贝克曼6300型氨基酸分析仪用茚三酮反应液的研究

本文报道了贝克曼6300型氨基酸分析仪用试剂国产化研究的另一部分—茚三酮反应液的研究。茚三酮反应液用作分析柱后氨基酸的显色试剂,以便检测器对各种氨基酸进行检测。研究结果表明,自配茚三酮反应液的显色灵敏度、化学稳定性、色谱基线情况等主要性能指标已接近或达到进口试剂水平。     

植物样品中游离氨基酸总量测定方法的改进

本文根据氨基酸与茚三酮显色反应的原理，对传统测定植物鲜样游离氨基酸总量的方法作了改进。用沸水浴处理植物样品提取液可以破坏样品中抗坏血酸，使得样品提取液与制作氨基酸标准曲线反应液的抗坏血酸完全控制在同一水平上，避免了样品与标准曲线反应液由于抗坏血酸含量不同造成的误差。另外适当提高反应体系抗坏血酸的浓度可以提高反应灵敏度。     

茚三酮法测定茶叶游离氨基酸总量研究

鉴于茚三酮法测定游离氨基酸总量不够稳定,本文对茚三酮法测定茶游离氨基酸的显色反应时间与氨基酸浓度因素进行了条件优化,并考察了方法的准确度与精密度。结果表明,将200μL的2×p H 5.6的缓冲液、200μL水或茶叶水提取液(茶水比1∶250,沸煮30 min)和400μL茚三酮溶液显色体系均匀混合,沸煮结束后立即用自来水充分冷却并加入4.8 m L去离子水,于570 nm处测定吸光值,所获得的结果稳定可靠,适宜作为茶叶中游离氨基酸总量的测定条件。     

苯酚-硫酸法测定葡萄多糖含量

用苯酚-硫酸法测葡萄多糖含量，研究显色温度、显色时间、苯酚及硫酸用量对葡萄多糖含量测定的影响。以此为基础，采用正交试验法确定最佳反应条件为：显色温度为沸水，显色时间为15min，苯酚用量为1．0ml，硫酸用量为8．0ml。     

淫羊藿药渣总氨基酸水解液分析及其制备工艺优化

为了建立适用于淫羊藿药渣总氨基酸分析的快速定量方法,并提高其利用率,采用茚三酮显色法对其进行定量分析,同时以高效液相色谱法与凯氏定氮法测定值作为对比参照,通过响应面法优化淫羊藿药渣总氨基酸水解液制备工艺。结果表明,茚三酮显色法测得淫羊藿药渣中总氨基酸含量为6. 12%,介于其他2种方法测定值之间;淫羊藿药渣总氨基酸制备工艺优化条件如下:盐酸浓度为6. 0 mol/L,水解时间为23. 4 h,水解温度为115℃。由结果可以看出,茚三酮显色法适用于淫羊藿药渣中总氨基酸的快速定量分析,通过响应面法优化其制备工艺后,氨基酸提取率为6. 50%,有效提高了淫羊藿药渣资源的利用率。     

大豆蛋白水解物水解度测定的研究

利用茚三酮显色法及甲醛滴定法对大豆蛋白水解物的水解度进行测定并进行了结果比较，结果表明二法是一致的．蛋白质水解度的测定将为蛋白质酶水解程度的控制提供必要的方法．     

苯酚-硫酸法测定多糖含量显色条件的优化与改进

在单因素试验基础上,选择对多糖含量测定结果产生显著影响的4个显色因素:6%苯酚用量、浓硫酸用量、反应温度、水浴显色时间进行正交试验,获得传统苯酚-硫酸法测定多糖含量的最佳显色条件是1 m L 6%苯酚溶液、7 m L浓硫酸、4℃反应温度、30 min水浴显色。改进后的多糖含量测定的显色条件即按照1∶7的比例直接配制苯酚-硫酸显色液,在4℃条件下加入样品溶液,在90℃水浴进行30 min显色后,于490 nm处测定吸光度,计算多糖含量。通过传统最佳显色方法的验证试验和改进后的显色方法测定多糖含量的结果比较,表明改进后的方法具有操作简便、精密度高、准确度高、实用性强的优势。     

烟草中淀粉含量测定

采用碘显色法测定烟草中的淀粉含量,并考察萃取方式、提取料液比、加碘量等因素对测定结果的影响。结果表明,料液比为1∶120,超声时间为25min,提取时间为30min时测定结果较理想;方法的回收率大于97%,相对标准偏差小于3%。     

比色法测定β-苯丙氨酸含量的研究

[目的]建立快速、准确的β-苯丙氨酸含量定量方法。[方法]依据α-氨基酸与茚三酮显色反应的原理,对比色法定量检测β-苯丙氨酸进行研究,探讨β-苯丙氨酸浓度、pH值、反应温度和时间对显色反应的影响。[结果]当β-苯丙氨酸浓度在480~620μg/ml时,显色反应颜色变化明显且显色较稳定,吸光值控制在0.05~1.00;当pH值在6~10时,显色反应颜色变化明显;当温度为90℃时,加热20 min左右即有明显的颜色变化。α-氨基酸与茚三酮显色反应最适的反应条件为pH值6.0、温度90℃、反应时间25 min。在480~620μg/ml范围内,β-苯丙氨酸含量与吸光值呈良好的线性相关关系。[结论]该方法具有操作简便、快速等特点,适用于一般实验室的样品分析及β-苯丙氨酸转化过程中的产品检测。     

油菜蜂花粉中游离氨基酸含量的测定

用双光束紫外分光光度计测定油菜蜂花粉中游离氨基酸的含量.在该过程中,花粉用43°青稞白酒提取,提取液先用氢氧化钡沉淀除去色素和蛋白质,再用水合茚三酮显色,通过双光束紫外分光光度法测氨基酸含量.结果表明:在相同质量的花粉中,未破壁油菜花粉中游离氨基酸的含量为1.87％～4.91％,破壁花粉中游离氨基酸的含量为2.46％～8.26％.该方法中的仪器易于操作,测定结果准确可靠.     

尿素检测方法建立及方法学考察

[目的]通过紫外分光光度法建立氮肥中尿素含量的测定方法。[方法]利用紫外分光光度计,根据Ehrlich反应,二甲氨基苯甲醛可以与含氮的有机化学物发生显色反应,此物质在403 nm处有最大吸收峰,颜色的深浅与测定的尿素含量呈正比,因此通过测定反应液在403 nm处的吸光值来确定尿素溶液中尿素含量。[结果]得到尿素检测标准曲线为y=0.004 3x+0.009 9(R2=0.999 2),尿素浓度在3.75～210μg/ml之间呈良好线性关系,平均回收率为96.83%,RSD=0.2%。[结论]该方法准确度、精密度良好,可以用来测定尿素的含量。     

新鲜蔬菜中有机磷农药残留快速检测技术的研究

[目的]开发新鲜蔬菜中有机磷农药残留的快速检测技术。[方法]根据有机磷农药抑制胆碱酯酶活性的原理,开发了一种快速检测新鲜蔬菜中有机磷农药残留的技术,由复合指示剂颜色变化和反应液△pH值进行定量,通过单因素试验和正交试验确定最佳反应条件。[结果]复合指示剂的配比为溴百里香酚蓝钠盐∶石蕊指示剂=2∶3。马血清的添加量对△pH值的影响最大,其次为氯化乙酰胆碱浓度,温度的影响最小。最佳反应条件为:马血清0.8 ml,1.0%氯化乙酰胆碱,温度33℃,该条件下,敌敌畏、辛硫磷、敌百虫的最低检出限分别为0.06、1.00、0.50 mg/kg。[结论]该农药残留检测技术方便、快速,在有机磷农药残留的快速测定中有广泛的应用价值。     

农产品中痕量钒的测定研究

[目的]建立一种测定痕量钒（V）的新方法。[方法]在柠檬酸介质中，利用KBrO，氧化柠檬黄褪色反应测定痕量钒。首先绘制吸收曲线，选择测定波长，然后研究反应的最佳条件包括柠檬酸用量、KBrO，溶液和柠檬黄溶液用量以及反应的温度与时间，确定线性范围及检出限，测定表观活化能，并研究共存离子的影响。[结果]选择测定波长为430nm。在柠檬酸介质中，钒对KBrO，氧化柠檬黄具有强烈的催化作用。反应的最佳条件为柠檬酸用量3．5mg／L,KBrO3，溶液2．5ml，柠檬黄2．5mg／L，反应温度93℃。反应时间16min。测定痕量钒方法的线性范围为0～40μg／L，方法检出限为3．8rig／ml，RSD为2．36％。[结论]采用该方法测定农产品中痕量钒具有灵敏度较高、抗干扰离子能力强、操作简便的特点。     

新孢子虫病P43蛋白质(包涵体)的纯化及rELISA方法的建立

为建立新孢子虫病间接酶联免疫吸附试验(rELISA)检测方法,先诱导表达GST-P43包涵体蛋白,并对其进行提取、纯化、复性处理,再以复性后的P43蛋白作为抗原,优化rELISA检测方法。结果表明,这种包涵体处理方法,可使其纯度达到87%,复性后的目的蛋白具有良好的免疫活性。通过对rELISA各反应条件的优化,确定了最佳反应条件,血清稀释倍数为1∶100,抗原包被浓度为7μg/mL,封闭液为0.5%脱脂乳,酶标抗体的工作浓度为1∶4000,酶标抗体作用时间为1 h,底物作用时间25 min。且该方法不与弓形虫和布鲁氏菌病发生交叉反应。     

GC-TOFMS外标法测定烟丝中烟碱含量

[目的]探讨GC-TOFMS外标法测定烟丝中烟碱含量的优选条件,建立一种快速测定烟碱的方法。[方法]采用GC-TOFMS外标法测定烟丝中烟碱含量,分别对萃取溶剂、萃取方式、时间进行优化。[结果]GC-TOFMS外标法测定烟丝中烟碱的最优溶剂是45 ml乙醇+5 ml 0.1%乙酸水溶液,振荡萃取,时间45 min。烟碱含量与峰面积比具有良好的线性关系,其相关系数r=0.996 6,烟碱的RSD为1.17%～1.54%(n=6),平均回收率为98.59%～101.03%。[结论]该方法准确、可靠,运用该方法能快速测定烟丝中的烟碱。     

拟南芥AtCOR15a转化烟草及后代抗寒性研究

【目的】研究拟南芥AtCOR15a基因的抗寒功能。【方法】构建pCAMBIA1301-COR15a的植物表达载体,利用农杆菌介导的叶盘法转化烟草,通过抗生素筛选和PCR检测获得转基因烟草。低温胁迫后,利用蒽酮法和酸式茚三酮法测定转基因烟草后代与野生型烟草的可溶性糖和脯氨酸含量,同时观察其抗寒能力。【结果】转基因烟草后代可溶性糖含量和脯氨酸含量均比野生型烟草有所提高,并在第5 d达到峰值。低温处理后转基因烟草后代能正常生长,而野生型烟草则全部死亡。【结论】生理生化指标的测定发现,可溶性糖含量与脯氨酸含量的变化趋势与烟草的抗寒性呈正相关,AtCOR15a基因导入烟草中可以明显提高烟草对低温胁迫的抵抗力。     

核桃壳多糖的含量测定

[目的]测定核桃壳多糖的含量。[方法]以葡萄糖为对照品,采用苯酚-硫酸法在490 nm测定核桃壳中多糖含量。[结果]最佳显色条件为5%苯酚1.0 ml,浓硫酸6.0 ml,反应温度65℃,反应时间为30 min,平均回收率为101.9%,RSD为1.98%,线性范围10～90μg/ml。[结论]该方法简便、准确、重现性好,适用于核桃壳多糖的含量测定。     

烟草及卷烟烟气粒相物中游离氨的测定

卷烟主流烟气中的氨会刺激人体的眼及呼吸系统,长期吸入会对人体造成较严重的危害。该文设计了水蒸气蒸馏处理烟草及滤片,用稀硫酸溶液吸收,基于靛酚蓝反应的分光光度法测定烟草及卷烟烟气粒相物中游离氨的定量分析方法。考察了显色剂的浓度、显色时间、温度、催化剂用量等测试条件的影响。同时评价了该方法的线性范围、灵敏度、精密度等。结果表明:检测限为0.004mg/L,烟草RSD为3.4%,烟草加标回收率在99.8%～108.6%,空白加标回收率在96.7%～108.8%,卷烟烟气粒相物RSD为4.1%,烟气粒相物加标回收率在81.4%～105.6%。     

苯酚-硫酸法测定人参茎叶多糖的条件研究

[目的]优选苯酚-硫酸法测定人参茎叶多糖含量的因素条件。[方法]采用紫外分光光度法测定人参茎叶多糖的含量,并采用正交试验优选测定的条件。[结果]苯酚-硫酸法测定人参茎叶多糖含量的最佳测定波长为485 nm;苯酚-硫酸法的最佳显色条件为A1B2C1,即:浓度6%苯酚的体积为1.0 ml,浓硫酸的体积为6.0 ml,反应时间为25 min;粗多糖含量在10～70μg/ml之间与吸光度有很好的线性关系,回归方程为Y=0.013 2X-0.085 7,相关系数R为0.999 6;试验方法的回收率为100.36%,RSD为1.26%,显色液在120min内稳定性良好。[结论]该方法准确可靠,为人参茎叶的进一步开发利用提供了依据。