改良CTAB方法快速提取小麦基因组DNA(英文)

[目的]旨在寻求一种微量、快速提取小麦DNA的方法。[方法]以小麦幼叶为材料,分别用改良CTAB法、改良SDS法和沸水浴法提取小麦叶片总DNA,通过琼脂糖凝胶电泳法、紫外吸收法和PCR检测DNA完整性和纯度。[结果]改良CTAB法提取的小麦基因组DNA质量和纯度高、无降解,每人每天可以轻松提取200个DNA样品,对转基因植株的PCR检测显示扩增目标条带清晰一致,无假阳性,试验结果理想。改良SDS法所提DNA纯度和浓度虽略不如改良CTAB法,但仍然符合实验要求。沸水浴法提取量少且杂质多,PCR无有效扩增,结果不理想。[结论]改良CTAB法提供了一种简便、快速微量小麦DNA提取方法,适用于PCR和其他分子生物学研究。     

凉粉草基因组DNA提取与分析

[目的]为分子生物学研究提供高质量、高产量的凉粉草总DNA。[方法]采用改良CTAB法提取总DNA,通过测定OD260/OD280值、琼脂糖凝胶电泳和RAPD扩增对所得DNA的浓度和质量进行检测,考察该方法对DNA的提取效果。[结果]改良CTAB法提取的总DNAOD260/OD280值为1.6～2.0;电泳条带清晰,完整性好,纯度高,总DNA分子量与λDNA相近;以所提DNA为模板进行RAPD扩增时,可得到稳定的扩增条带。[结论]改良CTAB法适合凉粉草基因组DNA的提取。     

燕麦种子基因组DNA不同提取方法的比较

为缩短DNA提取时间,省去种子萌发到幼苗培养等一系列过程,以燕麦种子为材料,用5种方法提取其基因组DNA,通过紫外分光光度法检测DNA的浓度和纯度,琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整性,以ITS2为引物将燕麦种子基因组DNA进行PCR扩增。结果表明:5种方法中除了传统CTAB法,其余方法都可以提取到燕麦种子基因组DNA,但不同方法提取到的基因组DNA的纯度、浓度存在差异,试剂盒法提取的DNA质量最好、纯度最高,但提取的DNA量少且成本高,改良CTAB法和高盐低pH法提取的DNA的纯度相近,都有少量的蛋白质和糖类的污染,改良SDS法提取的DNA纯度最低。     

几种橡胶基因组DNA提取方法的比较

[目的]比较4种提取橡胶叶基因组DNA方法,为后续研究根据需要采用不同的DNA提取方法提供依据。[方法]分别采用TIANGEN新型植物基因组DNA提取试剂盒提取法、E.Z.N.A.TMHigh Performance（HP）Plant DNA Kit提取法、CTAB法、改良的CTAB法提取橡胶基因组DNA,通过紫外分光光度计测定不同方法所提取DNA的纯度和浓度,并通过电泳和酶切检测。[结果]采用改良的CTAB法提取的橡胶基因组DNA纯度最高,质量最好;采用其他方法所得的基因组DNA均有不同程度的多糖多酚以及蛋白的污染。[结论]采用改良的CTAB法所提取的橡胶基因组DNA因其完整性好、浓度高、纯度高可用于对DNA质量要求高的试验中。若是后续研究对DNA质量要求不高,则可以选择试剂盒,省时省力。     

三种玉米DNA提取方法探究

采用改良CTAB法、改良SDS法、快速提取法分别以玉米种子、黄化苗叶片、正常生长期绿色叶片为材料提取细胞总DNA。结果表明用3种不同方法提取的DNA纯度符合分子生物学实验要求。不同部位的材料、不同的提取方法，DNA得率不同。玉米干种子优适用于在快速提取法中提取DNA；改良CTAB法、SDS法宜从玉米黄化苗叶片和正常绿色叶片中提取DNA。     

3种杜仲枝叶总RNA提取方法的比较

采用改良过的CTAB - LiCl法、RNApure Plant Kit法和RNAiso Plus法分别提取杜仲枝叶总RNA,以期筛选出适于杜仲枝叶高质量总RNA提取方法;用琼脂糖甲醛变性凝胶电泳检测总RNA的完整性,以紫外分光光度计检测总RNA的纯度和得率.结果表明,改良过的CTAB - LiCl法和RNApurePlant Kit法提取的RNA完整性好,纯度高,RT - PCR可获得目的基因cDNA片段;RNAiso Plus法得到的RNA降解严重,纯度低.改良过的CTAB - LiCl法和RNADure Plant Kit法提取杜仲枝叶总RNA完全能满足后续的RT - PCR和RACE等分子生物学研究.     

西南地区榧树属植物3种不同总DNA提取方法的比较分析

以西南地区榧树属植物叶片为材料,利用改良CTAB法,改良SDS法和试剂盒法提取其总DNA,采用分光光度计和琼脂糖凝胶电泳方法检测所得总DNA的得率和纯度,用PCR扩增的方法检测所得总DNA的质量,并对3种不同提取方法的结果进行比较分析。结果表明,3种不同提取方法提取到的总DNA都能满足后期分子标记的要求,其中,改良CTAB法得率最高但纯度稍差,改良SDS法次之,试剂盒法得率最低但纯度高。为了更好的进行后期的分子试验,选择试剂盒法提取纯度较高的DNA。     

中华桫椤DNA提取及ISSR分析

[目的]研究中华桫椤总DNA的提取方法。[方法]采用SDS法和改良CTAB法提取中华桫椤总DNA,通过电泳检测方法进行比较。[结果]用改良CTAB法得到的DNA浓度和纯度都较高,基本上无蛋白质、多糖等杂质。用改良CTAB法得到的总DNA进行ISSR-PCR扩增,谱带清晰,获得较好的效果。[结论]为提取高质量的DNA样品奠定了基础,并为探讨中华桫椤自然居群的遗传多样性和种群遗传结构及进一步保护和利用中华桫椤提供了分子遗传学依据,     

狗牙根基因组DNA提取方法的比较

以狗牙根的嫩叶为材料,在传统CTAB法的基础上加以改良,建立了狗牙根基因组DNA的CTAB提取方法.得到的DNA经核酸蛋白质分析仪测得A_(260)/A_(280)值处于1.69～2.02之间、A_(260)/A_(230)集中处于1.82～2.08之间,经琼脂糖凝胶电泳检测各样品具有一条明亮主带并无拖尾现象,经ISSR-PCR检测出现清晰稳定的条带,说明改良CTAB法提取得到的DNA完整性好,纯度高,适用于分子标记等分子生物学的研究.     

圆果黄麻成熟叶片总DNA提取及SRAP扩增体系的建立与优化

采用改良的CTAB法从圆果黄麻成熟叶片中提取基因组DNA,对DNA进行电泳检测、含量测定和SRAP分析,并对黄麻SRAP-PCR反应体系中主要影响因子进行了优化,建立了最佳反应体系.结果表明,改良的CTAB法能够提取高质量的DNA,DNA纯度和完整性都较好,经紫外分光光度计测定,D260nm/D280nm均在1.7-1...     

风信子DNA不同提取方法的效果比较

采用简易CTAB法、改良CTAB法、SDS-CTAB法、高盐法和CTAB-硅珠法等5种方法对风信子花蕾、叶片和鳞片基因组DNA进行提取.比较DNA纯度、电泳、得率等指标,结果表明:CTAB-硅珠法没有获得DNA,其他方法均可提出DNA;在纯度方面,简易CTAB法＞SDS-CTAB法＞改良CTAB法＞高盐法;在得率方面,简易CTAB法＞改良CTAB法＞高盐法＞SDS-CTAB法.简易CTAB法提取的DNA纯度较高,OD260/OD280为2.01,OD260/OD230为2.33,浓度为406.8ng·μL-1,得率为175.95ng· μL-1.花蕾、叶片适合风信子基因组DNA的提取.     

番茄基因组DNA提取探讨

以番茄幼嫩叶片为材料,通过CTAB和SDS 2种方法对番茄基因组DNA提取进行了比较研究。结果表明：2种方法均能提取完整且纯度较高的DNA,所得DNA用于PCR反应可得到清晰的扩增条带。     

绿色木霉基因组DNA不同提取方法的比较研究

为获得提取绿色木霉Tr9701孢子培养物DNA的简便方法,选取8种方法(破壁酶消解法、超声破碎法、-80℃冻融法、高盐溶液法、尿素溶液法、CTAB法、改良CTAB法、试剂盒法)提取DNA,再通过对提取物进行比色定量和PCR测定评价各种提取方法的优弊。结果表明,改良CTAB法和试剂盒法提取DNA的效果最好,可用于绿色木霉的后续分子生物学研究。     

生豆浆基因组DNA不同提取方法的比较研究

[目的]探讨适宜生豆浆的基因组DNA提取方法。[方法]以市售豆浆为材料,分别采用热解法、异丙醇沉淀法、CTAB法、SDS法、高盐低pH和异硫氰酸胍法以及它们的改良方法提取基因组DNA,并比较了以上方法的提取效果。[结果]除异丙醇沉淀法外,其他方法提取的基因组DNA均可满足PCR检测要求。同时,综合考虑基因组DNA的纯度和浓度,生豆浆基因组DNA提取方法的优劣依次为：改进高盐低pH法、高盐低pH法、改进CTAB法、改进异丙醇沉淀法、异硫氰酸胍法和改进热解法。[结论]这几种生豆粉基因组DNA提取方法均具有操作简单、耗时短、利于快速检测的优点。     

豆象干标本基因组DNA提取方法的改进

[目的]筛选豆象干标本基因组DNA的有效提取方法。[方法]以口岸截获时间不等的豆象干标本为材料,在传统方法上加以改进,对从干标本中提取豆象基因组DNA的方法进行了研究。将其所提取的基因组DNA的纯度和浓度与CTAB法和SDS法进行了比较,并对DNA进行了完整性及PCR验证。[结果]与CTAB法和SDS法相比,豆象干标本提取方法提取的DNA OD260/OD280值均在1.7~1.9,且浓度合适。DNA完整性及PCR验证结果表明,豆象干标本提取方法比较适合后续PCR试验的开展。[结论]豆象干标本提取方法适合该研究中豆象干标本基因组DNA的提取,可推广到检验检疫工作中截获豆象的检疫鉴定中,以缩短检验检疫工作周期,提高检验检疫工作准确性。     

4种镰刀菌基因组DNA提取方法的比较研究

[目的]寻找一种简便、高效的基因组DNA提取方法,为进一步开展镰刀菌等丝状真菌的分子生物学研究提供科学基础。[方法]采用改良的CTABS、DS、高盐沉淀和SDS-CTAB 4种方法提取8个镰刀菌菌株的基因组DNA,并对其进行质量测定及PCR分析,比较不同提取方法的效果。[结果]4种提取方法均可提取到基因组DNA,其抽提质量优劣依次为SDS、SDS-CTAB法、高盐沉淀法和CTAB法。其中采用SDS法可成功提取到所有供试菌株基因组DNA,而且DNA浓度和纯度均较高,RNA及其他杂质污染少。而高盐沉淀法和CTAB法提取到的基因组DNA不够完整或浓度较低。[结论]SDS法更适合于镰刀菌等丝状真菌基因组DNA的提取。     

DNA提取方法对转基因甘蔗PCR检测的影响

研究了不同提取方法和不同生长时期甘蔗提取的DNA对转基因甘蔗植株PCR检测的影响。结果表明,幼苗时期提取的甘蔗叶片模板DNA质量高于田间成熟植株;甘蔗幼苗时期的PCR检测易于成熟植株;CTAB法、SDS法和CTAB-SDS法提取的甘蔗叶片DNA均能满足幼苗期甘蔗抗性植株的PCR检测要求;对成熟转基因甘蔗植株而言,以CT...     

苜蓿基因组DNA的提取及RAPD反应组成优化探讨

比较了CTAB法和SDS法提取苜蓿基因组总DNA的效果,这两种方法得到的全基因DNA具有较好的完整性,但从DNA的提取纯度可以看出,CTAB法优于SDS法.实验对苜蓿RAPD反应条件进行了优化:在25μL反应体系中,含10×Buffer(20mM MgCl2),1UTaq酶,25ng的模板DNA,150 mol/L的dNTPs,0.2 mol/L引物.PCR反应程序为:94℃预变性3 min;94℃变性15 s,37℃退火30 s,72℃延伸1 min,35个循环;72℃延伸10 min;最后4℃保存.     

5种提取方法对甘蔗汁中DNA提取的效果

[目的]研究5种提取方法对甘蔗汁中DNA提取的效果。[方法]以甘蔗种茎中获得的蔗汁为材料,采用2种植物基因组提取试剂盒柱式法和磁珠法、SDS法、CTAB法及简化提取法5种方法提取DNA,对比所提取的DNA浓度、纯度及后续PCR扩增的影响。[结果]以SDS法提取获得的蔗汁DNA浓度最高,平均可达377.50 ng/m L。而柱式法的试剂盒,提取的DNA浓度最低,PCR检测没有能够获得特异的目标条带,不适合用于蔗汁DNA的直接提取。虽然简化法提取的DNA浓度较低,但是能够满足PCR扩增的要求,由于不涉及氯仿等有害物质,操作简单,适用于对DNA质量要求不高时的快速提取。[结论]SDS法最适合用于蔗汁中DNA的提取。     

3种桑蟥基因组DNA提取方法比较研究

为了探寻一种高效、稳定、廉价的桑蟥基因组DNA提取方法,通过采用CTAB法、蛋白酶K法和盐析法3种方法研究桑蟥基因组DNA的提取。对提取的DNA进行分光光度值的测定以及COI基因的扩增鉴定。结果表明：3种方法均可以提取基因组DNA,蛋白酶K法和CTAB法DNA获得率优于饱和NaCl法提取的DNA,3种方法提取的DNA都可用于PCR扩增实验。因此,在实际工作中可根据实验目的、条件选取最适合的方法。