大蒜病毒原的鉴定及组培脱毒研究

系统鉴定的结果表明，为害大蒜的病毒有GLV，GMV和TMV.GMV引起大蒜花叶及条纹花叶，而LV在大蒜上表现潜隐症状。GLV的紫外吸收峰最低在245.2nm，最高在275.7nm，其A260／280为1.36。GLV和GMV粒子大小分别为548－700×13nm和750－773×13nm。德国GLV抗血清仅与GLV有阳性反应，采用0.10-0.25mm生长点能完全脱除病毒，而用0.30-0.70mm有部分脱毒效果。     

大蒜病毒病电镜检测研究

本研究发现在大蒜(Alli■ Sotiv■n L.)病株细胞中含大量病毒粒体和风轮状内含体。线状病毒粒体长度250～1875nm,以长度550～800nm的粒体居多。其中700～800nm粒体被鉴定为GMV,回接脱毒大蒜,叶片产生条纹花叶症状。免疫电镜和血清学表明GMV与OYDV有近缘关系。是导致大蒜种性退化,产量下降的主要危害病毒。长度500～600nm的粒体为GLV,回接脱毒大蒜不产生花叶症状。对大蒜生长发育和产量性状似无影响。     

应用多重RT-PCR检测甘肃‘成县迟蒜’中的大蒜潜隐病毒和洋葱黄矮病毒

根据大蒜潜隐病毒(garlic latent virus,GLV)和洋葱黄矮病毒(onion yellow dwarf virus,OYDV)的外壳蛋白基因核苷酸序列分别设计2对特异性引物,在单重RT-PCR检测的基础上,建立同时检测GLV和OYDV的多重RT-PCR技术体系.结果表明:该方法可从带病的甘肃‘成县迟蒜’大蒜样品中扩增出GLV(849bp)和OYDV(571bp)的2条特异性片段.GLV扩增产物与GenBank中登录的其他分离物核苷酸同源性在90.00%～99.76%,OYDV扩增产物与其他分离物核苷酸的同源性为90.00%～98.00%.     

侵染菊花的番茄不孕病毒

田间采集的菊花病毒病标样13~(?),能侵染菊花,病株表现出轻度花叶、斑驳;侵染烟草和心叶烟表现出花叶、畸形,叶背形成耳突症状;侵染番茄表现出花叶与畸形;还能使苋色藜、昆藜表现局部斑。寄主范围广泛,能侵染菊科、茄科、藜科等多种植物,并能通过汁液、蚜虫传毒。电镜负染或超薄切片可观察到球状病毒粒子,直径为28～30nm。紫外吸收光谱表现为典型核蛋白吸收峰。A260/280=1.7974.与番茄不孕病毒(TAV)有血清反应,而与CMV无血清反应。因此认为13~(?)分离物是番茄不孕病毒。     

乐都紫皮大蒜4种病毒多重RT-PCR检测技术的建立

【目的】建立乐都紫皮大蒜4种病毒的多重RT PCR快速检测方法，为大蒜病毒病病原鉴定、脱毒效果验证等提供技术支撑。【方法】根据乐都紫皮大蒜RNA全长转录组测序结果，分别设计洋葱黄矮病毒（onion yellow dwarf virus，OYDV）、大蒜潜隐病毒（garlic latent virus，GLV）、大蒜D病毒（garlic virus D，GarVD）和大蒜X病毒（garlic virus X，GarVX）4种病毒的外壳蛋白特异性引物，筛选不同引物，优化引物用量、模板用量、退火温度等条件，并进行了多重RT PCR的灵敏度检测和12份引进栽培大蒜种质资源的病毒检测。【结果】通过优化筛选，在一个PCR反应体系中实现了OYDV（1 232 bp）、GLV（831 bp）、GarVD（506 bp）和GarVX（116 bp）4种病毒的多重检测，最优反应条件为退火温度55 ℃，模板用量2.5 μL，混合引物用量1.0 μL。多重RT PCR的灵敏度略低于单一RT-PCR。对引进的12份栽培大蒜资源进行4种病毒的多重RT-PCR检测发现，有5份资源存在4种病毒，4份资源存在2种病毒，3份资源存在1种病毒。对7份资源中经多重PCR未检测到的病毒，使用单一RT-PCR进行检测和验证发现，除1份内蒙古资源（NMG）的1种病毒（GarVX）外，多重RT PCR结果与单一RT-PCR检测结果一致。【结论】本研究建立的大蒜多重RT-PCR体系可靠性强，可用于大蒜病毒的检测与防控     

黑龙江省分蘖洋葱病毒病原的初步鉴定

黑龙江省分蘖洋葱病毒病发生普遍 ,阿城、宾县、五常的发病率均为 10 0 % ,病情指数分别为6 2 .13% ,71.0 7%和 4 9.87%。典型症状为黄化条纹花叶 ,叶片扭曲畸形、叶尖干枯 ,植株矮缩 ,鳞茎退化变小 ,产量和品质大幅度下降。被分蘖洋葱病毒系统感染的有洋葱、大葱、大蒜和蚕豆 ,局部感染的有千日红、苋色藜。电镜观察表明 ,病体细胞中含有大量线状病毒粒体 ,长度在 30 0～ 14 5 0 nm。通过叶片超薄切片 ,在叶肉细胞质中观察到大量的风轮状、束状、涡轮状和环状内含体 ,叶绿体被破坏。体外抗性测定结果表明 ,致死温度为 5 5～ 6 5℃ ,稀释限点为 10 - 4,体外保毒期为 3d。酶联免疫测试和洋葱黄矮病毒抗血清、韭葱黄条纹病毒抗血清、大蒜复合病毒抗血清呈阳性反应。以上特征证明 ,黑龙江省分蘖洋葱病毒病为几种病毒复合侵染 ,初步鉴定为洋葱黄矮病毒和韭葱黄条纹病毒。     

烟草脆裂病毒甜椒环斑花叶分离物（TRV－PRSM）的鉴定

从邯郸市甜椒田间采集呈环斑花叶或黄斑花叶症状材料编号为８２—６—３５（２）．经生物学、血清、电镜下的形态观察证实８２—６—３５（２）为烟草脆裂病毒（Ｔｏｂａｃｃｏｒａｔｔｌｅｖｉｒｕｓ）的一个分离物，称之为ＴＲＶ—ＰＲＳＭ．该病毒以汁液接种传染，感染５科２２种植物，引起局部坏死斑、褪绿斑、花叶、系统坏死、黄脉、黄化等。病毒粒体呈直杆状，有２种粒体，长粒体１９０～２１０ｎｍ×２５ｕｍ．短粒体４０～８０ｎｍ×２０～２５ｎｍ．长短粒体比１：２、ＴＲＶ－ＰＲＳＭ分离物同ＴＲＶ标准抗血清形成特异的沉淀线。     

云南鬼针草上发现鬼针草斑驳病毒

 【目的】鉴定侵染鬼针草引起花叶或斑驳的病原。【方法】利用电镜技术观测病原粒子;间接ELISA方法鉴定病原与马铃薯Y病毒属病毒的血清学关系;分子生物学技术克隆了病原3′-端序列;BLAST，Clustal_X，BioEdit和MEGA 4.0等生物信息学软件用于所得序列的序列分析。【结果】在电镜下可观察到长约650-700 nm×13 nm左右的线状病毒粒子和风轮状内含体;利用Potyvirus PathoScren试剂盒检测呈阳性;用马铃薯Y病毒科病毒简并引物可扩增获得一条约1 800 bp的片段;序列分析表明该序列与鬼针草斑驳病毒相应序列高度相似，外壳蛋白的氨基酸同源性及3′-UTR核苷酸同源性均达96%以上。【结论】侵染云南鬼针草引起花叶或斑驳症状的病原为鬼针草斑驳病毒，这是该病毒侵染中国鬼针草属植物的首次报道。     

如何防止茶陵紫皮大蒜种性退化

<正>茶陵紫皮大蒜是特色农产品,以香、辣、脆而享誉国内外。而近些年来,茶陵紫皮大蒜种性退化相当严重。茶陵紫皮大蒜种性退化的主要原因是病毒侵害。通过对茶陵紫皮大蒜取样进行病毒检测,发现主要病毒有大蒜潜隐病毒(GLV)、韭葱黄条病毒(LYSV)、洋葱黄矮病毒(OYDV)和大蒜病毒(GV)。从2013年起,茶陵县农业局与株洲市农业科学研究所进行了合作,利用茎尖脱毒技术进行脱毒和种球繁殖。其主要技术路径:选取品质较好的种球进行茎尖脱     

珊瑚豆花叶病病原病毒鉴定

从珊瑚豆(Solanum pseudocapsicum L.var diflorum(Vell)Bitter)花叶病株上分离到一病毒(SPV—I),汁液摩擦接种和桃蚜(Myzus persicea)、棉蚜(Aphis gossypii)均能传毒。两次试验证明该病毒不经种传,人工摩擦接种可侵染7科中的21种植物。在黄瓜、心叶烟等植物上能引起系统花叶,能引起苋色藜、昆诺阿藜接种叶片局部枯斑。该病毒钝化温度为65～70℃10分钟;稀释限点为10~(13)～10~(-4);体外存活期为1～2天(22℃)。琼脂免疫双扩散表明,此病毒与黄瓜花叶病毒有明显的血清学关系。浸蘸法制备样品,2%醋酸铀负梁,透射电镜观察,该病毒粒子为正二十面体,其直径为28～30nm。根据此病毒的生物学、血清学特性和病毒粒子的形态特征,初步认为该分离物是黄瓜花叶病毒的一个株系。     

Detection of GLV, OYDV and LYSV in potato onion （Allium cepa L., Aggregatum group） by RT-PCR

Three pairs of primers were designed and synthesized from nucleotide sequences of garlic latent virus (GLV), onion yellow dwarf virus (OYDV), and leek yellow stripe virus (LYSV) by using PCR primer design software. The expected fragments about 170 bp, 287 bp, and 191 bp were amplified by RT-PCR for GLV, OYDV, and LYSV, respectively in disease-infected plants of potato onion (Allium cepa L., Aggregatum group), but such fragments were not obtained from healthy-looking plants and virus-free seedlings of shoot-tips. The amplified products of GLV, OYDV and LYSV were cloned into pGEM-T vectors, and transformed into Escherichia coli. JM109. The recombinant plasmids were obtained and sequenced. The nucleotide sequences were compared with corresponding viral nucleotide sequences reported in GenBank by performing a NCBI BLAST. The analysis showed that their homology attained 75% to 90%,89.5% to 96.1%,and 91.6% to 96.3% in GLV, OYDV, and LYSV, respectively. The total RNA of 6.34 μg·μL~(-1) from infected plants was diluted to a series of 10~(-1) to 10~(-5) and the detection sensitivity of RT-PCR was 10~(-4) (about 4 ng). Thus, a method of identification and detection by RT-PCR of GLV, OYDV, and SLYV was established.     

大蒜茎尖组培苗的检测

从市售阿城紫皮蒜生长的叶片经ＰＥＣ沉淀差速离心提纯,获得复合病毒制剂,得率为４．９０ｍｍ（１００ｇ）－１叶。电镜观察病毒粒体为长度５５０～８００ｎｍ的线状物,经抗血清测定主要为洋葱黄矮病毒（ＯＹＤＶ）和大蒜潜隐病毒（ＧＬＶ）。用复合病毒制剂免疫制备的抗血清效价为１０２４～２０４８。ＯＹＤＶ抗血清检测茎尖脱毒组培苗,脱毒率为５０％左右,用ＧＬＶ抗血清检测,脱毒率为９５％～９７％,复合病毒抗血清检测结果与ＯＹＤＶ相同。证明复合病毒抗血清可用于组培苗的检测。组培脱毒大蒜在田间种植１年后发病率为５０％,３年后达８０％。茎尖组培脱毒率不高。需用抗血清逐株检测挑选,淘汰病苗,才能获得健康无毒的大蒜群体。     

罗汉果无花叶病苗的培育

在ＭＳ附加ＢＡ０．５—１．０ｍｇ·Ｌ－１、ＩＡＡ１．０ｍｇ·Ｌ－１及Ａｄ８０ｍｇ·Ｌ－１培养基上建立罗汉果试管株系．分别用热处理和微茎尖进行脱除花叶病毒培育无病苗的研究．结果表明；用０．８—１．０ｍｍ微茎尖培养和用３８．５℃热处理１周后再切取２ｍｍ茎尖培养，脱毒效果最好，其脱毒率和成活率均达１００％．采用植物形态特征比较法、黄瓜作指示植物的生物学鉴定法及电镜观察法进行了小苗脱毒鉴定．研究还对带毒苗与经鉴定为脱毒苗的叶片氨基酸进行测定，结果显示两者间游离氨基酸含量差异显著．现工作单位为     

关中大蒜病害调查和病原鉴定

１９９３～１９９６年进行了陕西省关中大蒜病害调查和病原鉴定，结果共发现１４种病害。叶部病害以匐柄霉叶枯病和锈病分布广泛而严重，前者能引起复杂的症状，造成毁灭性损失，芽枝霉叶斑病、紫斑病、灰霉病仅局部地块有发生。蒜薹白斑腐烂病是首次报道的病害，贮藏蒜薹损失率高达５０％～６０％．蒜薹的灰霉腐烂也较普遍。田间危害鳞茎和根部的病害有白腐病和软腐病，贮蒜病害有曲霉病、黑斑病、灰霉病、红腐病和青霉病等。此外，大蒜花叶病毒和大蒜潜隐病毒发生普遍而严重，另有一种病原未明的黄（红）叶病，仅局部发生。     

黑龙江省大蒜病毒病原鉴定及病毒病发生情况调查

黑龙江省大蒜病毒病的田间症状复杂,研究通过生物学技术、电子显微镜技术和血清学方法相结合对大蒜病毒病原进行鉴定,并对黑龙江省大蒜病毒病的发生情况进行了调查。结果表明,表现花叶症状的大蒜样品中含有韭葱黄条病毒(Leek yellow strape virus,LYSV)和大蒜潜隐病毒(Garlic latent virus,GarLV);表现黄化症状的大蒜样品中含有洋葱黄矮病毒(Onion yellow dwarf virus,OYDV)和大蒜普通潜隐病毒(Garlic common latentvirus,GCLV);表现卷叶症状的大蒜样品中含有GCLV、LYSV和OYDV。黑龙江省大蒜病毒病的发生相当严重,且多数为复合侵染,其中LYSV、GCLV和GarLV的检出率较高。     

大蒜茎尖培养脱毒及增产效果的研究

采用山东栽培的6个大蒜品种进行茎尖培养脱毒。结果表明,最佳诱芽培养基为B_5+BA3mg/L+NAA0.1mg/L+Ad30mg/L+KT0.5mg/L,最佳诱根培养基为1/2 B_5+BA0.01mg/L+NAA0.05mg/L。脱毒大蒜的蒜薹比对照增产58～175％,蒜头增产23～114％。本文还对影响茎尖培养成苗的因素,鳞茎热处理后茎尖培养的脱毒效果,脱毒大蒜无性世代的产量增长及脱毒大蒜增产的生产学基础进行了讨论。     

水仙潜隐病毒病病原鉴定

 在中国水仙主产区水仙病毒病的系统调查中,从无症和褪绿斑驳的病叶中分离到3个分离物NC、Ⅱ-3和Ⅹ-3.经人工根接和汁液摩擦接种在昆诺藜和千日红上,表现为局部枯斑;在番杏和苋色藜上,表现为局部褪绿或局部褪绿白斑;在克利夫兰烟和菜豆上产生系统褪绿;而对曼陀罗、豇豆和裂叶牵牛则不侵染。电镜观察病原病毒为635～660nm×13nm的线状粒体。体外抗性测定表明:TIP为65～70℃、DEP为10^-2～10^-3,而LIV为3天。ELISA测定结果与来自荷兰水仙上的NLV标准抗血清起阳性反应。这些结果表明,3个分离物为同一病原,均属水仙潜隐病毒(NLV)。     

紫甘薯京薯6号脱毒苗的诱导与快繁

针对紫甘薯京薯6号生产现状,应用植物茎尖分生组织脱毒培养技术,对紫甘薯京薯6号脱毒苗的生产进行研究.结果显示,茎尖分生组织在添加0.75mg/L6-BA+0.1 mg/L NAA从的MS培养基上可诱导得到无毒苗,出芽率达到100%,出芽平均时间为28d,脱毒率达到95%.以紫甘薯京薯6号脱毒苗茎节为材料,在MS培养基中培养20～25d可以获得无毒快繁苗,繁殖系数为5～6倍.     

花叶病大蒜的茎端组织脱毒培养

本文论述了用MS(1962)培养基添加吲哚乙酸(IAA)、细胞激动素(KT)、萘乙酸(NAA)、2,4—二氯苯氧乙酸(2,4—D)、6—苄基嘌呤(BA)等生长调节物质,对开平金山火蒜及广州硬尾骨蒜两品种茎端0.100～0.125mm长的分生组织进行培养,获得了无毒种蒜,并提出了适于此两种大蒜无毒苗培养的培养基配方、生长调节质物的组合和浓度、以及光温条件等一套方案;论证了2,4—D、NAA、BA、光照和温度对愈伤组织诱导、芽分化和球茎形成上的作用,并对大蒜不同组织部位的培养作了初步的探讨。