二色胡枝子遗传转化中抗生素浓度优化研究

探讨了卡那霉素、G418和头孢霉素3种抗生素对二色胡枝子不同培养阶段外植体生长、分化和生根的影响及对农杆菌的抑菌效果.确立了由农杆菌介导的二色胡枝子遗传转化研究中抗生素转化体的筛选浓度和头孢霉素对菌株的抑菌浓度.结果表明:在子叶节转化筛选阶段,卡那霉素和G418的适宜浓度分别为20 mg/L和7.5 mg/L;在抗性芽增殖培养阶段.卡那霉素和G418浓度分别为150 mg/L和15.0 mg/L;在生根阶段,卡那霉素和G418浓度分别为20 mg/L和5.0mg/L.而头孢霉素在各阶段适宜浓度为0～300 ms/L;头孢霉素对农杆菌LBA4404和C58抑制浓度为200～300 mg/L时效果理想.     

抗生素对剑麻愈伤组织生长和植株再生的影响

研究卡那霉素、潮霉素、头孢霉素和羧苄青霉素对剑麻愈伤组织生长、不定芽分化及生根的影响,并确定抑制农杆菌生长的头孢霉素、羧苄青霉素的质量浓度。结果表明:潮霉素明显抑制剑麻愈伤组织生长和不定芽分化,卡那霉素次之,头孢霉素和羧苄青霉素相对较小;4种抗生素均能抑制剑麻生根,其抑制效果依次为头孢霉素>卡那霉素>羧苄青霉素>潮霉素。头孢霉素和羧苄青霉素的浓度大于200 mg/L时,农杆菌生长完全被抑制。在筛选剑麻转化体时,卡那霉素和潮霉素的使用浓度分别以100、50 mg/L为宜,羧苄青霉素和头孢霉素的使用浓度均为200 mg/L。     

抗生素对根癌农杆菌的抑菌作用及对新西伯利亚黑杨组培叶片再生的影响

以新西伯利亚黑杨(Populus nigra×Populus pyramidalis)为试材,探讨了不同质量浓度的头孢霉素、羧苄青霉素、头孢曲松钠和头孢唑啉钠对叶片不定芽分化的影响,并利用4种不同质量浓度的抗生素对农杆菌EHA105的抑菌效果进行了分析,确立了由农杆菌介导的新西伯利亚黑杨遗传转化中最佳抑菌抗生素是头孢霉素和羧苄青霉素,抑菌的适宜质量浓度为300～400mg·L-1.此外还研究了不同质量浓度的G418、卡那霉素和新霉素对新西伯利亚黑杨叶片不定芽分化及组培苗生根的影响,确定了各阶段筛选转化体的G418、卡那霉素和新霉素的适宜质量浓度,即叶片转化筛选培养时,G418质量浓度为3～4mg·L-1、卡那霉素质量浓度为30～40mg·L-1、新霉素质量浓度60～80mg·L-1;在抗性芽生根培养时,G418质量浓度为3～4mg·L-1、卡那霉素质量浓度为20～30mg·L-1、新霉素质量浓度60～80mg·L-1.     

不同抗生素对紫雨桦离体叶片愈伤组织诱导的影响

以紫雨桦无菌叶片为试材,研究头孢霉素、头孢曲松钠、羧苄青霉素和特美汀4种不同浓度的抑菌抗生素对紫雨桦离体叶片愈伤组织诱导的影响,分析4种抑菌抗生素对农杆菌 EHA105（pCHS）的抑菌效果。结果表明,抗生素是头孢霉素、头孢曲松钠、特美汀比羧苄青霉素抑菌效果好,其中头孢霉素和头孢曲松钠的适宜浓度范围为200～400 mg／L、特美汀为400～800 mg／L。30～40 mg／L的卡那霉素、15～20 mg／L的G418或潮霉素还可用于紫雨桦为受体的遗传转化中筛选转化体。     

抗生素对高粱愈伤组织诱导和生长的影响

用羧苄青霉素等抗生素进行抑菌试验,以羧苄青霉素和头孢霉素的抑菌效果较好.头孢霉素对高梁愈伤组织的毒性表现出比羧苄青霉素大.浓度低于500 mg/L羧苄青霉素对高梁愈伤组织的生长起促进作用;而分化率随着羧苄青霉素浓度的提高而下降.在农杆菌介导高梁遗传转化时,选用羧苄青霉素是合适的,浓度以250 mg/L为宜.高梁愈伤组织对潮霉素的反应比卡那霉素更敏感,高梁不同基因型愈伤组织对卡那霉素和潮霉素的反应在褐化(死亡)率上表现不同.在以潮霉素作为抗性筛选标记时,选择压以50～75 mg/L为宜.     

不同抗生素对刺槐遗传转化受体系统的影响

本试验研究了卡那霉素(Kana)、头孢霉素(Cef)、氨苄青霉素(Amp)、羧苄青霉素(Carb)、红霉素(E)对刺槐形成层为外植体的遗传转化受体系统的影响。结果表明:刺槐形成层诱导愈伤时Cef对受体材料伤害最小,抑菌效果最好,浓度为200 mg/L时能完全抑制农杆菌生长;用Kana作为刺槐转基因植株的筛选,刺槐形成层愈伤组织分化时选择剂浓度为100~125 mg/L最佳,生根培养时选择剂浓度为75 mg/L最佳。     

油菜遗传转化体系中卡那霉素浓度的筛选及抑菌剂的选择

利用根癌农杆菌(Agribacteriumtumefaciens)介导的下胚轴转化方法,将一抗病基因转化甘蓝型油菜.在遗传转化体系的建立过程中进行了卡那霉素(Km)浓度的筛选及抑菌剂的选择,以确定合适的选择压力及适宜的杀菌剂.试验结果表明:选择培养基中附加25 mg/L Km较适宜;抗性苗筛选过程中羧苄青霉素(Cb)对芽苗分化影响较小,且在500 mg/L时能够很好的抑制农杆菌的过度生长.生根培养基中添加头孢霉素(Cef)和Cb对根分化的影响没有明显差异.     

抗生素对细枝木麻黄愈伤组织再生及农杆菌生长的影响

以细枝木麻黄3个无性系水培苗作为材料,研究了硫酸卡那霉素(kanamycin sulfate,Km)对细枝木麻黄愈伤组织诱导、增殖和芽分化的影响,以及头孢霉素(cefotaxime,Cef)、羧苄青霉素(carbenicillin,Cab)和氨苄青霉素(ampicillin,Amp)对农杆菌的抑制效果。结果表明,Km对细枝木麻黄愈伤组织诱导适宜的选择压力是20mg/L,Km选择性筛选愈伤组织增殖的适宜质量浓度为40mg/L,愈伤组织芽分化的选择压力是40～50mg/L。在抗生素抑菌效果方面,Cef质量浓度为200mg/L、Cab300mg/L和Amp500mg/L能完全抑制农杆菌的生长。综合比较,对细枝木麻黄遗传转化研究最理想的抑菌剂是Cef,使用质量浓度低且能有效抑制根癌农杆菌的生长。     

菊花遗传转化受体系统的研究

探讨了不同抗生素对菊花品种“玉人面”叶片不定芽分化和无菌苗生长的影响,并对羧卞青霉素、头孢霉素的抑菌效果及菌株LBA4404、EHA105对菊花的侵染性进行了研究,建立了“玉人面”的遗传转化受体系统。结果表明:叶片不定芽再生、无菌苗生根筛选的抗生素和临界耐受浓度分别为10 mg/L的G418、20 mg/L的卡那霉素;250 mg/L的抑菌抗生素不影响叶片外植体不定芽再生,两种抑菌抗生素均影响菊花苗的生长,总体规律是随抗生素浓度的递增,菊花苗生根数量递增,根长、苗高递减;两种抑菌抗生素均能很好的抑制农杆菌的生长并对“玉人面”有一定的侵染性。     

3种抗生素对尾巨桉愈伤组织诱导及植株再生的影响

【目的】研究潮霉素、卡那霉素和头孢霉素对尾巨桉愈伤组织诱导、不定芽分化及生根的影响,确立抑制农杆菌生长的头孢霉素质量浓度。【方法】以尾巨桉无菌苗茎段为外植体,先后接种于添加不同质量浓度抗生素的愈伤组织诱导培养基、不定芽诱导培养基以及生根培养基上,统计愈伤组织诱导率、不定芽诱导率和不定芽生根率,观察头孢霉素对农杆菌生长的影响。【结果】(1)培养基中的潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,200 mg/L时,尾巨桉外植体的愈伤组织诱导率分别为6.7%,12.1%和26.7%;(2)潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,250 mg/L时,不定芽分化受到明显抑制,不定芽诱导率分别仅有2.6%,10.2%和7.6%;(3)潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,250 mg/L时,不定芽生根困难,生根率分别为10.2%,16.2%和10.1%;当头孢霉素质量浓度≥200 mg/L时,农杆菌生长被完全抑制。【结论】尾巨桉对不同抗生素的敏感性存在差异,在尾巨桉遗传转化过程中,抗性愈伤组织与不定芽诱导的潮霉素适宜质量浓度为10 mg/L,卡那霉素为20 mg/L;生根诱导适宜的潮霉素和卡那霉素的质量浓度分别为15 和25 mg/L;抑制农杆菌生长的头孢霉素较适宜的质量浓度为200 mg/L。     

4种化合物对离体培养二色胡枝子组织分化的影响

以BADH基因为选择标记基因进行遗传转化最适宜的选择剂、抑菌剂种类和浓度,通过不同浓度NaCl、甜菜碱醛、PEG及甜菜碱醛和NaCl的不同组合等进行胡枝子子叶节分化,茎段增殖以及生根培养,发现NaCl和甜菜碱醛都能抑制二色胡枝子的子叶节分化、茎段增殖和生根,可作为遗传转化中的选择剂。培养基中添加0.8g/L NaCl就能完全抑制二色胡枝子子叶节和茎段增殖,可作为遗传转化过程中子叶节和茎段增殖阶段的选择剂浓度。培养基中添加0.5g/L NaCl能抑制生根,适合作为离体培养生根阶段的选择剂浓度。随着培养基中甜菜碱醛浓度的增加,子叶节分化能力下降,当甜菜碱醛达到1.5g/L时子叶节不再分化,这可作为以甜菜碱醛为选择剂时子叶节分化阶段的最佳筛选。培养基中同时添加NaCl和甜菜碱醛时,NaCl 0.7g/L+甜菜碱醛0.3g/L就抑制了离体培养过程中茎段增殖和生根,比较适合二色胡枝子离体培养时茎段增殖和生根的筛选浓度。对头孢霉素的研究发现:培养基中添加200~300mg/L头孢霉素对离体培养的二色胡枝子子叶节分化影响不大,培养基中添加100mg/L的头孢霉素对离体培养的二色胡枝子茎段增殖和生根无显著影响。     

农杆菌介导转化甜菜影响因素的研究

[目的]以甜菜无菌苗的叶柄为外植体材料,对农杆菌转化条件和方法进行较为系统地比较研究,以期建立一种转化频率高、稳定性好、通用性较强的甜菜遗传转化技术体系.[方法]对影响农杆菌介导的不同因素分别进行比较试验.[结果]对甜菜叶柄进行培养后用不同菌液浓度OD600=0.3～0.4的农杆菌感染8～10 min,脱菌处理后接入卡那霉素浓度为100 mg/L、头孢霉素浓度为500 mg/L的选择培养基中进行筛选,获得的抗性芽较多,抗性芽分化频率可达到34.3;.[结论]初步建立了一种转化频率高、稳定性好、通用性较强的甜菜遗传转化技术体系,通过植物转基因技术为选育高产、优质、广谱抗病的甜菜品种奠定基础.     

农杆菌介导的吴屯杨遗传转化体系的建立

[目的]建立以农杆菌介导的吴屯杨遗传转化体系。[方法]以吴屯杨无菌苗叶片为遗传转化受体材料,采用农杆菌介导的转化方法,结合草甘膦(PPT)筛选,探讨影响吴屯杨叶片遗传转化效率的重要因素。[结果]吴屯杨叶片分化不定芽和生根的草甘膦临界浓度分别为0.8、0.6 mg/L。对预培养2～3 d的叶片,用OD600=0.4～0.5的菌液侵染10～15 min、共培养培养基中添加乙酰丁香酮(AS)200μmol/L、共培养3 d可有效提高吴屯杨遗传转化效率。对成活的转基因植株进行PCR检测,结果表明目的基因已转入吴屯杨中。[结论]该研究为进一步加强吴屯杨分子育种研究奠定了坚实的基础。     

4种化合物对离体培养二色胡枝子组织分化的影响(英文)

以BADH基因为选择标记基因进行遗传转化最适宜的选择剂、抑菌剂种类和浓度,通过不同浓度NaCl、甜菜碱醛、PEG及甜菜碱醛和NaCl的不同组合等进行胡枝子子叶节分化,茎段增殖以及生根培养,发现NaCl和甜菜碱醛都能抑制二色胡枝子的子叶节分化、茎段增殖和生根,可作为遗传转化中的选择剂。培养基中添加0.8 g/L NaCl就能完全抑制二色胡枝子子叶节和茎段增殖,可作为遗传转化过程中子叶节和茎段增殖阶段的选择剂浓度。培养基中添加0.5 g/L NaCl能抑制生根,适合作为离体培养生根阶段的选择剂浓度。随着培养基中甜菜碱醛浓度的增加,子叶节分化能力下降,当甜菜碱醛达到1.5 g/L时子叶节不再分化,这可作为以甜菜碱醛为选择剂时子叶节分化阶段的最佳筛选。培养基中同时添加NaCl和甜菜碱醛时,NaCl 0.7 g/L+甜菜碱醛0.3 g/L就抑制了离体培养过程中茎段增殖和生根,比较适合二色胡枝子离体培养时茎段增殖和生根的筛选浓度。对头孢霉素的研究发现:培养基中添加200~300 mg/L头孢霉素对离体培养的二色胡枝子子叶节分化影响不大,培养基中添加100mg/L的头孢霉素对离体培养的二色胡枝子茎段增殖和生根无显著影响。     

抗生素对苹果离体叶片再生的影响

以昌红和姬神2个苹果品种无菌苗的离体幼叶为试材,分别接种在附加不同浓度卡那霉素（Kan,0、5、10、15、20、30、40和50mg／L）、头孢霉素（Cef,100、200、400和600mg／L）和羧苄青霉素（Carb,100、200、400和600mg／L）的MS＋TDZ1．0mg／L＋NAA0．5mg／L培养基上,暗培养14d后转移到光下培养,30d后进行再生指标统计,分析不同浓度Kan、Cef和carb对苹果离体叶片不定芽再生的影响。结果表明：Cef浓度为600mg／L、Carb浓度为400mg／L时完全抑制供试品种叶片的再生,Carb对昌红和姬神离体叶片抑制再生的作用比Cef强烈;昌红苹果对Kan非常敏感,Kan浓度为10mg／L时即能极显著抑制不定芽的再生,浓度为20mg／L时不定芽白化而不能正常生长。以苹果离体叶片的高频再生系统作为基因转化的受体系统,Kan适宜选择浓度为20mg／L。     

农杆菌介导法将bFGF基因转入木立芦荟的初步研究

利用农杆菌介导法将bFGF基因导入木立芦荟中,通过对农杆菌介导芦荟遗传转化影响因素的分析,建立了优化的芦荟转化体系.用继代培养获得的粗壮的芦荟单株茎段作为转化外植体,以OD=0.55～0.68的EHA105农杆菌工程菌液侵染25min,在MS+蔗糖10g/L+100～mol/L乙酰丁香酮的共体培养基上培养3d,在MS+...     

抗生素对玉米愈伤组织生长和分化的影响

以继代培养的玉米胚性愈伤组织为材料,研究了不同质量浓度的卡那霉素(Kan)、遗传霉素(G418)和头孢霉素(Cef)对胚性愈伤组织继代生长和分化的影响.结果表明:(1)当质量浓度大于3 mg.L-1时,Kan对愈伤组织的生长具有一定抑制作用,其抑制作用在不同继代次数和不同基因型间具有明显差异;Kan明显降低了愈伤组织的分化出苗率;(2)G418具有显著抑制愈伤组织生长的负向效应.当G418的质量浓度大于25 mg.L-1时,愈伤组织就丧失了再生能力;(3)Cef质量浓度为100 mg.L-1时,对愈伤组织的生长无显著影响,随着质量浓度的增加,对愈伤组织的生长开始具有抑制作用,Cef对愈伤组织生长的抑制作用具有一定的累加效应.Cef对愈伤组织的分化再生能力具有一定的正向效应,但其临界质量浓度在基因型间和继代次数间存在差异.     

胡萝卜遗传转化体系的建立

以新黑田五寸胡萝卜下胚轴为外植体,研究对胡萝卜抗性植株的影响因素及目的基因的整合情况,建立了较为完善的转化体系。实验结果表明:以胡萝卜下胚轴为材料,用苗龄7d,共培养2d,浸染15min的体系,Kan抗性芽的分化频率可达52%。获得抗性愈伤培养基:B5+0.1mg/L2,4-D+0.2mg/LKT+75mg/LKan+500mg/LCef,抗性芽诱导培养基:B5+100mg/LKan+500mg/LCef;抗性植株生根培养基:B5+0.1mg/LIBA+75mg/LKan+300mg/L:Cef;对转基因植株进行了PCR分子学检测,初步证明外源基因已整合到胡萝卜基因组中。