羊肺脏铸型标本的制作方法

用不同颜色的塑胶液灌注于羊肺脏的支气管动脉、肺干、肺静脉及气管中,待定型后,经过浓度为30%的盐酸腐蚀,自来水冲洗及人工修整等过程,制作出不同类型的羊肺脏铸型标本.在腐蚀过程中,肺组织部分被腐蚀掉,灌注的塑胶液以血管、气管、支气管及肺泡的原形状显露出来.从而制作出既保持肺脏原有的形态,又可以清楚地观察到肺的呼吸道系统、小循环系统及肺自身营养血管系统立体构筑的美观、真实的肺脏气管和血管铸型标本.为教学、科研及临床实践提供了直观的解剖形态学依据.     

羊肺脏铸型标本的制作方法

用不同颜色的塑胶液灌注于羊肺脏的支气管动脉、肺干、肺静脉及气管中，待定型后，经过浓度为30％的盐酸腐蚀，自来水冲洗及人工修整等过程，制作出不同类型的羊肺脏铸型标本．在腐蚀过程中，肺组织部分被腐蚀掉，灌注的塑胶液以血管、气管、支气管及肺泡的原形状显露出来．从而制作出既保持肺脏原有的形态，又可以清楚地观察到肺的呼吸道系统、小循环系统及肺自身营养血管系统立体构筑的美观、真实的肺脏气管和血管铸型标本．为教学、科研及临床实践提供了直观的解剖形态学依据．     

动物头部动脉及脑动脉血管铸型方法的建立

采用新鲜绵羊头、兔头各10个,自制硬头软管灌注装置,通过缓压适量灌注方法、带颅骨及带头骨腐蚀方法和延长腐蚀时间等综合方法制作血管铸型标本.结果表明:试验获得了精美、完整的绵羊脑及脑外周血管铸型和兔头部动脉血管铸型,采用该方法可成功获得小型哺乳动物血管铸型标本.     

单纯与联合灌注法构建猪支气管动脉立体标本

【目的】改进和优化ABS血管铸型技术。创建猪支气管动脉立体标本的铸型方法,并构建猪支气管动脉立体标本。为探明猪支气管动脉在肺内的分支与分布状态提供实验方法。【方法】用改进和优化ABS铸型技术,采用支气管动脉单纯铸型和支气管动脉与支气管树或肺动脉联合铸型的方法构建猪支气管动脉的立体标本。【结果】(1)创建了猪支气管动脉立体标本的铸型方法。1猪肺支气管动脉单纯标本制作的方法要点:先分别在胸主动脉近心端和远心端插管并结扎胸主动脉。同时,为了防止在灌入铸型剂时经食管和气管周围的血管网发生渗漏,分别在胸主动脉插管处相应的位置结扎食管前端和后端,并在气管开口处插入盲端套管并结扎。然后调整肺的位置,使其背上腹下地置于解剖盘中。经胸主动脉间接向支气管动脉中注入铸型剂。灌注时强压梯度灌入60 mL 10%和100-160 mL 15%的ABS铸型剂,当橡胶管中间部位膨大后停止灌注。在连续灌注结束后5 h内随时观察橡胶管膨大部位的大小,当压力减小时,立即灌入20%的ABS铸型剂,保证主动脉内的正压力。将灌注好的标本置于冷水中静态硬化3-4 d,再用盐酸密闭腐蚀10 d左右。然后用流水漂浮和加压冲洗,再通过摘除凝块、打枝疏密和断枝再植修整后就可以获得完整的铸型标本。2猪肺支气管动脉与支气管树联合铸型标本制作的方法要点:首先,同时插管并结扎胸主动脉、食管和气管。然后经胸主动脉间接灌注铸型剂。间隔1-2 h后再对气管树进行灌注。最后同步硬化、腐蚀、冲洗和修复支气管动脉与支气管树联合标本。3猪肺支气管动脉与肺动脉联合铸型标本制作的方法要点:支气管动脉与支气管树联合铸型的方法和支气管动脉与肺动脉联合铸型的方法相似,不同之处在于在将铸型剂注入支气管动脉的同时,前者是将铸型剂注入支气管树内,后者则是将铸型剂注入肺动脉内。在联合铸型时,根据肺的大小确定注入铸型剂的量,而经支气管动脉单纯铸型时,则根据压力大小确定灌注量。(2)构建了猪支气管动脉立体标本、猪支气管动脉与猪支气管树的联合立体标本和猪支气管动脉与肺动脉的联合标本。【结论】采用该方法获得的支气管动脉立体标本血管层次清楚、管道充盈光滑、对比度清晰,能够完整显示猪支气管动脉的起源、分支、走向、分布以及与支气管树和肺动脉的毗邻关系。该工作为猪及其它动物支气管动脉的研究奠定了基础。     

金黄地鼠颊囊微血管构筑的扫描电镜观察

应用甲基丙烯酸甲酯灌注金黄地鼠颊囊微血管制作的微血管铸型,可清晰显示该组织微血管的立体构筑,并能较好地显示血管新生的功能性变化和肿瘤情况下微血管系统的病理性改变。为研究金地鼠颊囊微血管构筑及病理情况下微血管的变化提供了一种理想方法。     

禽类气囊铸型标本制作法

关于禽类气囊铸型标本,虽有人搞过,但均以石腊或动物胶作灌注剂,方法复杂,铸型标本易碎,又不易长期保存。为克服上述缺点,我们采用ABS聚合物的丙酮溶液作灌注剂,先后对鸡鸭鸽的气囊铸型标本制作法进行了研究,获得了较理想的效果。     

绵羊支气管动脉立体铸型方法研究

绵羊支气管动脉具有管径很细、呈线型分布、分布距离远、分布位置广等特点,再加目前使用的铸型剂塑料材料的柔韧性差,支气管动脉的单独铸型标本难以显现血管的立体结构和分布.为了选择一种能较好表现支气管动脉立体分支分布情况的支架,分别选用肺动脉、肺静脉、支气管树与支气管动脉进行了联合灌注试验.结果表明,肺动脉是一种比较理想的支气管动脉的支架,对制作绵羊支气管动脉的立体铸型标本具有较高的应用价值.     

青岛老鹳草花粉和花芽扫描电镜制样条件探讨

为了探究与老鹳草相关类型花粉花芽的样品电镜制备,采用直接观察法和戊二醛固定冷冻干燥法对青岛老鹳草花粉扫描电镜制样条件进行了研究。结果表明：直接观察法制备的青岛老鹳草花粉颗粒在扫描电镜下形态饱满,结构清晰,花粉表面的纹饰和突起微观结构清晰完整;改进的FAA单固定冷冻干燥法处理的青岛老鹳草花芽形态学结构完整,层次丰富,立体感强,细胞失水皱缩得到明显改善。通过对不同制样方法进行比较,最终得到可靠简单易行的样品制备方法,对牦牛儿苗科植物的研究及相关类型花粉花芽的样品制备有重要的指导意义。     

牛、马心脏血管铸型标本的制作与观察

用红蓝两种颜色的塑胶液,对心脏的心大、心中静脉,左、右冠状动脉进行灌注。凝固定型后,对左心房,左心室,肺静脉,主动脉及臂头动脉用红色塑胶进行铸型。用蓝色塑胶对右心房,右心室,肺动脉,前、后腔静脉进行铸型,待完全凝固定型后又经盐酸腐蚀,冲洗,修剪等过程制作出的牛、马心脏血管铸型标本保持了心脏原有的基本形态和血管立体结构。观察并与人的心脏血管铸型标本相比较,马、牛心脏血管铸型标本与人心脏血管铸型标本外观形态和血管立体构筑基本相同,有助于相关疾病的研究和教学。     

昆虫材料扫描电镜样品制备技术

在昆虫材料的扫描电镜样品制备中,组织固定是极其重要的环节.由于昆虫体壁均有一定程度的骨化,具有阻止外界物质侵入的作用,使得固定液不容易浸透昆虫体内组织器官,且昆虫体内液体含量较高,因此利用常规前固定方法（即用2％～3％的戊二醛固定）难以保持昆虫材料的原有形态.本研究通过改变固定液的配制方法,即在3％戊二醛中加入氯化钠及吐温-80,比较了桃蛀螟幼虫经过微波固定、常规固定和自然干燥标本处理后,在扫描电镜下的观察效果.结果发现：在微波和固定液共同处理下,昆虫材料扫描电镜样品皱缩程度显著降低,有益于观察昆虫体表的超微结构.研究结果可为昆虫扫描电镜材料的制备提供技术参考.     

牦牛头骨解剖

运用大体解剖学方法，对１５头牦牛的头骨进行了研究，并与普通牛作了比较。牦牛头骨的主要特征是：头骨短而宽，面骨发达；角突粗而长，额部宽，鼻部较平，颌前部前缘较直；腭部相对较长，腭骨水平部相对较短；腹鼻甲骨发达，鼻前孔和鼻后孔宽。     

1日龄大通牦牛小肠肥大细胞的形态学研究

[目的]通过对比研究1日龄牦牛和黄牛小肠肥大细胞的数量及分布特点,为初生牦牛小肠黏膜免疫状态的研究提供参考资料。[方法]利用常规组织学技术及改良甲苯胺蓝色染法,对1日龄牦牛和黄牛小肠内肥大细胞的分布及数量特点进行比较。[结果]1日龄牦牛小肠各段的肥大细胞数量从十二指肠向后呈显著增多趋势（P〈0.05）,回肠中肥大细胞数量最多。1日龄黄牛小肠各段的肥大细胞数量有显著差异（P〈0.05）,其中空肠中的肥大细胞数量最多,而十二指肠的肥大细胞数量最少。2种动物相同小肠肠段的肥大细胞数量差异显著（P〈0.05）,1日龄牦牛十二指肠和空肠中的肥大细胞数量显著少于1日龄黄牛,但其回肠中肥大细胞数量显著多于黄牛。[结论]1日龄牦牛和黄牛小肠肥大细胞的数量及分布具有不同的特点。     

青海湖区牦牛体内微量元素的因子分析

[目的]探索青海湖区牦牛内脏中微量元素的差别。[方法]采用因子分析法,对青海湖区牦牛内脏中微量元素的含量进行了综合评价。[结果]青海湖区牦牛内脏中Mg、Cu和Se含量显著相关,Mn含量与Fe含量显著相关。牦牛肾脏中微量元素的含量最高,其次为肝脏、心脏、肌肉、肺、脾脏。肾脏、肝脏、心脏中微量元素含量高于内脏微量元素含量的平均值,而肌肉、肺、脾脏中微量元素的含量低于平均值。运用因子分析法,提取了3个主因子。Mg、Cu和Se是影响第1主因子的最重要元素,与第1主因子有强相关性。Fe和Mn是影响第2主因子的最重要元素,而Ca是影响第3主因子的最重要元素。[结论]多食肾脏、肝脏、心脏等牦牛内脏可为人体补充多种微量元素。     

高原牦牛胎盘粉对衰老模型小鼠抗氧化作用的研究I

[目的]研究高原牦牛胎盘粉的抗氧化作用。[方法]将健康小鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组、低海拔胎盘组、中海拔胎盘组和高海拔胎盘组，将后5组用D-半乳糖造亚急性衰老小鼠模型；低海拔胎盘组、中海拔胎盘组和高海拔胎盘组的小鼠在建模11d后每天灌胃牦牛胎盘粉40mg／只、阳性对照组每天灌服维生素E100mg／kg，45d后观察心、肝、脾、肺、肾组织中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力和丙二醛（MDA）含量。[结果]高原牦牛胎盘粉可提高小鼠心、肝、脾、肺、肾组织中SOD（P〈0.01）和GSH-Px（P〈0.01）活力，明显抑制小鼠心、肝、脾、肺、肾组织中MDA（P〈0.01）的形成。[结论]高原牦牛胎盘粉有很好的抗衰老作用。     

牦牛胎盘粉对亚急性衰老小鼠部分组织中NO含量的影响

[目的]研究牦牛胎盘粉对亚急性衰老小鼠心、肝、脾、肺、肾、骨骼肌中一氧化氮（NO）含量的影响。[方法]将健康小鼠随机分为正常对照组、模型纽、阳性对照组、低海拔胎盘组、中海拔胎盘组和高海拔胎盘组，将除正常对照组外的其他5组用D-半乳糖，造亚急性衰老小鼠模型；然后对低、中和高海拔胎盘组的小鼠建模11d后，每天灌胃牦牛胎盘粉，剂量为40mg／kg。阳性对照组每天灌服维生素E 100mg／kg，45d后观察心、肝、脾、肺、肾组织中一氧化氮（NO）含量。[结果]高原牦牛胎盘粉可明显降低小鼠心、肝、脾、肺、肾组织中一氧化氮（NO）含量（P〈0.01）。[结论]高原牦牛胎盘粉有很好的抗衰老作用。     

牦牛BoLA-I基因mRNA及其相关miRNAs在牦牛不同组织器官中表达分析

为了解牦牛BoLA-I基因mRNA组织表达谱,并探索可能靶定BoLA-I基因的miRNAs,利用RT-PCR技术对牦牛BoLA-I基因mRNA在牦牛肝、脾、肺、肾、肌肉、卵巢、小肠、下颌淋巴结、大肠和肠系膜淋巴结等10种组织的表达谱进行分析,再通过Targetscan和miRBase软件来预测可能靶定BoLA-I基因的miRNAs,检测其在10种牦牛组织中的表达情况。结果表明:BoLA-I基因mRNA在检测的10种牦牛组织中均有表达,尤其在免疫器官组织中广泛表达,在牦牛的肠系膜淋巴结组织表达水平极显著高于小肠和大肠组织(P0.01);预测到的可能靶定牦牛BoLA-I基因的miRNA共有28个,从中选择了6个进行组织表达谱分析,发现bta-miR-759、bta-miR-142-5p、bta-miR-665、bta-miR-2322-5p、bta-miR-199a-3p与牦牛BoLA-I基因共表达;除卵巢外,bta-miR-219-5p在其他组织中均有表达,且在肝脏组织中的表达水平极显著高于其他组织(P0.01)。bta-miR-142-5p在肠系膜淋巴结中表达量极显著高于其他组织(P0.01)。由此推测,牦牛BoLA-I基因及其预测的miRNA可能在牦牛组织中起重要作用。     

HSPA2在牦牛不同组织器官中的表达差异

【目的】探索热休克蛋白70-2(heat shock 70kD protein-2, HSPA2)在牦牛不同组织器官中的表达差异。【方法】选取 3 头 1 岁龄的健康青海高原雄性牦牛为研究对象,在正常生理条件下,于 2013 年 9 月中旬采集不同组织器官（心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑和睾丸）样本。（1）从牦牛不同组织器官中提取 RNA,将 RNA 反转录成第一链 cDNA,参照牦牛 HSPA2 和β-actin 基因序列（登录号为 KC790105.1和 DQ838049.1）设计特异性引物,首先采用 RT-PCR 来验证实时荧光定量 PCR（RT-qPCR）是否能应用于牦牛不同组织器官中 HSPA2表达差异的测定;然后采用 RT-qPCR 测定牦牛不同组织器官中 HSPA2相对表达量的差异。（2）将牦牛不同组织器官样本 4％多聚甲醛固定,制成石蜡切片,免疫组织化学法测定 HSPA2 在不同组织器官中的分布。采用 Image-Pro Plus 6.0 软件进行免疫组化图像分析,测定 HSPA2 阳性反应物的积分光密度,进行吸光度分析;通过 SPSS 19.0 统计软件,用单因素方差分析进行差异显著性测定。【结果】(1) RT-PCR 结果表明 RT-qPCR 法可用于牦牛不同组织器官中 HSPA2表达差异的测定。实时荧光定量 PCR 结果表明,HSPA2在睾丸中的相对表达量,分别是在脑、肾脏、心脏、脾脏、肺脏和肝脏中的 83.33、97.09、111.11、133.33、222.22和 285.71倍。(2)免疫组织化学结果显示,牦牛睾丸、肾脏、脑、心脏、肺脏、肝脏和脾脏中均有 HSPA2 的阳性表达。其中,在牦牛肾脏皮质肾小管、髓质肾小管,大脑皮质海马CA1区、小脑皮质,心肌细胞,肺泡上皮细胞,肝细胞,脾脏边缘区和红髓中有 HSPA2 阳性反应,着色深浅不等,大部分阳性反应位于细胞质,细胞核阳性反应极少;而在睾丸曲精小管中生精细胞细胞质和细胞核中均有 HSPA2 阳性反应,着色深浅不等;阴性对照组未观察到阳性反应。根据积分光密度值比较得出,HSPA2 蛋白的阳性表达量在睾丸中最高,脑、肾脏、心脏、肺脏和肝脏次之,脾脏最少。【结论】通过基因水平和蛋白水平两个层面的研究,发现 HSPA2 在牦牛各组织器官中存在表达差异;睾丸中 HSPA2 基因和蛋白表达量均高于脑、肾脏、心脏、脾脏、肺脏和肝脏,提示 HSPA2 可能与睾丸的生殖功能密切相关。     

16S rRNA高通量测序技术筛选牦牛瘤胃细菌基因组DNA提取方法及菌群结构

【目的】确定理想的牦牛瘤胃细菌基因组DNA提取方法及初步分析牦牛瘤胃细菌的群体结构。【方法】采用物理法(珠磨法、反复冻融法)、化学法(CTAB、SDS)及酶解法(溶菌酶、蛋白酶K)三者与瘤胃细菌特点相结合的方法,组合生成9种不同方法,即方法 1(CTAB+SDS+Lysozyme+无特殊物理处理法)、方法 2(CTAB+SDS+Lysozyme+反复冻融法)、方法 3(CTAB+SDS+Lysozyme+珠磨法)、方法 4(CTAB+Lysozyme+无特殊物理处理法)、方法 5(CTAB+Lysozyme+反复冻融法)、方法 6(CTAB+Lysozyme+珠磨法)、方法 7(SDS+Lysozyme+无特殊物理处理法)、方法 8(SDS+Lysozyme+反复冻融法)、方法 9(SDS+Lysozyme+珠磨法),同时以QIA amp DNA Stool Mini Kit(方法 10)为对照,以这10种方法来提取瘤胃微生物基因组DNA,并通过DNA浓度、纯度、DNA电泳图等基本性质及16S r RNA高通量测序结果对其进行分析比较,同时通过测序结果初步分析牦牛瘤胃细菌群体结构。【结果】不同DNA提取方法效率比对结果显示,同样的化学及生物酶裂解条件下,结合珠磨法及反复冻融法能够显著地增强细胞裂解效率,提高DNA产量。其中方法 3及方法 6提取的DNA具有较高的浓度及纯度,方法 7—10缺乏CTAB阳离子去污剂,提取的DNA量显著低于其他方法(P0.05),除方法 2和8所提取的样品经多次试验,PCR产物目的条带太弱或未检测到外,其余8种方法提取的样品PCR产物目的条带大小正确,浓度合适,符合高通量测序的要求。16S r RNA高通量测序共生成了191 349条原始数据,质控后得到有效序列171 231条。稀释性曲线分析表明,数据量合理并达到饱和,能够完整反映样品的菌群种类。OTU聚类数据统计、分类学和多样性指数分析显示方法 6和10包含的细菌较丰富。不同提取方法对革兰氏阳性菌提取效果比对结果表明方法 6裂解革兰氏阳性菌细胞壁的能力比其他方法相对较高。综上,方法 6(CTAB-Lysozyme-珠磨)提取的DNA产量、样品多样性指数及革兰氏阳性菌破壁能力均优于其他方法。菌群结构分析表明牦牛瘤胃细菌菌群结构包括21门、35纲、75科、112属,丰度较高的菌群依次是拟杆菌Bacteroidtes(64%)、厚壁菌Firmicutes(20%)、螺旋体Spirochaetae(2.3%)和变形菌Proteobacteri(1.8%),纤维杆菌Fibrobacter(1.7%)。牦牛瘤胃细菌群体结构与黄牛相比存在着一定的差异,这可能归因于饮食及环境的不同。【结论】利用16S r RNA高通量测序筛选出了牦牛瘤胃细菌基因组DNA理想提取方法,即方法 6(CTAB-Lysozyme-珠磨),并初步分析了牦牛瘤胃细菌群体结构,为研究牦牛瘤胃微生物群体特殊性及挖掘牦牛体内的基因资源奠定了基础。     

天祝白牦牛LF基因克隆及分子特征

 【目的】哺乳动物乳铁蛋白（Lactoferrin，LF）在抗菌、抗病毒、抗肿瘤、调节免疫等方面起着重要作用。本试验对天祝白牦牛乳铁蛋白基因的编码区进行克隆和分子特征分析。【方法】以处于干乳期的天祝白牦牛乳腺组织为材料，通过RT-PCR克隆了包含LF基因编码区的cDNA序列（GenBank收录号为EU547252）;将克隆获得的天祝白牦牛LF基因的cDNA与奶牛相应序列进行比对;对天祝白牦牛LF蛋白（GenBank收录号为ACB29795）与其它物种LF蛋白进行序列比对和进化树分析;对牦牛LF蛋白的特性和结构进行预测。【结果】克隆获得天祝白牦牛LF基因cDNA片段长度为2 344 bp，其中LF基因编码区全长2 124 bp，编码708个氨基酸;序列分析显示，克隆获得的牦牛cDNA序列与奶牛该序列存在15个碱基的变异，其中位于LF基因编码区的变异有12个，这些突变造成4个氨基酸变异;天祝白牦牛LF蛋白与奶牛、人、小鼠、山羊、绵羊、猪、狗、马、骆驼、猩猩、鸡LF蛋白氨基酸相似度分别为99.4%、69.5%、63.5%、92.4%、91.5%、72.9%、69.1%、72.6%、75.3%、69.5%和50.9%;各物种LF蛋白进化树符合物种进化规律;同源建模预测LF 3D模型显示，LF为多肽链在二级结构基础上折叠形成2个极相似的、对称的球状叶，即N叶和C叶，中间由1段对蛋白酶敏感的α-螺旋连接，呈“二枚银杏叶型”结构。【结论】从天祝白牦牛克隆获得LF基因编码区全长序列并揭示了其分子特征，为牦牛LF蛋白基因工程和蛋白质功能的研究奠定了基础。     

舍饲生长期牦牛NH3排放及其对CH4与CO2

为舍饲育肥牦牛高效生态生产、减少有害气体和温室气体排放提供参考,采用大型呼吸测热环控舱(Chamber)模拟舍饲状态,对4头生长期育肥牦牛排放的主要温室气体甲烷(CH4)和二氧化碳(CO2)及有害气体氨气(NH3)进行动态监测.结果表明:牦牛在采食1.5~3 h后CH4排放量达最大值,维持一段时间后,排放量逐渐下降;CO2排放相对平稳;NH3排放无明显规律.CH4、CO2和NH3日平均排放量分别为22.42 g/头、1 023.10 g/头和5.84 g/头,舍内NH3浓度为157.29 mg/m3,超出牦牛耐受氨气浓度.NH3排放不影响CH4和CO2排放规律,但是影响气体总排放量.