松墨天牛在松树枯萎中的作用

本文对松树枯萎类型和引起松树枯萎的主要因子进行了研究。结果表明，枯萎松树根据木质部内线虫种类和媒介昆虫种类在宁波可分为４个类型：松墨天牛×松材线虫，松墨天牛×拟松材线虫，松墨天牛×其他线虫和松墨天牛×无线虫。松树枯萎数量与气候条件有关。夏季高温干旱，枯萎松树数量明显增加。引起松树枯萎的主要生物因子是松墨天牛，处于逆境的松林，只要有１头性成熟雌成虫侵入，松树枯萎数量就会以１：９的几何级数逐年增加。松材线虫在松墨天牛参与下能引起感病的黑松快速死亡，但与松树枯萎数量无关。     

松材线虫病濒死树急救技术与救活机理

为了探讨被松材线虫病危害的濒死松树逆转的可能性，在松材线虫病发生区，当夏秋季松树表现出感病症状时，选择濒死松树，镜检松材线虫。确诊后，采用杀线虫剂和杀虫剂输液急救。试验表明，联合使用杀线虫剂和杀虫剂，可使感病的马尾松急救成活率达８３．３％；感病的黑松成活率达到７５．０％。从急救成活可知，松树枯萎是松材线虫和松墨天牛双重作用结果。用药物清除树体内松材线虫和松墨天牛幼虫是濒死松树急救成活的基本机理。感     

松材线虫及携带细菌对黑松复合的侵染

从不同松树上分离松材线虫、拟松材线虫、滑刃线虫和小杆线虫,并从松材线虫和小杆线虫体上分离细菌,将线虫无菌化处理后与从线虫体上分离到的荧光假单胞杆菌、产气肠杆菌混合接种无菌黑松苗和愈伤组织。结果表明,单独接种无菌线虫或细菌不能使黑松致病,无菌松材线虫、无菌拟松材线虫只有与有毒性的荧光假单胞杆菌混合接种时才能使黑松无菌苗和愈伤组织发病,细菌通过线虫携带在树体内传播扩散,使松树致病。研究进一步证明了线虫和细菌在松材线虫病致病过程中起协同作用。     

松材线虫携带的一株细菌分离及其致病性

从患松材线虫病致死的黑松和马尾松病树组织及松褐天牛虫体中分离的松材线虫虫体上均分离到同一细菌菌株 .经致病性、革兰氏染色、菌体形态、培养性状和生理生化反应等测定 ,将致病菌株鉴定为洋葱伯克霍尔德氏菌 .ATBExpression自动鉴定仪的鉴定结果与上述结果相同 .在分离过程中该菌出现频率较高 ,说明是松材线虫携带的主要细菌 .人工接种试验结果显示 ,用无菌线虫或洋葱伯克霍尔德氏菌菌株分别接种的黑松无菌苗不发病 ,而用二者混合接种则使无菌苗迅速发生褐变和萎蔫 .林间利用 6年生黑松进行的接种试验结果证明 ,用无菌松材线虫和洋葱伯克霍尔德氏菌菌株混合接种的黑松与使用野生松材线虫接种的黑松都 10 0 %的患病 .单独用无菌松材线虫接种有 4株发病 ,6株没有发病 .其中发病黑松中不仅分离到了松材线虫 ,也分离到了细菌 ,而没有患病的 6株黑松中仅分离到少量松材线虫 .这说明在野外条件下接种的松材线虫可以通过某种途径重新获得细菌 ,导致了接种的黑松患病 .而接种后无菌松材线虫没能获得细菌的那些黑松就没有患病 ,说明单独无菌松材线虫不能使黑松患病 .这些结果说明松材线虫携带的细菌与松材线虫的致病性有关 .因此 ,可以把松材线虫病看作是线虫和细菌共同侵染引起的一种植物复合侵染病害 .在这     

不同松材线虫虫株致病性的比较分析

松材线虫萎蔫病是由松材线虫[Bursaphelenchus xylophilus（Steiner＆Buhoror）Niclde]引起的松属树种上一种毁灭性的病害，目前对该病的致病机理尚不十分清楚。本研究采用松材线虫的6个虫株和拟松材线虫的1个虫株对1年生黑松苗进行致病性测定。结果表明，1、6号虫株致病性较强；2、5号虫株致病性较弱；3号和4号致病性居中。6个虫株的松材线虫最终都能导致黑松死亡，拟松材线虫不具有致病性。     

松材线虫效应因子基因筛选及Bx-Hh-grl功能研究

  目的  通过对松材线虫效应因子基因的克隆和功能研究,揭示Bx-Hh-grl对松材线虫致病性的作用,为防治松材线虫提供理论依据。  方法  用松材线虫Bx1022株系接种黑松,20 d后提取线虫总RNA进行转录组测序,将该转录组设为松材线虫植食阶段转录组。提取由灰葡萄孢（Botrytis cinerea）培养的Bx1022的总RNA进行转录组测序,将该转录组设为菌食阶段转录组。比较分析两个转录组,筛选到差异表达基因Bx-Hh-grl。对Bx-Hh-grl编码蛋白质的跨膜结构域和信号肽进行预测。利用原位杂交检测Bx-Hh-grl表达部位。应用RNAi技术干扰Bx-Hh-grl表达以探究Bx-Hh-grl对松材线虫致病性的作用。通过Q-PCR验证,确定RNAi效果显著。将经RNAi处理的松材线虫接种3年生黑松枝条,以未经处理的松材线虫（CK组）和ddH₂O（Mock组）处理的黑松作为对照,比较黑松发病情况进而比较不同处理后松材线虫的致病性差异。  结果  筛选出植食阶段与菌食阶段转录组差异表达基因Bx-Hh-grl,其编码蛋白质具有跨膜结构域和信号肽。原位杂交试验结果显示Bx-Hh-grl在松材线虫食道腺表达,符合效应因子基因特征。Q-PCR结果显示经RNAi处理后的松材线虫Bx-Hh-grl表达量下调,RNAi处理效果显著。接种实验表明,Bx-Hh-grl-RNAi组显症的时间明显晚于CK组,Mock组黑松一直保持健康状态。  结论  Bx-Hh-grl是与松材线虫致病相关的效应因子基因。明确Bx-Hh-grl功能有利于进一步了解松材线虫致病机理,为降低松材线虫危害,防治松材线虫奠定理论基础。      

不同松材线虫群体对黑松的致病性测定

测定了中国、日本、加拿大的松材线虫（Bursaphelenchus xylophius)群体3－4年生黑松的致病性，发现它们的致病力有明显分化。松材线虫不同群体致黑松的死亡率为0－87．5％，RHS系数为0－110不等。中国松材线虫群体致病力高于日本和加拿大群体，其中以中国的BxCN1,BxCN3,BxCSC和BxCZD4个群体致病力最强，致枯率均为87．5％，RHS系数均大于90。在致枯率为87．5％的6个群体中，南京的群体BxCN3平均死亡天数量短（38d)。在全部测试群体中，Bx-CZD的死亡历期最短（14d)。试验发现接种松材线虫的松苗有带虫不表现症状的现象，这对于病害的传播非常重要。     

3个株系松材线虫电镜扫描比较研究

松材线虫病是一种毁灭性的森林病害，不同地区的松材线虫在形态特征方面有一定的差异，采用扫描电子显微镜对来自湖南、广东两地3个株系松材线虫进行了形态观察比较．结果表明：这3个株系的松材线虫成虫的头部、尾部形态特征无明显差异，幼虫和成虫的唇区与体部都出现缢缩；松材线虫口针的开口端呈一斜面；雄性成虫尾部空合伞呈“M”型，这些特征都是在过去的研究中没有描述过的，可为松材线虫的形态研究提供参考依据。     

松材线虫产生的分泌物对松树的致病作用

用多毛孢(Pestalotia sp.)培养松材线虫,经过表面消毒后,在Tris-HCl缓冲液中振荡培养,培养液经硫酸铵沉淀、透析、冷冻真空干燥,制成的干样,用于聚丙烯酰胺凝胶电泳。松材线虫能向体外分泌多种可溶性蛋白,发现有纤维素酶、过氧化物酶、蛋白酶、淀粉酶。用松材线虫产生的分泌物、纤维素酶、过氧化物酶、蛋白酶、淀粉酶接种3年生黑松(Pinus thunbergii),发现松材线虫产生的分泌物和纤维素酶能够导致松针枯死。这暗示松材线虫的分泌物可能是松材线虫病因之一。     

拟松材线虫及其致病性

对拟松材线虫的形态以及致病性方面的研究进行了综述。拟松材线虫在形态上与松材线虫十分相似。两者之间的主要区别在于拟松材线虫的尾部形态为圆锥形,而松材线虫的尾部为指形。形态鉴定上支持将尾尖突短于1μm的定性为松材线虫,长于3.5μm的定为拟松材线虫。拟松材线虫和松材线虫交合伞都有多种变化,不宜作为分类特征。关于拟松材线虫对松树的致病性,主要存在3种观点:①无致病性;②有微弱致病性或潜在致病性;③具有致病性分化,有的株系具有较强的致病性。