反相高效液相色谱法同时检测多种乳清蛋白成分

建立一种快速、简便鉴定和定量检测乳清蛋白中牛乳铁蛋白(bLf)、转基因人乳铁蛋白(rLf)、α-乳白蛋白(α-La)和β-乳球蛋白(β-Lg)的方法。对样品进行离心脱脂和酸法去除酪蛋白,水洗乳脂和酪蛋白以提高α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白(Lf)的回收率。乳清通过高效液相色谱检测,采用Proteonavi反相C4色谱柱,以体积分数为0.1%的三氟乙酸水溶液和乙腈水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.5mL/min,柱温35℃,检测波长280nm。结果显示:此方法可以有效分离牛α-乳白蛋白、牛β-乳球蛋白、牛乳铁蛋白和转基因人乳铁蛋白。标准品线性关系良好,平均回收率在正常范围内。     

乳清中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白分离制备技术研究

本研究采用不同分离方法对牛乳乳清中的主要成分α-乳白蛋白和β-乳球蛋白进行逐级分离纯化。利用两步硫酸铵沉淀法对乳清蛋白进行初级分离,使蛋白含量提高了4倍;响应面法优化PEG1500/硫酸铵双水相萃取系统的最佳工艺参数,萃取后蛋白组分被进一步纯化,蛋白浓度提高到815.6 mg/g,达到浓缩主要蛋白的目的;萃取蛋白经Sephadex G-75和DEAE离子交换层析后,所获得的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白样品纯度达到85%。     

反相高效液相色谱法对动物乳清蛋白组分的分离比较

采用反相高效液相色谱法分离比较了乳牛、牦牛、绵羊、山羊等的乳清蛋白组分.结果显示,在C8色谱柱上,牛、绵羊和山羊乳清蛋白主要组分在35 min内能得到较好的分离;绵羊、山羊、牛β-乳球蛋白、牛α-乳清蛋白的色谱图存在差异,可用于乳种类的区分;而牛β-乳球蛋白的遗传变异体未分离到.     

凝胶色谱法测定乳清中主要蛋白的相对分子量及其分布

本研究采用凝胶色谱分析技术,以牛乳乳清为研究对象,建立一种简便、快速的测定α-乳白蛋白和β-乳球蛋白含量的方法。通过一系列的试验,确定最佳凝胶色谱试验条件:采用PBS缓冲液作为流动相,柱温为35℃,检测器为示差折光检测器,流速1 m L/min,进样量为20μL。在该工艺条件下,牛乳乳清中的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白被有效地分离纯化,蛋白的回收率在90%以上。本方法具有良好的重复性和稳定性,为短时间内对乳制品中的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白进行分离和定量检测提供一种新的方法,满足了科研和生产的需求。     

牛初乳、常乳和免疫乳乳清中主要蛋白的SDS-PAGE分析

采集荷斯坦奶牛初乳、常乳和免疫乳,通过SDS-PAGE电泳对其乳清中的主要蛋白进行分析.结果表明:从SDS-PAGE电泳图谱上可见有5个清晰的条带,自上而下分别为乳铁蛋白、牛血清白蛋白、IgG重链、β-乳球蛋白和α-乳白蛋白.其中32d免疫乳和0～3d初乳可见有IgG轻链,其他乳样IgG轻链条带较弱.0～7d初乳乳清蛋白含量随泌乳天数的增加而逐渐下降,0～5d初乳乳清蛋白含量差异显著,并维持较低水平.免疫乳15和32d各乳清蛋白含量均高于常乳.     

乳清蛋白-低聚异麦芽糖的制备及抗原性研究

将低聚异麦芽糖通过糖基化引入乳清蛋白制备乳清蛋白-低聚异麦芽糖,用间接竞争ELISA法测定不同乳清蛋白与低聚异麦芽糖质量比,不同反应时间生成的乳清蛋白-低聚异麦芽糖中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白抗原性的变化。结果表明:糖基化能有效降低乳清蛋白中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的抗原性;不同反应时间、不同乳清蛋白与低聚异麦芽糖质量比对乳清蛋白中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白抗原性的影响不同,乳清蛋白与低聚异麦芽糖的质量比为1∶4,反应24 h时效果最好,α-乳白蛋白的抗原性从25.67μg/mL降低到9.33μg/mL,β-乳球蛋白的抗原性从97.82μg/mL降低到28.25μg/mL。     

消除乳清蛋白中β-乳球蛋白致敏性的研究进展

现阶段的婴儿配方奶粉添加脱盐牛乳清粉以调节乳清与酪蛋白的比例,而乳清粉中含有大量的β-乳球蛋白,β-乳球蛋白可能引起婴幼儿的食物过敏,文章就消除乳清中β-乳球蛋白致敏性的研究进展进行了详尽阐述。     

牛乳蛋白与过敏儿童患者血清特异性IgE结合情况的检测与分析

研究牛乳蛋白过敏儿童血清中对4种主要乳蛋白过敏原的抗体特异性情况。采用间接酶联免疫吸附法测定乳过敏儿童血清中4种乳蛋白过敏原特异性IgE抗体。结果显示,乳过敏儿童血清中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的特异性IgE比例较高,特异性IgE阳性率分别可达44.3%和39.3%,其次α-酪蛋白和β-酪蛋白特异性IgE阳性率为31.2%和36.1%。研究结果表明,乳过敏儿童对4种乳蛋白过敏原都有一定比例的特异性IgE抗体,其中α-LA和β-LG的阳性率较高,是乳蛋白过敏儿童的主要过敏原蛋白,大部分乳过敏儿童不止对1种乳蛋白过敏。     

转人α-乳清白蛋白基因番茄的获得

由农杆菌介导、采用叶盘法将人α-乳清白蛋白基因导入番茄外植体,经过筛选培养,获得了18株抗性植株.PCR分析和GUS染色检测结果表明外源基因已经导入到番茄中.这一结果为进行人α-乳清白蛋白生物反应器研究奠定了基础.     

中国牦牛乳蛋白遗传多态性及其与泌乳性能相关性研究

 利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对109头麦洼牦牛和100头九龙牦牛乳蛋白多态性进行分型,并采用最小二乘法分析乳蛋白多态性与泌乳性能及乳蛋白组分之间的相关性。结果表明,β-CN、κ-CN和α-La呈单态,基因型分别为AA、BB和BB型;而αs1-CN和β-Lg呈多态,αs1-CN 的D基因为优势基因,在麦洼牦牛和九龙牦牛中的频率分别为0.8073和0.6000, β-Lg座位优势基因为β-Lg E,在麦洼牦牛和九龙牦牛中的频率分别为0.9770和0.9700;麦洼牦牛和九龙牦牛群体平均杂合度分别为0.10     

甘肃黑白花奶牛α－乳清蛋白及β－乳球蛋白多态性的研究

在评述奶牛α－乳清蛋白（α－Ｌａ）及β－乳球蛋白（β－Ｌｇ）遗传多态性研究进展的基础上，作者采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法，对来自３个奶牛场的１７９头甘肃黑白花奶牛、６０头西德黑白花奶牛及６０头美系黑白花奶牛乳样中α－Ｌａ及β－Ｌｇ的多态性作了分析。结果发现甘肃黑白花奶牛同美系、德系黑白花奶牛一样，在这两个基因座上均只有Ａ和Ｂ两个常染色体共显性等位基因；相比之下，其基因频率更接近于美系黑白花奶牛。     

Genetic Polymorphism of Milk Protein and Their Relationships with Milking Performances in Chinese Yak

The milk protein polymorphisms were typed by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE)from 109 Maiwa and 100 Jiulong yaks, and the relationships among milk protein polymorphisms,milking traits and milk protein compositions were studied. The results showed that β -CN, κ -CN and a -La were monomorphic, a sl-CN and β -Lg were polymorphic, the dominantgenes were α s1-CN D and β -Lg E,respectively. The frequencies of α s1-CN D were 0.8073and 0.6000 and β -Lg E were 0.9770 and 0.9700 in two populations respectively. The meanheterozygosities were 0.1021 and 0.1 867 in two populations. No significant effects onmilking traits and milk protein compositions were observed except for u s1-CN locus onfat percentage in Jiulong yak.     

向日葵抗坏血酸过氧化物酶的电子克隆和生物信息学分析

利用电子克隆技术得到长753 bp的向日葵抗坏血酸过氧化物酶(HaAPX)cDNA。通过生物信息学分析发现,HaAPX在核酸水平和蛋白质水平上都与常见物种的APX非常相似,具有极其保守的酶活作用域Peroxidase-1(-divtlsggHtl-)和Peroxidase-2(-aplmlRlawHsa-),且配体结合位点和金属结合位点完全保守。HaAPX与甘薯(Ipomoea batatas)APX亲缘关系很近,其编码蛋白由250个氨基酸组成,分子量为2.7 ku,无信号肽和跨膜区,二级结构由37.6%α-螺旋、13.2%β-折叠、9.2%β-转角和40%无规则卷曲组成,三维构象与豌豆APX的非常相似。     

6种血清的醋酸纤维素薄膜电泳分析

在相同的实验条件下,采用醋酸纤维素薄膜电泳,分析了人和5种动物(鸡、牛、兔、羊与猪)血清的蛋白组分,结果表明,人和兔血清的电泳图谱为5条带,从正极到负极分别为清蛋白和α1,α2,β,γ球蛋白;鸡、牛和羊血清的电泳图谱为4条带,从正极到负极分别为清蛋白和α,β,γ球蛋白;猪血清的电泳图谱为3条带,从正极到负极分别为清蛋白,α与β球蛋白混合带,γ球蛋白。且不同种类血清相对应条带的带宽、着色深浅也不同。说明不同动物血清蛋白组分与含量存在差异。     

β－乳球蛋白加压凝胶的生成及其物化特性研究

 研究了在30℃ 、800 MPa压力的作用下, 不同加压时间（5～120 min）和不同浓度N-乙基马来酰亚胺 (NEM,1～10 mmol·L-1)对14%（w/v）的β-乳球蛋白（β-Lg）溶液在pH 7.20条件下形成凝胶物理化学特性的影响。结果表明，延长加压时间未对凝胶的硬度和破断应力造成影响。凝胶呈现出类似蜂窝状的多孔网状结构。随加压时间延长，蜂窝状多孔的孔径变大，但其网状结构未受到破坏。在加压时间延长的条件下凝胶保持着高持水力，说明在加压过程中，凝胶内部蛋白质和水的相互作用未产生明显变化。随加压时间延长，用Tris-glycine-EDTA缓冲溶液或含有0.5% SDS和8 mol·L-1尿素的缓冲液溶解凝胶，发现凝胶中蛋白溶解度降低。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱显示，在2-巯基乙醇不存在的条件下，除了β-Lg单体以外，还检出二聚物、三聚物、四聚物以及高分子聚合体的染色带。相反，在2-巯基乙醇存在的条件下，只检出了单体。此外，在800 MPa条件下添加10 mmol·L-1的N-乙基马来酰亚胺未导致凝胶的生成。表明在pH中性范围内，加压 β-Lg凝胶，主要是通过SH基的氧化和SH/S-S内部交换反应形成的内部分子间架桥而形成。     

甘肃黑白花奶牛α－乳清蛋白及β－乳球蛋白多态性与产奶量相关性研究

在分析甘肃黑白花奶牛α－乳清蛋白及β－乳球蛋白遗传多态性的基础上，作者对这两个基因座与产奶量的相关性及其互作效应作了研究。发现这两个基因座对产奶量无显著影响及明显的互作效应，结合国外对β－乳球蛋白多态性与乳加工特性及乳品质相关性研究的结论，作者认为在甘肃黑白花奶牛进一步的选育中，应适当或尽可能地提高β－ＬｇＢＢ型个体的比例。     

外源淀粉酶和金属离子对烘烤中烤烟‘KRK26’上部叶淀粉酶比活力和淀粉降解的效应

目的1探究外源淀粉酶和ca26‘、Mn2＋、K＋对烘烤中烤烟‘KRK26’上部叶淀粉酶比活力和淀粉降解的效应。【方法】用分光光度法检测烟叶的淀粉酶比活力和淀粉含量。【结果】8U／g用量的外源α-淀粉酶能在变黄和定色阶段提高烟叶α-淀粉酶的比活力,但在干筋阶段不能,80 U／g用最的外源β．淀粉酶类似地能在变黄阶段和定色早期提高烟叶β．淀粉酶的比活力：烟叶淀粉的降解被外源α-或β-淀粉酶强化。前者的效果优于后者的。1．50mg／ml Ca2＋主要因其对烟叶α-淀粉酶的强化效应而强化烟叶总淀粉酶的比活力,并促进的淀粉降解。4mmol／LMn2＋在变黄至定色早期抑制烟叶α-淀粉酶、在变黄至定色晚期抑制烟叶β-和总淀粉酶,但在定色晚期至干筋早期促进烟叶α-淀粉酶、在于筋晚期促进娴叶β-和总淀粉酶。同时,Mn2＋在变黄阶段妨碍淀粉降解,但在定色早期至于筋期促进。1mg／ml K＋在变黄阶段提很高烟叶α-、β-。和总淀粉酶比活力、但在定色早期至于筋晚期降低,并总是抑制淀粉降解。【结论】适当浓度的外源淀粉酶和Ca2＋能用于在烘烤前处理烤烤叶片以促进叶片淀粉在烘烤中的降解。     

海南坡鹿MD2cDNA的克隆及其生物信息学分析

以海南坡鹿外周血白细胞总RNA为模板,利用RT-PCR技术,获得海南坡鹿MD2全长cDNA,并对其进行较系统的生物信息学分析,内容包括序列特征分析、同源性分析、编码蛋白质理化性质及结构预测.结果表明:海南坡鹿MD2的CDS序列长度为486 bp,编码160个氨基酸,与黄牛、人、欧洲兔、褐家鼠的核苷酸序列同源性分别为98...