氯硝柳胺对肺癌细胞株顺铂敏感性的影响

目的 研究氯硝柳胺对肺癌细胞株顺铂敏感性的影响.方法 氯硝柳胺和(或)顺铂处理人肺癌细胞株A549及顺铂耐药细胞株A549/DDP,用CCK-8法、流式细胞术检测细胞增殖、凋亡变化.结果 氯硝柳胺呈剂量依赖性抑制A549、A549/DDP细胞增殖,24h IC50分别为(2.607±0.06)、(1.135±0.09) μmol/L.氯硝柳胺联合顺铂明显增加A549/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率(P＜0.05).结论 氯硝柳胺可抑制肺癌细胞生长和增加顺铂耐药细胞的敏感性.     

款冬花多糖对肺腺癌A549细胞生长及凋亡的影响

目的观察款冬花多糖对人非小细胞肺癌A549生长及凋亡的影响,探讨其体外的抗肿瘤效应。方法体外培养A549细胞,以不同浓度的款冬花多糖为实验组,并设对照组,CCK8法测细胞增殖抑制效应、荧光倒置显微镜观察药物对细胞凋亡的影响,流式细胞术检测A549细胞中P53和Bcl-2蛋白表达情况。结果不同浓度款冬花多糖作用A549细胞24h增殖抑制明显(P<0.05),其抑制效应具有剂量依赖的特点并可诱导A549细胞凋亡,同时上调p53基因表达、下调bcl-2基因表达(P<0.05)。结论款冬花多糖可抑制A549细胞的生长且增殖抑制效应具有剂量依赖性,并可诱导肿瘤细胞凋亡,其抗肿瘤效应可能与细胞凋亡相关基因表达的调控有关。     

4-氨基吡啶抑制耐顺铂肺癌细胞系A549/DDP侵袭转移

目的 探讨4-氨基吡啶(4-AP)对耐顺铂肺癌细胞系A549/DDP侵袭转移的影响及分子机制.方法 将不同浓度4-AP处理A549/DDP细胞48 h,Transwell和Boyden法观察肺癌细胞迁移侵袭能力,Western blot检测细胞侵袭转移相关的调控上皮-间质转化(EMT)蛋白.结果 5 mmol/L、7 mmol/L 4-AP组细胞迁移、侵袭数明显少于对照组(P＜0.01或0.05),其中7 rnmol/L组更显著.与对照组比较,4-AP组细胞上皮型钙粘附蛋白(E-cadherin)表达上调,神经型钙粘附蛋白(N-cadherin)和Snail表达下调.结论 4-AP可能通过调控EMT蛋白的表达抑制耐顺铂肺癌细胞A549/DDP侵袭转移.     

FBXO31基因促进顺铂诱导的肝癌细胞凋亡

目的 探讨FBXO31基因对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响.方法 通过脂质体转染法将FBXO31基因表达质粒转染至肝癌HepG2细胞,再用2 mg/L顺铂处理,分别用MTT、流式细胞术、免疫印迹检测细胞活性、凋亡、FBXO31蛋白表达.结果 与pcDNA组比较,FBXO31组细胞活力显著降低,细胞凋亡明显增多,FBXO31蛋白表达显著升高(P＜0.01或0.05).结论 上调FBXO31基因表达促进顺铂诱导的肝癌细胞凋亡.     

番茄红素通过下调异柠檬酸脱氢酶1诱导胃癌细胞凋亡

目的 探究番茄红素对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制.方法 不同剂量番茄红素处理胃癌细胞株SGC-7901、MGC-803,用MTT法检测细胞增殖,Hoechst 33258染色、流式细胞仪检测细胞凋亡、线粒体膜电位(MMP)、活性氧(ROS),免疫印迹检测异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)、IDH2蛋白表达.结果 番茄红素呈剂量依赖性抑制SGC-7901、MGC-803细胞增殖.大于25 μmol/L番茄红素诱导SGC-7901细胞凋亡,增加ROS水平;50 μmol/L番茄红素降低MMP,下调IDH1蛋白表达(P＜0.01或0.05).结论 番茄红素可抑制胃癌细胞增殖、诱导凋亡;促凋亡机制可能是通过下调IDH1,阻断细胞ATP生成和提高细胞内ROS.     

内质网应激在肺泡上皮间质转分化发生中的作用

目的 探讨衣霉素诱导的内质网应激在肺泡上皮细胞-间质转分化(EMT)中的影响及作用机制.方法 以质量浓度为1.25、2.5、5.0 mg/L的衣霉素(TM)分别处理人肺腺癌上皮细胞A549 24 h,MTT法检测细胞活力;RT-PCR和免疫印迹法检测GRP78、CHOP、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、Smad2/3、转录因子Snail的表达;以5μg/L TGF-β1分别处理A549细胞24 h或48h后,免疫印迹法检测GRP78和p-elF2α的表达.结果 1.25 mg/L的TM处理A549细胞24 h后,GRP78 mRNA和蛋白表达升高,CHOPmRNA表达上调;E-cadherin蛋白表达下降,Smad2/3活化,Snail表达上调.而TGF-β1处理A549 24 h,GRP78和p-elF2α表达均上调.结论 衣霉素诱导的内质网应激可介导A549细胞发生EMT,同时EMT发生过程中伴随着内质网应激的发生.     

三叶因子3对非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响

目的探讨TFF3基因在非小细胞肺癌中的作用及其对凋亡的影响。方法免疫组织化学法检测组织芯片31例肺腺癌、21例肺鳞癌、10例正常肺组织TFF3表达阳性率;慢病毒包装TFF3基因ORF序列及TFF3-shRNA基因质粒、转染、嘌呤霉素筛选获得稳定过表达及沉默TFF3基因的A549细胞株;实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)和蛋白质印迹(Western blot)法验证TFF3基因和蛋白表达水平,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和信号通路分子Akt表达水平。流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果肺腺癌和鳞癌组织TFF3蛋白阳性表达率显著高于正常肺组织(P0.05),Ⅲ级肺癌组织中TFF3阳性表达率高于Ⅰ～Ⅱ级(P0.05),有淋巴结转移的肺腺癌和鳞癌组织中TFF3阳性表达率高于无淋巴结转移组织(P0.01)。过表达TFF3的A549细胞(A549-TFF3)中TFF3基因及蛋白水平显著高于对照组,沉默TFF3基因的A549细胞(A549-shTFF3)中TFF3 mRNA及蛋白水平较对照组明显降低(P值均0.01)。Western blot检测Bcl-2/Bax、p-Akt、p-Akt/Akt在A549-TFF3组显著高于对照组(P0.01);在A549-shTFF3组Bcl-2/Bax、p-Akt表达水平显著低于对照组(P0.01),p-Akt/Akt表达水平低于对照组(P0.05),Akt表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P0.05)。流式细胞结果显示A549-TFF3细胞凋亡率较低(P0.01),A549-shTFF3细胞凋亡率明显高于对照组(P0.01)。结论非小细胞肺癌组织TFF3高表达,与病理分级及淋巴结转移有相关性。过表达TFF3在非小细胞肺癌细胞中可能通过激活Akt信号通路抑制肺癌细胞凋亡,促进肿瘤细胞恶性增生。     

长链非编码RNA-PVT1在顺铂诱导DNA损伤修复中的作用机制

目的 研究长链非编码RNA-PVT1对顺铂诱导DNA损伤修复的影响及其作用机制.方法 建立顺铂诱导非小细胞肺癌细胞株A549细胞DNA损伤模型,用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测PVT1表达.通过siPVT1沉默A549细胞中PVT1表达,用qRT-PCR和Western blot检测核苷酸切除修复(NER)相关基因表达.用RNA免疫共沉淀(RIP)检测PVT1与ERCC1相互作用.结果 顺铂处理A549细胞明显下调PVT1表达.沉默PVT1后A549细胞中γH2AX表达显著增高,而NER途径中关键基因如ERCC1、DDB2表达明显降低.RIP实验表明PVT1可与ERCC1蛋白直接相互作用.结论 PVT1可能通过调节NER途径促进顺铂诱导DNA损伤修复.     

瘤背石磺多糖对人宫颈癌细胞的体外抑制作用

体外试验研究瘤背石磺多糖（Onchidium reevesii polysaccharides, OSP）和硫酸酯化修饰后瘤背石磺多糖（Sulfated Onchidium reevesii polysaccharides, S-OSP）对Hela人宫颈癌细胞生长的影响,并以阳性药物顺铂(0.5 μg/ml、0.75 μg/ml、1.5 μg/ml)作为对照。将不同浓度（50 μg/ml、75 μg/ml、150 μg/ml）的OSP和S-OSP作用于Hela细胞,用CCK-8法分析Hela细胞在12h、24h、48h和72h的增殖情况,用流式细胞仪分析细胞周期,并应用qRT-PCR检测相关凋亡基因的表达变化。结果表明OSP和S-OSP均能降低Hela细胞活性并诱导其凋亡,而且S-OSP比OSP更能显著抑制Hela细胞增殖活性（P<0.05）,表明硫酸酯化修饰改变了多糖结构进而影响多糖抗肿瘤活性。作用48h后,三种浓度OSP组Hela细胞生长抑制率分别为60%、67%、71%;S-OSP组Hela细胞生长抑制率分别为74%、77%、84%;顺铂组Hela细胞生长抑制率分别为82%、86%、90%。流式细胞术检测显示OSP和S-OSP作用24h后,细胞早期和晚期凋亡的比率显著（P<0.05-0.01）,G0/G1期细胞比例增多,S期细胞比例不断降低;实时荧光定量表明促凋亡基因Caspase-3的表达量随药物浓度的提高显著增加,抗凋亡基因Bcl-2和Bcl-xl的表达量随药物浓度的提高无明显变化,说明OSP和S-OSP可通过调节Caspase信号通路诱导Hela细胞凋亡。     

饥饿诱导p53缺失猪成纤维细胞自噬促进凋亡

【目的】探究p53基因对饥饿诱导猪成纤维细胞(PFCs)形态、增殖、自噬及凋亡的影响,为进一步研究p53基因与肿瘤发生发展的分子机制提供理论依据。【方法】用EBSS、Baf A1和EBSS+Baf A1分别处理p53wt和p53-/-2株PFCs 2 h后,观察细胞形态变化并检测细胞的增殖、凋亡以及ATG9A和Bcl-2蛋白的表达情况。【结果】与对照组相比,EBSS和EBSS+Baf A1处理下p53wt与p53-/-的PFCs均发生皱缩和长出丝状伪足;在p53-/-PFCs中,其细胞的增殖率明显下降,ATG9A蛋白的表达水平显著或极显著上调(P0.05或P0.01),Bcl-2蛋白的表达水平无显著变化(P0.05);在p53wt PFCs中,Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05);EBSS处理下,p53-/-PFCs的凋亡比率显著升高(P0.05)。与p53wt PFCs相比,p53-/-PFCs的形态变化率极显著下降(P0.01),其细胞的增殖率显著升高(P0.05),ATG9A蛋白表达水平显著或极显著升高(P0.05或P0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著或极显著下降(P0.05或P0.01)。【结论】饥饿诱导p53缺失猪成纤维细胞自噬促进了凋亡的发生,这为进一步研究p53基因与自噬、凋亡及肿瘤发生的分子机制提供了重要的理论依据。     

川芎嗪逆转人鼻咽癌顺铂耐药细胞系多药耐药性的实验研究

目的探讨川芎嗪（TMP）对人鼻咽癌顺铂（DDP）耐药细胞系（CNE2/DDP）多药耐药性的逆转作用。方法 TMP处理CNE2/DDP细胞后,分别用MTT法、流式细胞术、RT-PCR检测其对DDP耐药性的逆转作用、细胞凋亡和bcl-2mRNA表达的影响。结果 50、100mg/LTMP处理后,CNE2/DDP细胞对DDP耐药性的相对逆转率分别为57.50%、85.72%,差异有统计学意义（P〈0.01）。与对照组比较,50mg/LTMP处理可使CNE2/DDP细胞凋亡率明显增高（P〈0.01）,而bcl-2mRNA表达明显降低（P〈0.05）。结论 TMP可部分逆转CNE2/DDP细胞对DDP的耐药性。TMP可增强DDP对CNE2/DDP细胞的促凋亡作用,下调bcl-2mRNA表达。     

原花青素对Aβ25—35诱导PC12细胞氧化应激反应的保护作用

目的探讨原花青素对β-淀粉样肽25－35（Aβ25-35）诱导PCI2细胞凋亡及氧化应激反应的影响。方法3×10^8／LPCI2细胞培养24h,分别加入培养液（对照组）、10μmol／LAβ25-35（诱导组）、30mg/L原花青素＋10μmol／LAβ25－35（保护组）。24h后收集细胞,以Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡,比色分析测定MDA、H2O2含量和CAT活性。结果诱导组细胞可见凋亡特异性核固缩、核碎裂;MDA和H2O2含量与对照组比较明显增加（P〈0．01）,CAT活性明显降低（P〈0．05）。保护组与诱导组比较,凋亡特异性核固缩、核碎裂减少;MDA和H2O2含量明显降低（P〈0．01）,而CAT活性显著增强（P〈0．01）。结论原花青素可抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡,可能与其抑制Aβ25-35引起的氧化应激反应有关。     

存活素siRNA表达质粒对化疗药物抑癌作用的影响

目的探讨存活素siRNA表达质粒（mU6／survivin质粒）对化疗药物抑癌作用的影响。方法采用MTT法检测mU6／survivin质粒与多种常规肿瘤化疗药物对乳腺癌MCF-7细胞增殖的联合作用。结果比较单纯化疗药物作用组的各相应浓度点,siRNA表达质粒mU6／survivin与化疗药物顺铂、环磷酰胺、5．氟尿嘧啶或秋水仙碱合用组对肿瘤细胞MCF-7的细胞增殖抑制率均明显提高,差异均有统计学意义（P〈0．01）;对靶向DNA药物如顺铂、环磷酰胺和5-氟尿嘧啶的抗癌性能具有显著的协同增强作用（二者合用效应Q值均〉1）,但对靶向微管的药物秋水仙碱没有相加作用（Q值〈1）。结论在解除肿瘤细胞中存活素功能的基础上进行药物化疗,可能是肿瘤治疗的一个新的可行方向。     

不同规格乌苏里拟鲿耗氧率及窒息点研究

采用流水封闭式装置,测定了不同大小乌苏里拟鲿的耗氧率和窒息点及其24h的昼夜变化情况。结果表明,大（16．97±1．94g）、中（1．06±0．06g）和小规格（0．10±0．01g）乌苏里拟鲿耗氧率分别为0．1608、0．1912和0．2750mg／h·g,且各组间差异极显著（P〈0.01）;窒息点分别为0．4114、0．5719和0．8652mg／L,且各组间差异极显著（P〈0.01）。所有规格乌苏里拟鲿晚上11：00耗氧率最高,其中大规格和中规格晚上（20：00-8：00）耗氧率持续高于白天（8：00—18：00）,且分别在白天和晚上两时段内耗氧率平稳,而小规格乌苏里拟鲿昼夜耗氧率没有明显规律性变化;所有规格乌苏里拟鲿晚上平均耗氧率均高于白天。     

肺孢子菌感染大鼠血清同型半胱氨酸变化分析

目的探讨肺孢子菌肺炎（PCP）的发病机制．方法纯系Wistar雌性大鼠36只随机分为PCP模型组（P组12只）、TMP—SMZ治疗组（S组14只）及正常对照组（N组10只）．P组及S组于大鼠后腿肌注地塞米松（每次1mg／只,每周2次、间隔3d）,诱导建立PCP动物模型．N组同法肌注生理盐水．镜检确认PCP诱导成功后,S...     

不同硒水平下牛维生素E消化率的测定

选用5岁、平均体重为500 kg的西门塔尔阉牛3头,以玉米青贮和精料补充料为基础饲粮,采用3×3拉丁方设计,在饲粮中分别添加硒0.1、0.2和0.3 mg· kg-1和维生素E 30、60和90 U.kg-1,共9组,硒水平（mg·kg-1）/维生素E水平（U·kg-1）分别为0.1/30（1组）、0.2/30（2组）、0.3/30（3组）、0.1/60（4组）、0.2/60（5组）、0.3/60（6组）、0.1/90（7组）、0.2/90（8组）、0.3/90（9组）,研究在饲粮中添加不同水平的硒对维生素E表观消化率的影响.结果表明,处理8和9组极显著高于2和4组（P＜0.01）,显著高于1、3、5和7组（P＜0.05）;1、3、5、6和7组显著高于2和4组（P＜0.05）.3、6和7组的GOT活性显著高于其余组（P＜0.05）.3和6组的GPT活性极显著高于1组（P＜0.01）,显著高于2、4、5、7、8和9组（P＜0.05）;2、4、5、7、8和9组显著高于1组（P＜0.05）.3、6和9组的GSH-Px活性极显著高于1、4和5组（P＜0.01）,显著高于2、7和8组（P＜0.05）;2、7和8组显著高于1、4和5组（P＜0.05）.研究表明,不同硒水平极显著影响牛维生素E消化率.     

白花蛇舌草注射液对荷瘤小鼠免疫功能影响的研究

研究白花蛇舌草注射液对荷瘤小鼠免疫功能的影响。应用比色法,分别测定白花蛇舌草注射液在高(15 mg生药/kg)、中(7.5 mg生药/kg)、低(3.75 mg生药/kg)3种剂量作用下,荷瘤小鼠脾脏NK细胞毒指数、脾细胞的增殖、腹腔巨噬细胞吞噬百分率及指数、血清凝集素活性和脾细胞IL-2活性的变化。与荷瘤对照组比较,白花蛇舌草注射液各剂量组可显著提高NK细胞活性(P0.01,P0.05);增强脾细胞增殖(P0.01,P0.05);显著提高腹腔巨噬细胞的吞噬功能(P0.001,P0.01,P0.05);显著增加血清中抗羊红细胞凝集素值(P0.001、P0.01);高、中剂量组可明显提高脾脏IL-2活性(P0.01,P0.05)。白花蛇舌草注射液具有显著提高荷瘤小鼠免疫功能的作用。     

生长因子和体细胞共培养对牛体外受精的影响

为研究表皮生长因子（EGF）和胰岛素（Insulin）对牛卵母细胞体外发育的影响以及体细胞共培养对体外受精胚胎体外发育的影响,将获取的牛卵泡卵母细胞在含有30μg,LEGF或50mg／L Insulin或30μg／LEGF＋50mg／L Insulin的成熟培养液中进行成熟培养,比较不同生长因子对牛卵母细胞体外成熟和体外受精的影响;将受精卵用颗粒细胞单层培养系统或牛输卵管上皮细胞单层培养系统进行体外培养,比较体细胞共培养系统对体外受精胚胎体外发育的影响。结果表明,成熟培养液中添加30μg／LEGF或者30μg／LEGF＋50mg／L Insulin可以显著提高卵母细胞的成熟率和受精后的卵裂率（P〈0．05）;输卵管上皮细胞共培养系统可以显著提高受精后的囊胚发育率（P〈0．05）,可以用于牛体外受精胚胎的体外培养。     

小鼠脾Th17细胞分化模型中IL-17F、RORα、Stat3 mRNA表达

目的研究小鼠脾Th17细胞分化模型中IL-17F、RORα、Stat3表达。方法提取C57/BL6J小鼠脾淋巴细胞,采用免疫磁珠纯化CD4-＋CD62L-＋T细胞,分为对照组及Th17分化组。对照组用RPMI1640培养;Th17分化组加抗小鼠CD3ε、CD28、IFN-γ、IL-4单抗及IL-6、TGF-β1、IL-23孵育。培养48 h后,采用Real-time PCR检测两组细胞IL-17F、RORα、Stat3 mRNA表达。结果 Th17分化组IL-17F、RORα、Stat3 mRNA表达明显高于对照组（P〈0.01）。结论小鼠脾Th17细胞分化过程中伴有RORα、Stat3 mRNA表达上调。     

重组线虫抗凝蛋白rAcaNAP9抗大鼠血栓的效果观察

目的观察重组线虫抗凝蛋白rAcaNAP9抗大鼠颈总动脉血栓的效果。方法将40只SD大鼠随机分为rAcaNAP9低剂量组（40μg/kg）、中剂量组（200μg/kg）、高剂量组（1 mg/kg）、阳性药对照组（肝素钠,1650 U/kg）和模型对照组共5组,每组8只。分离大鼠一侧颈总动脉,从鼠尾静脉给药后,即用血栓生成仪对动脉进行恒流电刺激5min,检测受刺激血管的堵塞程度。结果模型对照组的血管堵塞程度和rAcaNAP9低、中、高3个剂量组比较差异均有统计学意义（P〈0.05或0.01）。结论重组线虫抗凝蛋白rAcaNAP9具有抗大鼠颈总动脉血栓效果。