豆制品转基因检测中不同DNA提取方法的比较

高品质的DNA是分子生物学研究的关键,大豆及豆制品中含有较多的蛋白质、酚类、糖类和脂类物质,从中提取高品质的DNA比较困难。拟采用十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,简称SDS)法、改良CTAB法、十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide,简称CTAB)法、SDS-聚乙烯吡咯烷酮(简称SDS-PVP)法和TIANGEN试剂盒法对大豆MON 89788、小黄豆、豆腐及大豆油中的DNA进行提取,对试验过程中的蛋白酶K、RNA酶A的浓度进行优化,并对DNA浓度及纯度进行综合分析。结果表明,对于大豆MON 89788、小黄豆和豆腐,用SDS法提取的DNA的D_(260 nm)/D_(280 nm)值在1.8左右,DNA产量最高,用改良CTAB法提取的DNA的D_(260 nm)/D_(280 nm)值在1.8左右,用TIANGEN试剂盒法提取的DNA的D_(260 nm)/D_(280 nm)值在1.75左右,2种方法的DNA产量均比SDS法低,而用SDS-PVP法与CTAB法提取的DNA含有较多杂质。综合分析可知,大豆油的最佳DNA提取方法为改良CTAB法。     

PCR-RFLP分析用的梨基因组DNA提取

采用改良CTAB法,提取了23个梨品种基因组DNA。结果表明:所提取DNA产率在200μg/g鲜叶以上,大部分梨品种OD260/OD280在1.8左右,用于PCR-RFLP分析时,PCR扩增产物谱带清晰,且PCR扩增产物能被相应的限制性内切酶酶切。     

石榴种质资源RAPD反应体系的引物筛选

以产自山东省枣庄市的18个石榴品种叶片为材料,采用CTAB法提取各石榴品种基因组DNA,对所提取的DNA采用紫外分光光度计测定D260nm和D280nm,并计算D260nm/D280nm,分析DNA的浓度和纯度.结果表明D260nm/D280nm均接近于1.8,纯度较高,能用于RAPD-PCR扩增的模板.以5种遗传背景差异大的石榴品种的DNA为模板,筛选用于石榴RAPD扩增的多态性引物,结果表明,通过分析多态性位点,筛选出重复性好、条带清晰的3条多态性引物S66、S1304、S1440,其多态性位点比例较高,分别为75.0％、60.9％、63.6％.     

花生高质量DNA提取方法研究

本文采用改良CTAB法提取花生的DNA,在药品浓度和时间掌握上有所不同,却得到意想不到的结果,提取出的DNA样品产率在57.07-87.27ng/ml.(稀释10倍) ,DNA 质量和纯度较高,260nm/ 280nm 光密度比值在1.8-2.0 之间.所提取的DNA可直接用于限制性内切酶酶切、连接,也可用于随机引物PCR 扩增.     

杉木总RNA 3种提取方法的比较研究

通过3种杉木总RNA提取方法的比较试验,找到了一种适用于杉木总RNA提取的新方法.用该方法提取杉木幼茎总RNA具有正常的光谱吸收,D_(260nm)/D_(280nm)比值为1.90～2.03,D_(260nm)/D_(280nm)比值为2.84～4.04,经琼脂糖电泳后,28S和18s RNA条带清晰,提取的RNA可用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA文库的构建,同时该方法还适用于青蒿总RNA的提取.     

铁皮石斛总RNA提取方法的比较研究

针对铁皮石斛富含多糖、多酚等次生代谢物质的特点,以铁皮石斛叶片为材料,比较改良CTAB-LiCl法、SDS法以及试剂盒法提取总RNA的质量,利用电泳检测、核酸蛋白仪浓度测定、RT-PCR等进行验证分析。结果表明,3种方法均能提取铁皮石斛叶片中总RNA,但提取效果存在差异。改良CTAB-LiCl法提取总RNA的28S和18S条带清晰、D_(600 nm)/D_(280 nm)与D_(260 nm)/D_(230 nm)分别为1.96和2.03,RNA完整性好、纯度高,RNA浓度在3种方法中最高,达到560.6 mg/L,RT-PCR扩增出目的基因片段条带最明显,适用于后续的分子生物学研究。     

小麦叶绿体DNA提取方法研究

以成熟的中国春小麦叶片为材料,采用改进的高盐-低pH方法提取叶绿体DNA,经琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增,结果表明:所提取的小麦叶绿体DNA纯度高(OD260/280=1.89,OD260/230=2.23),适于PCR反应、基因扩增和酶切鉴定等分子操作,为深入研究小麦叶绿体基因组奠定了基础。     

牡丹基因组AFLP银染反应体系的建立和优化

采用改进的SDS方法,从牡丹成熟叶片中提取基因组DNA,所得DNA样品的A260/A280值在1.7～1.8之间,琼脂糖凝胶电泳主带清晰、DNA纯度高、较少降解、不含酶反应抑制剂,可被MseⅠ和PstⅠ两种限制性内切酶完全酶切.通过酶切连接、预扩增、选择性扩增、银染等试验过程,成功建立了牡丹品种AFLP银染反应体系,得到了清晰的指纹图谱.对扩增结果进行聚类分析,得到了23个牡丹品种的聚类分析图.     

高质量竹黄菌全基因组DNA的提取方法比较

真菌的细胞壁,增加了提取基因组DNA的难度,为找到满足竹黄菌全基因组序列分析的高质量DNA的提取方法,分别使用改良CTAB法、蛋白酶K法和高盐沉淀法提取竹黄菌菌丝体的基因组DNA,并进行琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计测定浓度和纯度、ITS序列的PCR扩增和酶切检测。结果表明:3种方法提取等量竹黄菌菌丝体的基因组DNA,蛋白酶K法和高盐沉淀法均能得到较为完整的且大于15kb的DNA,改良CTAB法DNA发生降解;通过PCR和酶切检测,3种方法所得基因组DNA均能有效地进行相应的酶反应。综合考虑基因组DNA的浓度、纯度、完整性和有无降解等,蛋白酶K法提取得到的基因组DNA(浓度为233.495ng/μL,OD_(260)/OD_(280)为1.806)最适用于全基因组的序列分析。     

菊芋不同部位DNA提取的比较研究

分别以菊芋的茎段、叶片和块茎为材料,采用改良CTAB法分别提取菊芋3个部位的基因组DNA,用0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量,分别测定3个部位的DNA在A260和A280下的吸光值,根据A260/A280的值检测DNA的浓度和纯度,并以3个部位提取的DNA为模板进行ISSR扩增。结果表明：采用菊芋叶片提取DNA的产率最高,茎段次之,块茎最低。三个部位提取的DNA纯度均相近,提取叶片获得的DNA浓度最大,为163.2 ng·μL-1;其次是茎段,为137.4 ng·μL-1;块茎获得的DNA浓度最低,为95.5 ng·μL-1。菊芋不同部位提取的DNA模板对ISSR扩增没有明显影响,DNA浓度都能达到扩增的要求。菊芋3个部位提取的DNA质量均较好,可以进行后续的酶切和PCR扩增等实验。