F122、F108(Fusarium)抑制作用较强的116株拮抗细菌.经温室盆栽试验,10株芽孢杆菌(B.subtilis)对R.Solani表现明显的防效,且优于化学药剂处理(MBC、PCNB).在大田试验中,有三个菌株防效也比较明显.     

不同NFC/NDF水平饲粮对肉公犊牛生长性能和屠宰性能的影响

为研究非纤维性碳水化合物/中性洗涤纤维(NFC/NDF)水平对夏杂公犊牛生长性能、屠宰性能和肉品质的影响,选取2~3月龄健康、平均体重为(94.38±0.25)kg的夏杂断奶公犊60头,随机分为4组,每组15头。分别饲喂粗蛋白质水平相近,NFC/NDF为1.35(A组)、1.23(B组)、0.94(C组)和0.80(D组)的4种全混合饲粮。试验期105d,其中预试期15d,正试期90d。每天记录每头犊牛的采食量,在试验开始和结束时分别测定每头犊牛的体重、体尺;试验结束时每组随机选取6头犊牛进行屠宰试验,测定屠宰性能、器官鲜重和肉品质。结果表明:1)饲粮NFC/NDF水平对犊牛平均日增重和体斜长的增长率有显著影响(P0.05),A组高于其他各组;2)犊牛采食A组饲粮后胴体重达到111.40kg,显著高于C组和D组(P0.05),但对屠宰率和净肉率均无显著影响(P0.05);3)采食A组饲粮的犊牛肝脏和脾脏分别为3.25和0.70kg,显著高于其他3组(P0.05),且脾脏指数有随饲粮NFC/NDF水平降低而降低的趋势,对其他器官重量及指数均无显著影响(P0.05)。综上所述,NFC/NDF为1.35组的饲粮可提高犊牛生长性能,更能满足3~6月龄肉公犊牛生长需要。     

纳豆菌的抗菌作用研究

为了寻找天然生物防腐剂,对纳豆菌的抗菌作用及其发酵液的抗菌成分进行了研究。纳豆菌经培养取其上清液,用Sevage法提取蛋白,无水乙醇提取多糖,制备蛋白及多糖水溶液。采用管碟法测定培养物上清液、蛋白及多糖水溶液的抗细菌和真菌能力。研究发现培养物上清液、蛋白及多糖水溶液均具有广谱抗菌作用,对细菌、真菌皆有一定的拮抗作用,特别是对志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母具有较强的抗菌作用,其中以志贺氏菌最为敏感;同时经比较分析发现,抗菌作用的主要组分是蛋白;纳豆菌的抗菌物质可起到杀菌作用,而非抑菌作用。     

毛竹内生细菌分离培养基的选择

采用稀释涂布法分离毛竹内生细菌,选用的基础培养基有LB培养基、TSA培养基、金氏培养基、淀粉铵培养基、改良察氏培养基;寡营养培养基有0.1×LB培养基、YG培养基、R2A培养基,以确定用于分离毛竹内生细菌的适宜培养基。在8种培养基中,YG培养基、金氏培养基和R2A培养基分离得到的细菌数量较高,分别为1.31×106、8.03×105和6.45×105CFU/gfw;依据菌落形态种类,R2A培养基分离到的内生细菌种类最多8种,其次YG培养基和金氏培养基均为7种。对分离得到的优势菌株进行16SrDNA序列测定,LB培养基、TSA培养基、YG培养基、R2A培养基、金氏培养基、淀粉铵培养基和改良察氏培养基分离得到的优势菌株与Mycoplana ramosa相似性最高,均为91%;而0.1×LB培养基分离得到的优势菌株与Leifsonia poae相似性最高,为99%。由此可知,0.1×LB培养基分离得到的优势菌株为Leifsonia poae,其他7种培养基分离得到的优势菌株为Mycoplana sp.。结果表明,采用R2A培养基,YG培养基和0.1×LB培养基分离毛竹内生细菌,可以达到较为理想的分离效果。