一个嗜蓝孢孔菌属新菌株的分离、鉴定与菌种培养基质研究

采自山西右玉地区沙棘树腐木中的野生嗜蓝孢孔菌属一新菌株,其形态学特征为具有马蹄形担子果,盖状无柄,有时平伏反卷生长,单系菌丝系统;骨架菌丝在Melzer试剂和棉蓝试剂中呈负反应;担孢子近球形或球形,无色,厚壁等。将Fomitiporia yanbeiensis的ITS序列与其他已经报道的嗜蓝孢孔菌属真菌ITS进行比对分析。分析结果表明Fomitiporia yanbeiensis与嗜蓝孢孔菌属亲缘关系较近,因此可定该属的一个新种,名为Fomitiporia yanbeiensis S.GuoL.Zhou(Gen Bank:KT861405,Fungal name:FN570360)。     

嗜蓝孢孔菌属(Fomitiporia)一新种

【目的】在山西雁北地区沙棘树腐木上采集到了野生嗜蓝孢孔菌属一新菌,研究其新菌的形态学特征、分子系统发育并确定新种。【方法】形态学观察采用肉眼观察标本以及制作Melzer、棉蓝和5%KOH 3种试剂的浮载切片,在显微镜下观察标本形态,分子系统发育分析采用将新种的ITS序列与其他已经报道的20种真菌ITS进行同源聚类分析,构建基于ITS的分子系统发育树。【结果】形态学特征为具有马蹄形担子果,盖状无柄,有时平伏反卷生长,单系菌丝系统;骨架菌丝在Melzer试剂和棉蓝试剂中呈负反应;担孢子近球形或球形,无色,厚壁等。分子系统发育分析结果表明新种与嗜蓝孢孔菌属亲缘关系较近,聚在一个分支中,并在系统发育树中形成了一个独立的亚分枝。【结论】根据研究确认为嗜蓝孢孔菌属新种,定名为Fomitiporia yanbeiensis S.GuoL.Zhou(登陆号GenBank:KT861405,Fungal name:FN570360)。     

一株中度嗜盐菌新种LYG2#的分离与鉴定

[目的]对一株从连云港青口卤水中分离纯化出的细菌LYG2#进行分类学鉴定。[方法]通过16S rRNA基因序列比对、系统发育分析和一系列生理生化指标测定对该细菌LYG2#进行鉴定。[结果]该菌为革兰氏阴性菌,菌落形态为圆形,粉红色。电镜下观察菌体为螺旋状,长1.50~2.00μm,宽0.24μm。LYG2#最适生长盐浓度为9.6%,最适生长温度为32℃,最适pH为8.5。通过16S rRNA基因序列比对,发现其与Spiribacter salinus M19-40~T的相似度最高,为95.98%。菌株LYG2#在中国科学院的保藏号为CGMCC 1.12136,Gen Bank序列登录号为JQ087462。[结论]分离的菌株LYG2#为一株中度嗜盐菌,是Spiribacter属的一个新种资源。     

嗜蓝孢孔菌新种Fomitiporia yanbeiensis S.Guo&L.Zhou菌丝培养条件研究

Fomitiporia yanbeiensis S.GuoL.Zhou是从山西雁北地区沙棘腐木上分离获得的嗜蓝孢孔菌属的新种,这个种类具有特殊功能成分,具有很高的药用价值。该研究对其菌丝培养条件即温度、pH值、碳源营养、氮源营养进行了试验和分析。结果表明,该菌菌丝体在人工培养基上容易生长,其最适生长温度为25℃,在最适温度下30d左右可长满平皿。最适培养条件:pH为6.0,碳源为葡萄糖,氮源为蛋白胨。这些结果为该菌的人工驯化栽培和功能食品开发提供了参考和依据。     

嗜蓝孢孔菌新种Fomitiporia yanbeiensis S. Guo&L. Zhou液体发酵培养条件研究

[目的]本研究是对Fomitiporia yanbeiensis S.GuoL.Zhou液体发酵培养基的营养源和培养条件进行探索。[方法]以发酵培养液中的菌球生物量、菌丝生长速度和菌球萌发活力指数为主要指标,通过单因素试验和正交试验对发酵工艺的培养的温度、pH值、碳源、氮源、接种量进行优化筛选,研究最佳的发酵培养基配方,并对发酵菌丝体和子实体的功能性成分测定对比。[结果]液体发酵培养中最佳的发酵培养条件为:温度27℃、起始pH为8.0、接种量为11%、碳源是海藻糖、氮源是豆粕粉,最佳的培养基配方为海藻糖2.0%、豆粕粉3.5%、KH_2PO_4(0.05%)、MgSO_4(0.025%),该条件下菌球生物量最高为2.36g·100mL~(-1)。发酵菌丝体的三萜类化合物、β-葡聚糖和黄酮含量均高于子实体。[结论]通过对发酵工艺的筛选优化,为该菌的人工驯化和功能性食品开发奠定了基础。     

大蒜内生菌的分离及拮抗菌株的筛选与鉴定

采用组织切块法和组织匀浆法对10种采集自全国不同地区的大蒜进行内生菌的分离,并用平板对峙法对分离得到的内生菌抗菌活性进行了筛选,根据形态学和16S r RNA等方法对有抗菌活性的菌株进行了鉴定。试验结果表明:从10种大蒜鳞茎中共分离得到大蒜内生菌102株,采用平板对峙法筛选出能同时抑制5种及以上植物病原真菌的菌株,再对筛选出的菌株进行16S r RNA测序鉴定菌种,去除重复的菌株后,得到19株抑菌活性较强的菌株。对19株大蒜内生菌进行一系列生理生化指标的检测,结果表明这些菌株的形态及生理生化特征均不相同。     

尼古丁降解菌的分离筛选及初步鉴定

分别采用基础平板培养法和富集培养法,从河南烟叶表面分离筛选尼古丁降解菌。结果表明:采用基础平板培养法分离出来的30个菌株中,有效菌株仅占所分离菌株的60.0%,对尼古丁降解效率大于30%的仅有6株菌(37℃,24 h)。而富集培养法分离出来的30个菌株中,有效菌株占所分离菌株的比例达93.3%,对尼古丁降解效率大于30%的有14株菌,表明富集培养法是一种快速高效分离筛选尼古丁降解菌的理想方法。经初步鉴定,分离到的2株具有较高活性的尼古丁降解菌分别为短芽孢杆菌(B.brevis)和侧孢芽孢杆菌(B.laterosporus)。     

兔粪中产纤维素酶菌的分离 筛选与初步鉴定

本研究旨为从兔粪中分离、筛选出酶活性较高的产纤维素酶菌,并对该细菌进行形态学的初步鉴定。利用分离培养基(LB)从普通家兔新鲜粪便样品中分离出细菌群,经纯化后接种到产纤维素酶菌筛选培养基中。经一段时间培养后用0.1%刚果红染色液对筛选培养基进行染色,用1 mol/L氯化钠溶液进行脱色处理,根据培养基中水解透明圈直径与菌圈直径的比值挑选出酶活性较强的产纤维素酶菌株。然后,利用革兰氏染色法进行初步鉴定,利用光学显微镜观察其革兰氏染色的结果及其细菌形态。结果表明:从兔粪中分离并筛选出了具有较高酶活性的产纤维素酶菌菌株SK1和SK6,鉴定后认为是革兰氏阳性菌(G+菌),属于杆菌。研究提示,菌株SK1和SK6的水解效果显著,具有较高的开发价值与应用前景。     

青海解磷菌菌株的分离筛选

以青海省主要农耕区海东区和海南区的小麦、洋芋、油菜、蚕豆、辣椒、葱等16种作物的根际土壤为试验材料,通过解磷圈试验对土壤样品进行解磷菌的初筛和复筛。结果表明：共得到具有明显解磷圈的解磷菌28株。通过对解磷圈大小测定,筛选出y8-4、y5．1和w4．1等9株菌表现较好,解磷圈直径（D）与菌落直径（d）比值（D／d）均≥1．5。通过摇瓶复筛得出,y8-4解磷能力较强,菌液中磷含量达95μg／mL,其次是菌株y16-4和y9-4;其中菌株y9-4培养液的pH值有所降低。综合评价认为菌株y9-4的彤d较大,培养液中磷含量较高,且pH值有所降低,最后确定其作为适合青海农作区推广的高效解磷菌。     

高效木质素降解菌株的分离筛选与鉴定

为提高农作物秸秆中木质素的降解速度,从腐烂的树枝和土壤中筛选出一株高效降解木质素的菌株。结果表明,该菌株18S r DNA序列与二年残孔菌(Abortiporus biennis)有高度的同源性,结合其形态特征,初步鉴定该菌株为二年残孔菌,命名为H。     

石龟嗜水气单孢菌的分离鉴定及药敏特性研究

从患病石龟上分离获得1株革兰氏阴性杆菌,菌体细长、无芽孢和荚膜,在山羊血琼脂平板上能形成明显的β-溶血圈。经小白鼠致病性试验、生理生化鉴定及16SrRNA序列分析,确定该分离株为致病性嗜水气单孢菌。经同源性及遗传进化分析发现,该菌株与嗜水气单孢菌B27、HSO2（Genbank登录号：FJ494900．1、FJ562211．1）同源性高达99．5％。而药敏试验表明,该分离株除了对赛福欣（复方恩诺沙星）、肠清（复方乳酸环丙沙星）2种药物高度敏感外,对大部分抗菌素均不敏感。     

高效降解角蛋白菌株的分离筛选与鉴定

为从环境中分离高效降解羽毛角蛋白的细菌,采用以羽毛粉为唯一碳源和氮源的培养基筛选,结果得到一株高效降解羽毛角蛋白的NJY1(CGMCCNo.2337)菌株.通过对该菌株形态特征观察,生理生化特性测定和16S rRNA分析(Genbank登陆号:EU624205),该菌株与苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的相似性达100%,初步认定该菌株为苏云金芽孢杆菌.采用该菌株经过72h发酵,角蛋白降解率达72.5%;2%羽毛发酵液中可溶性蛋白含量达到25.2 mg/ml.该试验为微生物发酵降解羽毛粉,生产高质量的蛋白饲料提供了优良菌株.     

海洋细菌BM-1菌株的分离、筛选及初步鉴定

从连云港海域分离得到海洋细菌76株,采用平板对峙法筛选到对植物病原真菌有抑制作用的海洋细菌18株,经液体发酵后复筛有8株细菌的发酵液对供试植物病原真菌有明显的抑制作用,其中BM-1对病原菌的抑制作用最强,对所有的供试病原真菌都有较强的抑制作用。盐浓度为3%～7%时,BM-1菌株生长良好。形态观察表明,菌体细胞呈杆状,大小为0.6～0.9μm×2.0～3.5μm革兰氏阴性,无芽孢,有鞭毛可运动,好氧。在2216E培养基上形成乳黄色不透明菌落,菌落易挑取,细胞随机无规则排列。生理生化试验结果表明,菌株BM-1的淀粉水解试验呈阴性;伏普试验为阴性;甲基红试验为阴性;接触酶试验为阳性;赖氨酸和精氨酸脱羧酶试验为阴性;苯丙氨酸脱氨酶试验呈阴性;半固体琼脂穿刺试验呈阳性说明待测菌具有运动性;明胶液化试验呈阳性,硫化氢试验呈阳性;尿素酶试验呈阳性。初步认为,菌株BM-1属于假单胞菌属,该菌株特性与文献记载的假单胞菌属的种类均有明显不同,可能为假单胞菌属一变种或新种。     

一株苄嘧磺隆降解菌的分离·筛选与鉴定

[目的]从长期使用苄嘧磺隆的土壤中分离筛选出降解苄嘧磺隆的微生物菌株,并对其进行形态学和生理生化鉴定。[方法]从河北保定农郊被农药污染的土壤中分离筛选出降解苄嘧磺隆的微生物菌株。采用液体发酵的方法筛选降解苄嘧磺隆的菌株,分别于18、48、72h取发酵液。用结晶紫染液涂片染色,观察细菌的生长情况,对涂片结果中菌体生长较好的菌种进行菌种鉴定。[结果]从含有除草剂苄嘧磺隆的初筛培养基中分离筛选出一株具有较好降解能力的菌株C1—11-2,它能够以苄嘧磺隆作为碳源生长。通过形态学、生理生化鉴定及16S rDNA测序,初步鉴定该菌为黄单胞菌属（Xanthornonas）。[结论]为苄嘧磺隆微生物降解的研究奠定了坚实的基础。     

一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定

为获得具有高效溶磷解钾能力的菌株,采用选择性培养基从柑橘根部土壤中分离筛选具有溶磷解钾作用的菌株,通过液体培养法进一步比较筛选菌株的溶磷解钾能力,选择溶磷解钾能力强的菌株进行形态特征、生理生化特征、16S rDNA及gyrB基因同源性分析。结果表明,LW-1、LW-2、LW-3和LW-4这4株菌株具有解磷解钾作用;其中,LW-3的解磷解钾能力最强,其溶解无机磷量为19.06μg/mL,相对增加38.64%,溶解有机磷量为17.06μg/mL,相对增加28.57%,溶解钾量为33.59μg/mL,相对增加15.96%;经鉴定确定菌株LW-3为纺锤形赖氨酸芽孢杆菌LW-3,是理想的菌肥生产用菌株。     

一株具有Caspase7抑制活性的糖多孢菌属菌株的分离鉴定

从云南景洪曼亭药用植物牛心果根际土样中分离到具有Caspase7抑制活性的放线菌株I06-1231-1.菌株在 大多数培养基上生长状况良好,只在ISP4培养基上生长弱.基内菌丝由乳白至棕黄,在ISP2及马铃薯浸汁琼脂上 有白色气丝产生.可溶性色素由淡黄至棕黄.进一步结合菌株的形态特征、生理生化特征、细胞壁化学组分、分子 分类特征等,将菌株I06-1231-1鉴定为糖多孢菌属的一个菌株.     

一株禾谷镰刀菌拮抗菌株的筛选及鉴定

【目的】筛选对禾谷镰刀菌具有高拮抗活性的微生物菌株,探索小麦赤霉病的生物防治方法。【方法】用稀释平板涂布法及平板对峙法从24份取自河南郑州近郊、信阳、新乡、商丘、开封等地区发生小麦赤霉病的田间土样中分离、筛选禾谷镰刀菌的拮抗菌株。【结果】从24份土样中分离纯化到65株菌株,对峙实验发现其中8株对禾谷镰刀菌具有拮抗作用,其中,菌株Jc-07的拮抗效果最佳。根据形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析,将菌株Jc-07初步鉴定为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。抑菌实验表明,菌株Jc-07发酵滤液明显抑制禾谷镰刀菌的菌丝生长,使禾谷镰刀菌孢子萌发率显著降低。【结论】筛选得到的菌株Jc-07对禾谷镰刀菌具有较高的拮抗活性,具有防治小麦赤霉病的潜在应用价值。     

一种抑制稻瘟病菌生长的菌株鉴定

[目的]鉴定真菌M1的种类,明确其对稻瘟病菌的抑制作用.[方法]通过真菌M1的ITS测序,序列比对鉴定真菌种类.采用平板对峙培养和M1发酵液培养稻瘟病菌,分析真菌M1对稻瘟病菌菌株Y92-66b的拮抗作用,计算抑制率.[结果]ITS序列比对确定该真菌M1为蜜环菌(Armillaria novae-zelandiae),对稻瘟病菌菌株Y92-66b具有显著的抑制作用.密环菌与稻瘟病菌平板对峙培养其抑制率为48.80％;当发酵液浓度达50％时,稻瘟病菌菌株Y92-66b的菌丝生长抑制率为78.79％.[结论]蜜环菌对稻瘟病菌菌株Y92-66b具有显著的抑制效果,可作为稻瘟病生防菌的候选真菌.