铁皮石斛与金钗石斛杂交及回交后代的SSR鉴定

[目的]鉴定铁皮石斛与金钗石斛杂交F_1代和回交后代的真假性。[方法]以14株铁皮石斛与金钗石斛杂交F_1后代及18株以铁皮石斛为母本回交后代为试验材料,从24对特异性SSR引物中筛选引物用以鉴定。[结果]从24对SSR基因组引物中,筛选出4对双亲多态性引物。用该4对石斛特异性引物可从14株杂交F_1群体中鉴定出11株真杂交种,占杂交群体的78.6%;18株回交群体中,被4对引物同时鉴定出真杂种率达38.9%。[结论]利用SSR分子标记技术鉴定石斛种间杂交与回交是可行的,对提高石斛育种效率、缩短育种年限和石斛种质资源的保护与利用具有重要意义。     

铁皮石斛和金钗石斛杂交后代的分子鉴定

铁皮石斛和金钗石斛是《中华人民共和国药典(2015版)》收录的2种药用石斛,具有重要的药用价值和经济价值。然而,目前关于这2种石斛药用价值的遗传基础研究和优良新品种选育等相对较弱。本研究以铁皮石斛和金钗石斛2个亲本,以及它们的131个F_2代杂交单株作为研究对象,从320对SSR引物中筛选出特异性引物,用于铁皮石斛和金钗石斛杂交后代的真假杂种鉴定。结果表明,3对石斛属特异性SSR引物DNt SSR013、DNt SSR147和DNt SSR150,可将杂交群体扩增带型分为真杂交种型、母本型、父本型、缺失型,进而从131个杂交群体F_2代中共鉴定出119个真杂交种,真杂交种占杂交群体的91%。因此,利用SSR分子标记技术鉴定石斛杂交群体是可行的,相关结果为铁皮石斛和金钗石斛的遗传图谱构建,石斛多糖和石斛碱等活性成分QTL定位奠定了基础。     

霍山产3种石斛多糖含量变化规律

[目的]研究霍山产3种石斛多糖含量变化规律。[方法]采用硫酸-苯酚法测定霍山石斛、霍山铁皮石斛和霍山细茎石斛3种霍山产石斛在8个不同生长阶段的多糖含量,并分析了其变化的规律和影响因素。[结果]在组培苗繁育阶段,石斛多糖含量在相对较低的水平上稳步增长,且呈现出霍山铁皮石斛霍山石斛霍山细茎石斛的规律;石斛在栽培2年后多糖含量达到最高,品种间的规律表现为霍山石斛霍山铁皮石斛细茎石斛,其中霍山石斛2年生茎多糖含量高达35.74%,在3种石斛中是最高的。[结论]试验研究了霍山产3种石斛多糖含量变化规律,为石斛的繁育、栽培以及应用提供了依据。     

SRAP标记在秋石斛杂交后代鉴定中的应用

基于序列相关扩增多态性(SRAP)分子标记对秋石斛四面佛与水芙蓉的杂交后代进行鉴定,并进行遗传多样性和聚类分析.结果显示,共筛选出5对SRAP引物组合用于杂交后代真实性的鉴定,供试17个杂交后代新株系均鉴定为真杂种;5对SRAP引物组合共扩增到23个多态性条带,多态性比例为88.46％.从聚类结果可以看出,绝大多数杂交后代在亲缘关系上先倾向于母本后倾向于父本;遗传相似系数分析结果表明,杂交后代与母本间的遗传相似系数大于父本,说明供试杂交后代在遗传上更偏向于母本,与聚类结果吻合.由研究结果可以看出,所筛选的5对SRAP引物组合用于秋石斛杂交后代鉴定是可行的.     

霍山石斛生物碱的提取及铁皮石斛的鉴别

采用超声波辅助酶法提取霍山石斛中的生物碱，通过对固液比、超声时间、超声功率、酶解时间、复合酶（纤维素酶和果胶酶1∶1等活力混合）质量分数的单因素试验和正交试验，确定提取最佳的条件；通过气相色谱-质谱法对霍山石斛中生物碱的组成成分进行分析；通过傅里叶变换红外光谱及二阶导数变换谱图快速鉴定霍山石斛和铁皮石斛。结果表明，当固液比为1:40（g·mL^-1），超声时间为20 min，超声波功率为200 W，复合酶（纤维素酶和果胶酶1∶1等活力混合）添加量1.5%，酶解时间1.5 h为提取条件时，提取效率最佳，生物碱得率为0.053%。根据气相色谱-质谱法检测结果可得知，相对于铁皮石斛，霍山石斛的石斛碱和6-羟基石斛次碱为其特殊生物碱。二阶导数变换谱图可更直观地通过二者峰形状、个数和强度的不同来区分。因此，可以将气相色谱质谱联用和傅里叶红外光谱结合在一起来高效鉴定霍山石斛与铁皮石斛。     

铁皮石斛种质亲缘关系的ISSR分析

利用ISSR技术对36份的铁皮石斛种质资源进行亲缘关系分析。从备选72条引物中筛选出12条引物,共扩增出54条谱带,其中51条为多态性带,多态性比例为94.4%。聚类结果显示,36份铁皮石斛种质资源遗传相似系数在0.4062~0.9375。以遗传相似系数为0.70,可将铁皮石斛种质明显划分为6个类群。结果表明,铁皮石斛植物遗传多样性丰富,ISSR技术可应用于铁皮石斛的亲缘关系研究。     

铁皮石斛种质资源遗传多样性的SRAP分析及指纹图谱构建

[目的]对铁皮石斛进行有效的遗传多样性分析,对于制订铁皮石斛的保护策略具有重要的意义。[方法]使用25对SRAP引物对供试的石斛进行遗传多样性分析。[结果]25对SRAP标记共获得86条多态性条带,每对引物组合可扩增出1~6条多态性条带,平均3.07条;20份石斛品系间Jaccard相似系数为0.002~0.821;构建了20份石斛品系的SRAP特征指纹图谱。[结论]供试的铁皮石斛有较为丰富的遗传变异。     

霍山石斛营养器官的解剖结构

对安徽省霍山县生长的两个石斛商品药材中的上品－霍山石斛和铁皮石斛的营养器官解剖结构特征作了探讨,为深入研究石斛的生物学特性和生药鉴定提供基础资料。     

沙田柚杂交后代群体的SSR鉴定与遗传多样性分析

【目的】利用SSR标记对沙田柚杂交后代群体进行杂种鉴定和遗传多样性研究,为柑橘种质创新和遗传改良提供技术、材料和理论支持。【方法】利用SSR技术分析沙田柚两个杂交组合159株后代的杂种性质,采用UPGMA聚类分析法分析后代群体和亲本的遗传关系。【结果】4对引物可以从104株沙田柚×强德勒柚的杂交后代鉴定出103株真杂种,鉴定率达到99.04%,且在引物AGC9的扩增图谱中有70个单株出现了双亲都没有的新条带;5对引物可鉴定出沙田柚×红江橙的全部杂交后代均为真杂种,一个纯合显性标记AAT12被发现,在引物GA18和AGC9的扩增结果中出现了亲本位点的缺失;UPGMA聚类分析结果显示,两个杂交组合后代群体均出现较显著的遗传变异,两个组合的遗传多样性也有较大的差异。【结论】SSR标记适合柑橘杂种的鉴定和遗传多样性分析,杂交是获得柑橘遗传变异株系的有效途径。     

基于ITS、Nad intron2 和psbA-trnH序列探讨霍山石斛的分类位置

《中国植物志》将铁皮石斛(Dendrobium officinale)、霍山石斛(D.huoshane~e)、细茎石斛(D.moniliforme)和黄石斛(D.tosaense)处理为4个独立的种,但《Flora of China》却将铁皮石斛(D.officinale)、霍山石斛(D.huoshanense)和D.tosaense处理为黄石斛(D.catenatum)的异名.通过对以上4种石斛的ITS、Nad intron2和sbA-trnH三段DNA序列分析发现,铁皮石斛和黄石斛在ITS、Nad intron2的碱基差异较小,仅在psbA-trnH上有一段碱基序列的缺失;霍山石斛与铁皮石斛、黄石斛在ITS、Nad intron2和psbA-trnH序列上都有明显的碱基差异,但与细茎石斛没有明显的碱基差异.遗传距离计算结果表明,霍山石斛和细茎石斛之间的遗传距离比霍山石斛和铁皮石斛、黄石斛之间的遗传距离小,因此认为霍山石斛应该处理为细茎石斛的异名.     

甘蓝一代杂种纯度SSR鉴定与田间鉴定的一致性研究

【目的】分析甘蓝杂交种纯度的SSR分子标记鉴定结果与田间形态学鉴定结果的一致性,寻找一种快速、准确鉴定甘蓝杂交种纯度的方法。【方法】选用SSR分子标记,筛选杂交种具有父母本互补带型的引物,用其鉴定“秦甘50”杂交种的纯度,并与田间常规鉴定结果的一致性进行比较。【结果】300对SSR分子标记引物中,有1对引物SQ1019对“秦甘50”杂交种表现为父母本互补带型;利用引物SQ1019标记鉴定“秦甘50”大田杂交种的纯度为96.3%;“秦甘50”大田杂交种经田间鉴定纯度为96.0%,2种鉴定结果的一致性高达99.7%。【结论】SQ1019是SSR分子标记“秦甘50”杂交种的特异引物,SSR分子标记是一种快速、准确鉴定“秦甘50”杂交种纯度的方法,其结果与田间常规鉴定结果相一致。     

枸杞种间杂交F_1群体的SSR鉴定及遗传分析

以黄果枸杞(Lyciumbararumvar.auranticarpum,用P_1表示)为父本,北方枸杞(L.chinensevar.potaninii,用P_2表示)为母本,杂交获得F_1群体91个单株。从66对SSR引物中筛选出具有双亲互补型杂合位点6对引物,对91个F_1单株进行杂种鉴定和遗传变异分析。结果表明:6对引物在91个单株进行扩增检测结果中有83个单株在6个SSR位点上表现为双亲互补型杂合位点,可被认定为真杂种,杂种率为91.2%,另外8个单株出现异常SSR基因型,需要结合细胞学进一步验证。UPGMA聚类分析结果显示:在遗传距离为0.712处,83个F_1单株被划分为2大类,第Ⅰ大类包括38个F_1单株,占45.8%,第二大类包括45个F_1单株,占54.2%。杂交后代遗传变异大,遗传多样性丰富。     

贵州不同产地铁皮石斛的单糖组成

为铁皮石斛药效及多糖药理活性提供科学依据,采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化方法使糖类物质带上紫外基团,用高效液相色谱仪紫外检测器进行检测,对贵州不同产地铁皮石斛单糖组成进行测定,并对其中单糖的含量进行分析。结果表明:铁皮石斛多糖主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖醛酸和半乳糖等组成,其中甘露糖和葡萄糖含量较高,甘露糖均占总多糖35%以上,葡萄糖均占总多糖12%以上,贵州不同产地铁皮石斛药材中各单糖占总多糖含量的比例存在明显差异,大方县产铁皮石斛单糖含量相对较低,而乌当及独山等地产铁皮石斛单糖含量相对较高。     

霍山石斛栽培技术及活性组分药理学的研究进展

霍山石斛是安徽省的一种道地药材，被冠有“中华仙草之最”之称，具有增强机体免疫力、抗氧化、抗肿瘤等功效，但因其生长条件严苛和人类对霍山石斛野生资源的过度开采利用，其野生资源已濒临灭绝。目前已经通过组织培养和人工栽培技术对其资源进行了极大的保护。本文对霍山石斛的组织培养技术和人工栽培技术进行了介绍，并且对霍山石斛的主要活性成分和药理作用进行了综述，以期为霍山石斛的种质资源保护和产品开发利用提供参考。     

甘蔗与河八王属间杂种的SSR标记鉴定

以甘蔗属优良甘蔗新品种(系)为母本,以收集于广西的河八王属材料为父本进行有性杂交,利用SSR标记对获得的杂种进行真实性鉴定。从70对甘蔗SSR引物中筛选出9对用于对5个甘蔗×河八王组合的57个杂交后代植株进行鉴定,结果表明,其中有14株具有双亲特征带,确定为真杂种。SSR标记可用于甘蔗河八王杂种真实性鉴定,研究结果为甘蔗野生种质河八王属植物的杂交利用及相关基础研究奠定了良好的基础。     

SSR标记鉴定玉米品种真实性及纯度的研究

[目的]探讨杂交玉米及其亲本种子真实性和纯度的分子检测判读标准。[方法]以16个玉米杂交种及其双亲和202个骨干自交系为引物筛选材料，分别构建3个杂交种和3个自交系人工群体的验证试验材料，用CTAB法提取幼苗叶片DNA，选137对SSR引物进行SSR扩增及产物检测，用于玉米品种的真实性鉴定和纯度检测，并与同批移栽至大田的种植鉴定结果相比较。[结果]从137对SSR引物中筛选出了多态性信息含量（PIC值）高、扩增条带清晰和重复性好的20对一级和20对二级核心引物，用一级核心引物对杂交种人工群体进行真实性鉴定，根据一级核心引物的扩增结果，从中选取3对（phi080、umc1196、umc2084）表现较好的引物用于杂交种人工群体的纯度检测。ssR分子检测结果与田间种植鉴定结果具有高度一致性。[结论]利用SSR标记技术鉴定玉米品种真实性和纯度的方法是可行的。     

芍药属组内组间杂交及部分后代核型分析与SSR鉴定

以芍药品种‘朱砂判’为母本，分别与6个芍药组品种和4个牡丹组品种进行杂交，并综合利用核型分析和SSR分子标记法对部分杂交后代进行杂种鉴定，筛选出亲和性较好的远缘杂交组合，并确定杂交后代早期鉴定方法，为芍药属新品种培育提供参考。结果表明:1)芍药组内近缘杂交亲和性好，平均结实率均在5粒/朵以上；芍药组内远缘杂交亲和性较差，但仍有一定结实；芍药组间远缘杂交表现出不亲和性，仅杂交组合‘朱砂判’בDao Da Chen’有较少结实。2)核型分析表明:组内远缘杂交后代ZC4、ZC5、ZC6、ZC7为三倍体(2n=3x=15)；从50对芍药SSR引物中筛选出7对多态性引物进行扩增，结果显示杂交后代ZC4、ZC5、ZC6、ZC7含有父母本特异性条带，结合核型分析证明ZC4、ZC5、ZC6、ZC7为真杂种。以上结果表明:组内远缘杂交中‘朱砂判’与‘Garden Peace’、‘Pink Teacup’、‘Cream Delight’杂交均有一定结实，组间远缘杂交中‘朱砂判’בDao Da Chen’可打破杂交不亲和性；SSR分子标记技术可用于芍药属植物杂交后代的早期鉴定。      

霍山石斛野生植株·组培植株与河南石斛叶表皮微形态特征研究

[目的]比较霍山石斛野生植株、组培植株与河南石斛的叶表皮微形态结构特征,为霍山石斛的真伪鉴定提供依据。[方法]在光学显微镜下,观察霍山石斛野生植株、组培植株与河南石斛的叶表皮微形态结构,并测定气孔器密度、分布及气孔指数等。[结果]3种石斛叶的上表皮细胞多为规则的六边形,霍山石斛野生植株、组培植株下表皮细胞为不规则形和近多边形,河南石斛的下表皮细胞为多边形,3种植物垂周壁式样相似;3种石斛叶的上表皮均无气孔,下表皮气孔无规则分布,霍山石斛野生植株、组培植株与河南石斛气孔长宽比分别为1.12、1.55、1.31,气孔器密度分别为109、156、94个/mm2,气孔指数分别为8.9%、12.5%、8.2%。[结论]霍山石斛野生植株、组培植株与河南石斛叶表皮细胞形状、气孔分布、垂周壁式样均比较相似,难以作为分类的依据。气孔器形状、密度、大小表现出比较稳定的差异,可以作为这3种石斛之间区分的依据。