外源DNA导入小麦后D0代的幼胚离体培养

对导入高粱、豌豆、长穗偃麦草等供体DNA后的10个春小麦组合进行了幼胚离体培养研究,结果表明,在胚龄为15 d左右,幼胚长1.5 mm左右时,剥取幼胚进行离体培养,愈伤组织诱导率平均为73.8%,绿苗诱导率平均为157.2%,幼胚平均直接成苗率为24.1%.经过离体培养挽救了为数不多的导入后代,并可进行加代培育,缩短了育种周期.     

一种有效提取无核荔枝幼胚总RNA的方法

笔者采用改良CTAB法从富含多酚的无核荔枝幼胚中提取总RNA,并用甲醛变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计对所提RNA质量进行检测,旨在为多糖、多酚含量较高的植物材料RNA的提取提供一种有效方法。1材料与方法1.1材料以海南无核荔枝花后20d的幼果为试材,剥离果皮,小心取出幼胚,液     

花生不同发育时期种胚离体培养研究

以花生品种农大花103不同发育时期的幼胚为外植体,采用组织培养的方法再生成花生植株。结果表明,花生幼胚通过组织培养能够正常发芽生长成植株的最短发育时期为果针入土后30 d,在该时期内花生幼胚的发芽率为97.99%,成苗率为76.06%,生长状态接近于正常成熟胚。以该品种成熟种胚为外植体,通过组织培养成熟种胚的发芽率达到了100%,成苗率达到了87%。     

水压式玉米幼胚提取装置的设计与试验

为提高玉米幼胚提取的效率和自动化程度,改进现阶段玉米幼胚提取装置不易操作和效率低的缺点,设计了一种水压式玉米幼胚提取装置。试验中发现,用水流冲击已去除种皮的玉米胚和胚乳,可以分离玉米幼胚和胚乳,再通过分级筛选提高幼胚的提取纯度。对提胚装置进行了结构设计和单片机智能同步系统设计。最后在样机上进行了玉米幼胚提取的试验,正交试验和单因素试验结果表明:在脱胚压强0. 30~0. 40 MPa、脱胚距离50~60 mm、脱胚时间12 s条件下,装置的幼胚实际脱胚率达到90%以上,满足装置的设计要求。     

一种有效提取无核荔枝幼胚总RNA的方法

笔者采用改良CTAB法从富含多酚的无核荔枝幼胚中提取总RNA，并用甲醛变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计对所提RNA质量进行检测，旨在为多糖、多酚含量较高的植物材料RNA的提取提供一种有效方法。     

核桃胚营养代谢盛期总RNA提取方法研究

核桃是21世纪的超级食品.对核桃胚总RNA的提取是开展核桃胚发育和代谢分子生物学研究的基础环节.本试验针对核桃营养代谢盛期胚的特点,通过对改进的CTAB法、常规的CTAB法、TRIZOL法和通用植物总RNA提取试剂盒(Bioteke)四种不同总RNA提取方法的比较与分析,表明采用改良CTAB法提取的总RNA完整性较其他方法好,28 S、18 S、5 S条带清晰无明显降解,OD260/OD280值为1.875,无蛋白质污染,易于进行RT-PCR和cDNA的合成,是核桃胚营养代谢盛期的总RNA提取的有效方法.     

影响大麦植株再生及基因枪转化因素的研究

以2个澳大利亚啤酒大麦品种为供试材料,研究了基因转化和植株再生过程中Cu2+浓度、不同受体材料、高渗处理对基因转化频率的影响.结果表明,Cu2+浓度为5.0μmol·L-1时可以显著地促进胚性愈伤组织的形成及植株再生;预培养9d的幼胚愈伤组织作为受体材料其愈伤组织的抗性率明显高于剥取当天和预培养3～4d的幼胚;基因枪轰击前6h和轰击后18h,用0.5mol·L-1的甘露醇进行渗透处理,可提高愈伤组织的再生频率.     

一种有效的提取月见草种胚RNA的方法

介绍了1种改进的提取月见草种胚RNA的CTAB-LiCl提取法,该法能有效地去除种胚中带有的大量多酚、多糖和脂质的干扰,所得RNA样品经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳分析证明具有较高的纯度和完整性.方法简便、经济、有效,所提取的RNA质量较高,可直接用于cDNA合成、cDNA文库的构建以及RACE等分子生物学操作.     

花生的胚和胚乳的发育

观察了花生胚和胚乳的发育及其相关性。胚发育属紫苑型,其发育过程可分为:球胚前的原胚、球胚、心形胚、鱼雷形胚、幼胚、扩大生长胚和成熟胚各期。在子叶中淀粉粒积累先于蛋白质的积累。胚乳发育属核型。首次观察到花生胚乳瘤。胚乳细胞化以珠孔端开始。胚乳细胞层次少,最终不充满胚囊腔,种子成熟,胚乳完全消失。     

岩白菜幼叶总RNA的提取方法研究

为了筛选出提取岩白菜幼叶总RNA的最佳方法,为岩白菜的转录组测序提供技术支撑,本文采用6种试剂盒法提取岩白菜幼叶的总RNA,通过凝胶电泳和BIO-RAD核酸蛋白检测仪检测提取的RNA样品的质量和纯度,并对提取效果进行了分析。结果表明:用Trizol Kit、Trizol A~+Kit、Transzol Up Kit提取的幼叶总RNA没有28S rRNA和18S rRNA条带;用inun PREP Plant RNA Kit提取的RNA具有28S rRNA和18S rRNA条带,但条带模糊、含量低;用Transzol Plant Kit和Easy Pure Plant RNA Kit提取的RNA具有28S rRNA和18S rRNA这2条清晰的条带,但后者提取的总RNA的得率和纯度更高。综合考虑后认为Easy Pure Plant RNA Kit法是快速提取岩白菜幼叶总RNA的最佳方法。     

mCTAB-dLiCl法高效提取花生各组织部位RNA及其验证

[目的]探讨花生不同组织部位RNA提取方法,为开展花生分子生物学研究奠定基础.[方法]在CTAB法的基础上,设计一种改良的mCTAB-dLiC1法,其使用高质量体积分数的KAC除去组织中的多糖,使用两次10.0 mol/L的LiC1沉淀RNA,采用琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量,核酸蛋白分析仪测定RNA纯度,并通过逆转录、RT-PCR和cDNA-SCoT验证其质量.[结果]采用mCTAB-dLiC1法的RNA产率为554.80 μg/g,RNA的A260/A280比率为1.89,RNA非变性琼脂糖凝胶电泳未出现可见的DNA条带;扩增的28S和18S条带比值为2∶1,且条带清晰无拖尾现象;提取的RNA通过逆转录、RT-PCR扩增和cDNA-SCoT扩增验证,均获得较好的扩增效果,获得的RNA和cDNA质量好.[结论]mCTAB-dLiCl RNA提取方法是一种高效提取花生各组织部位RNA的方法,可在花生分子生物学研究中应用.     

花生种子不同部位脂肪氧化酶同工酶的鉴定研究

[目的]为了筛选脂肪氧化酶缺失的花生品种。[方法]根据花生种子脂肪氧化酶同工酶等电点差异,利用等电聚焦电泳技术,对6份花生种子不同部位的脂肪氧化酶进行鉴定分析。[结果]完整的花生种子脂肪氧化酶同工酶有3条带,子叶脂肪氧化酶同工酶有2条带,种胚的脂肪氧化酶同工酶有7条带;花生种胚脂肪氧化酶同工酶的IEF-PAGE图谱有差异,除品种P86呈现6条带以外,其他品种均呈现7条酶带,P86缺失1条带;相同品种花生种子不同部位的脂肪氧化酶的电泳图谱不同。[结论]脂肪氧化酶主要集中在花生的种胚部分。     

不同方法提取吴茱萸叶片基因组DNA和RNA的比较

分别研究对比了3种不同方法提取吴茱萸叶片基因组DNA和RNA的质量,以确定适合吴茱萸叶片基因组DNA和RNA的提取方法。采用紫外分光光度法和普通电泳检测法比较了常规CTAB法、SDS法和改良CTAB法提取吴茱萸叶片基因组DNA的效果;采用紫外分光光度法和非变性电泳检测法比较了酚-SDS法、Trizol法和改良异硫氰酸胍法提取吴茱萸叶片RNA的效果。结果表明,分别采用不同方法提取的吴茱萸叶片基因组DNA和RNA的质量差异较大。常规CTAB法和SDS法无法提取出高质量的吴茱萸叶片基因组DNA,而改良CTAB法提取效果较好;酚-SDS法和Trizol法不适合高质量吴茱萸叶片RNA的提取,而改良异硫氰酸胍法的提取效果良好。     

紫外线胁迫的花生幼果cDNA文库构建与RS cDNA的分离

紫外线胁迫可导致花生产生白藜芦醇的诱导合成防御反应,本研究在利用UV处理花生幼果、激发花生幼果防御反应的基础上提取总RNA,应用SMART-cDNA文库构建试剂盒构建了花生幼果的cDNA文库.该文库含有1.0×106独立克隆,插入片段平均1 kb左右.利用所构建的cDNA文库,采用96孔板PCR筛选方法,分离获得2个白藜芦醇合成酶cDNA.     

Cytoplasmic extraction: polyribosomes and heterogenous ribonucleoproteins without associated DNA

Two methods are described for preparing cytoplasmic extracts from sea urchin embryos. One method, involving homogenization, yields DNA structures that cosediment with polyribosomes and subribosomal ribonucleoproteins. In addition this method also yields extraneous structures containing RNA that cosediment with polyribosomes. The DNA is not associated with polyribosomes, as shown by buoyant density analysis. Furthermore, this DNA appears to be spurious, because its release into a cytoplasmic extract does not occur when a different method of cell disruption, involving passage of embryos through a hypodermic needle, is used. With this second method, polyribosomes are obtained without extraneous cosedimenting RNA structures and subribosomal ribonucleo-proteins are obtained in the virtual absence of DNA.     

花生组织培养研究进展

花生组织培养对于品种改良、新品种繁殖、遗传转化和种质保存等具有重要意义．本文概述了花生苗的再生培养、体细胞胚的诱导培养、花药培养、远缘杂种胚营救培养、原生质体培养和遗传转化的研究进展,并展望了花生组织培养未来的发展     

花生子叶RNA提取方法比较与分析

以HY22组培苗为材料,比较改良胍酸酚抽提法、改良CTAB法及离心柱式试剂盒法提取RNA的效果,以筛选出适合花生子叶RNA提取的方法。结果表明：试剂盒法由于样品在通过离心柱时会出现阻塞现象,易使RNA提取结果受到较大影响,而改进后的胍酸酚抽提法与改良CTAB法则能避免该情况且更节约成本;经紫外分光光度法与电泳检测,改进后的两种方法的RNA提取效果均较好;RT—PCR结果表明,提取的总RNA可直接用于分子克隆和基因表达分析等分子生物学实验。     

花生子叶不定芽的诱导和组织细胞学观察

以MS＋6.79μmol/L2,4-D＋22.19μmol/L6-BA为诱导培养基,以花生成熟种子子叶为外植体,诱导出大量丛生芽和少量体细胞胚;组织细胞学观察发现,子叶外植体不经过愈伤组织,直接诱导分化出丛生芽和体细胞胚,属于直接发生途径;并且子叶丛生芽和体细胞胚起源于外植体表皮或皮层细胞,为外起源方式。     

花生果种皮特异表达基因候选片段的分离

应用改良的琼脂糖凝胶电泳展示DDRT-PCR产物的方法分离花生果种皮特异表达基因,共分离出24条差异表达片段.经测序后排除重复,最终得到8条差异片段.其中1条为花生上已知基因片段,余下7条均为花生上尚未报道过的基因.此7个片段序列已登录Genbank,其登录号分别为DQ450065、DQ450066、DQ450067、DQ450068、DQ450069、DQ450070、DQ450071.同时本研究还对应用琼脂糖电泳分离DD-PCR产物的方法进行了探讨.