免疫乳对断奶仔猪免疫功能的影响

[目的]研究免疫乳对断奶仔猪免疫功能的影响。[方法]将30头断奶仔猪随机分为3组,即抗大肠杆菌免疫乳组、抗沙门氏菌免疫乳组和对照组,10头/组,分别饲喂抗体滴度均为28抗大肠杆菌免疫乳、抗沙门氏菌免疫乳和普通常乳。饲喂方法为经口灌服,20ml/次,2次/d,持续2周。2周后,测定血清中总蛋白、白蛋白、球蛋白、IgA、IgM和IgG含量、血清抗体水平和淋巴细胞转化率。[结果]免疫乳能显著提高断奶仔猪血清中总蛋白、白蛋白、球蛋白、IgA、IgM和IgG的含量,血清中抗体水平以及淋巴细胞转化率（P〈0.05）。[结论]口服免疫乳可明显增强仔猪免疫力。     

彩色免疫金银染色法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究

试验首次建立了固相载体上的彩色免疫金银染色法(CIGSS)检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),并获得成功。用提纯的PRRSV高免兔制备高免血清,按常规方法提取兔抗PRRSVIgG,建立了检测PRRSV抗原的彩色免疫金银染色法。经方阵试验确定最佳兔抗PRRSV IgG工作浓度为1∶400,金标羊抗兔IgG的工作浓度为1∶1 000,银染色的时间为15 min,彩染的时间为2 min。用该法对提纯的PRRSV病毒抗原的最低检出量为1.469μg/ml,其敏感性为DIGFA的5倍。以CIGSS法检测了52份疑似PRRSV感染的猪样本,阳性率为53.84%,而检测猪细小病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪巴氏杆菌以及正常的Marc-145细胞培养物,均为阴性反应。表明该法具有快速、准确、操作简便、敏感性高、易于判断、特异性强、重复性好等优点,可用于大量PRRSV抗原样本的检测。     

兔病毒性出血症Dot-IGSS检测方法的建立

[目的]建立一种检测兔病毒性出血症IgG抗体的斑点免疫金银染色法（Dot—IGSS）。[方法]选择抗原包被浓度20μg/ml，被检血清稀释度1：160；鼠抗兔IgG稀释度1：200、金标羊抗鼠IgG稀释度1：20的工作条件，用所建立的Dot—IGSS与血凝抑制试验（HI）对96头份被检血清进行平行检测。[结果]Dot—IGSS和HI的检测阳性率分别为94％和31％。[结论]所建立的Dot—IGSS是一种灵敏、特异和稳定的血清学捡测方法，适用于兔病毒性出血症的诊断和抗体检测。     

犬血清IgG的纯化、抗体制备及其鉴定

[目的]探讨犬血清IgG的纯化方法。[方法]采用硫酸铵盐析法结合SephadexG-200凝胶柱层析提取纯化犬血清IgG,利用SDS-PAGE电泳和免疫印迹法鉴定所得产品的纯度和免疫活性。[结果]获得的纯化犬血清IgG的SDS-PAGE图谱中存在2条蛋白条带,表明获得了高纯度的犬血清IgG;重链分子量为58kD,轻链分子量为27kD,IgG分子量为170kD。特异性检测发现犬血清IgG重链和轻链都能与鼠抗犬血清IgG抗体结合,表明纯化犬血清IgG具有免疫原性和反应原性。[结论]硫酸铵盐析法结合SephadexG-200凝胶柱层析可获得纯度高、活性好的纯化犬血清IgG,为犬血清IgG相关的免疫学试验提供了高质量的免疫材料。     

羊抗鸡酶标二抗用于鹅血清抗体检测的研究

通过比较鸡IgG与鹅IgG的相似性,探讨羊抗鸡酶标二抗用于检测鹅血清抗体的可行性。用辛酸-硫酸铵盐析法提纯鸡、鸭、鹅、小鼠、兔、猪、羊的IgG,比较上述动物IgG粗提物的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱,并用蛋白免疫转印法定性检测上述动物血清IgG与羊抗鸡酶标二抗的结合情况;然后用直接ELISA方法分析不同动物血清分别与抗鸡酶标抗体和抗鹅酶标抗体结合程度的差异;最后用间接ELISA方法比较两种酶标抗体对同一鹅群大肠杆菌抗体的检测结果。结果表明,鸡、鸭、鹅IgG具有较大的相似性,都能够与抗鸡酶标二抗结合;羊抗鸡酶标二抗可以替代抗鹅酶标二抗来检测鹅的血清抗体。     

不同日龄断奶应激对仔猪血液生化和免疫指标的影响

[目的]研究不同断奶日龄仔猪的血液生化和免疫指标的变化情况。[方法]选用14日龄和28日龄断奶杂交仔猪,于断奶次日和断奶后每隔7d采血直至42日龄,测定仔猪血液乳酸脱氢酶LDH、总蛋白TP、白蛋白ALB、球蛋白GLOB和免疫指标IgG、IgM、IgA的含量。[结果]不同日龄断奶均使仔猪在断奶后7d内遭受严重的应激反应,LDH活力明显上升（P﹤0.05或P﹤0.01）,IgG、IgM、IgA和TP、ALB、GLOB水平迅速下降（P﹤0.05或P﹤0.01）。14日龄和28日龄断奶仔猪分别在断奶后21和14d与对照组相比,LDH活性差异不显著（P﹥0.05）。试验组仔猪42日龄时（除28日龄断奶仔猪ALB外）,IgG、IgM、IgA、TP、ALB和GLOB水平与对照组相比仍然差异显著（P﹤0.01或P﹤0.05）,但28日龄断奶仔猪与14日龄断奶仔猪相比免疫球蛋白水平和血清蛋白水平下降较平缓。[结论]不同日龄断奶仔猪断奶后均遭受断奶应激,相对14日龄断奶仔猪而言,28日龄断奶仔猪遭受的应激程度较小;血清LDH活性可作为判断仔猪应激程度的参考指标。     

鸡IgG单克隆抗体的制备与鉴定

[目的]制备鸡免疫球蛋白单克隆抗体,提高诊断鸡特异性抗体的水平。[方法]应用盐析法粗提和葡聚糖G200凝胶层析分离纯化鸡血清IgG,免疫BALB/c小鼠,并进行细胞融合和ELISA筛选。[结果]间接ELISA法检测C44、C45、C67和C68共4株鸡IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞的腹水效价分别为1∶640000、1∶320000、1∶640000和1∶80000。Westernblot分析显示,C44和C45株单克隆抗体识别鸡IgG轻链,而C67和C68株单克隆抗体识别鸡IgG重链,它们与鸭、猪等血清Ig均没有反应。小鼠Ig亚类分析表明,4株细胞分泌的抗体均为IgG1型。[结论]成功获得了4株稳定分泌鸡IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞。     

牛轮状病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

用差速离心法纯化的牛轮状病毒(BRV)分别免疫鼠和兔,制备了鼠抗BRV和兔抗BRV超免疫血清,并用层析方法进行了纯化,建立了检测BRV的双抗体夹心ELISA方法.该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为:兔抗BRV IgG包被浓度为10μg·mL-1,鼠抗BRV IgG工作浓度为5 μg·mL-1,样品反应时间60 mi...     

日粮中添加不同水平的酵母硒对围产后期奶牛抗氧化能力和免疫机能的影响

研究在日粮中添加不同水平的酵母硒对围产后期奶牛抗氧化性能和免疫机能的影响,选用20头体况和预产期相近的奶牛,随机分为4组,对照组为基础日粮,3个处理组在基础日粮中分别添加3.2、6.4和9.6 g/d的酵母硒。试验结果表明：添加酵母硒显著提高了全血硒和乳硒的含量（P〈0.05）,在产后第7和14天,随着酵母硒添加量的增加,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）活性表现分别由78.44和101.04 U/mL逐渐上升到149.69和152.90 U/mL,而在产后21 d,GSH-px活性表现为先升高后降低趋势,当添加6.4 g/d酵母硒时,其活性达到最高点（132.19 U/mL）;血清总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）和外周血淋巴细胞刺激指数（SI）都有不同程度的提高（P〈0.05）,并随着添加水平的增加,有先升高后下降的趋势;而且酵母硒的添加显著影响了血清中的免疫球蛋白IgM、IgG和IgA的含量,当添加量为3.2 g/d时,产后7 d的血清IgM、IgG和IgA均处于最高水平（0.86、1.35和0.13 g/L;P〈0.05）,产后14 d的免疫球蛋白（IgM、IgG和IgA）含量并不受影响,而在产后21 d,9.6 g/d的酵母硒添加水平具有最高的血清IgM,IgG和IgA浓度（P〈0.05）,对照组和添加6.4 g/d组最低（P〈0.05）。由此得出结论,日粮中添加酵母硒显著改善了围产后期奶牛抗氧化能力及免疫机能,综合考虑,在基础日粮中添加6.4 g/d的酵母硒效果较明显。     

共轭亚油酸对滩羊免疫应激的影响研究

[目的]探索共轭亚油酸对滩羊免疫应激的影响。[方法]在滩羊日粮中添加不同剂量的共轭亚油酸(CLA),研究了共轭亚油酸对滩羊免疫应激的影响。[结果]添加2%共轭亚油酸的滩羊血清中免疫球蛋白(IgG)含量比添加1%的共轭亚油酸的滩羊高,添加1%共轭亚油酸的滩羊血清中IgG含量比不添加共轭亚油酸的滩羊显著升高(P<0.05)。滩羊血清中的肿瘤坏死因子(TNF-α)含量随共轭亚油酸剂量的增加而显著降低(P<0.05)。[结论]添加2%CLA可以有效减轻滩羊因免疫引起的应激反应。     

利用皮特兰作父系商品猪肉品质的灰色关联度分析

运用灰色关联度法对含皮特兰血的4个组合杂交猪（皮杜、皮杜B、皮杜大、皮杜长大）的瘦肉率、熟肉率、大理石纹评分、肉色评分、pH值、失水率和嫩度等7个肉质指标按等权关联度进行了综合评定，以评价皮特兰在商品猪生产中的种用价值。结果表明：“皮杜B”肉质最优，其次是“杜长大”和“皮杜长大”，说明以提高瘦肉率为目标利用“皮杜”公猪，“皮杜长大”4系配套组合和“皮杜”公猪与培育品种杂交肉质最佳。     

细胞松弛素B诱导鲍异源三倍体

用细胞松弛素B（CB）处理受精卵（九孔鲍♀×盘鲍♂）,抑制第二极体释放,诱导异源三倍体.在水温24℃下,分别进行了不同起始处理时间（受精后5~25 min）、不同药物处理浓度（0.2~1.0 mg/L）和不同持续处理时间（5~15 min）的实验.结果表明：受精后10~15 min开始处理的效果较好,平均担轮幼虫成活率为52.07%,平均三倍体率为55.81%;最佳药物处理质量浓度为0.4 mg/L,最佳持续处理时间为10 min,担轮幼虫率为21.43%,异源三倍体率为50.96%;药物空白对照组1（九孔鲍♀×九孔鲍♂）担轮幼虫率为85.38%,二倍体率为95.42%;药物空白对照组2（九孔鲍♀×盘鲍♂）担轮幼虫率为54.37%,二倍体率为75.87%.综合考虑,鲍异源三倍体的适宜诱导条件为：在受精后13 min,即当40%~50%受精卵排出第一极体时,用0.4 mg/L的CB处理10 min.     

皖江黄鸡品系杂交组合筛选试验

以皖江黄鸡父系（HA系）、母本父系（HB1和HB2系）以及母本母系（HC1和HC2系）共5个品系为材料,开展父母代和商品代杂交组合试验,为配套系的建立提供依据。结果表明：父母代鸡繁殖性能较好的杂交组合是HB2（♂）×HC1（♀）和HB1（♂）×HC2（♀）,HA（♂）×[（HB2（♂）×HC1（♀）]杂交组合的商品代鸡在早期生长速度、饲料转化比、成活率和屠宰率方面最具有优势,且商品代鸡三黄特征明显,胫长适中,符合市场需要。     

黄沙鳖良种选育研究

【目的】探讨黄沙鳖良种选育技术,为建立黄沙鳖良种场奠定基础。【方法】2004年,从广西横县、灵山、桂平及南宁明阳农场等黄沙鳖养殖产区挑选黄沙鳖表型特征明显、体重1.0kg以上的亲鳖200只,雌雄比3∶1,不同地方的雌雄鳖分别配对（A♀×B♂或B♀×A♂）,人工繁殖,根据表型特征、遗传性状和生长性状等进行选育,挑选色斑清晰对称、体型圆、体色黄、裙边宽、生长快的个体进行养殖。【结果】经稚鳖、幼鳖、成鳖、后备亲鳖等生长阶段的筛选,其选留率和成活率分别为35.3%、69.6%、80.7%、91.3%和82.1%、81.6%、95.7%、97.2%,最终选育获得黄沙鳖纯系亲鳖450只,且经繁殖验证,选育亲鳖繁殖的鳖苗具有明显亲体遗传性状,合格率达90.2%。【结论】采取群体选育的方法,从不同群体挑选亲鳖进行繁殖,通过对其后代各生长阶段不断地筛选,可选育出种质优良的黄沙鳖纯系群体。     

皱纹盘鲍与九孔鲍杂交的研究

采用皱纹盘鲍与九孔鲍进行杂交,并与两亲本自交进行育苗比较.结果表明：自交组的受精率、孵化率以及存活率显著高于杂交组（P〈0.05）;皱纹盘鲍（♀）×九孔鲍（♂）和皱纹盘鲍（♂）×九孔鲍（♀）杂交的受精率分别为0.9%和3.2%,受精率存在显著差异（P〈0.05）,而孵化率分别为12.4%和13.1%,二者差异不显著（P〉0.05）,二者之间幼体存活率的差异也不显著（P〉0.05）;自交组和杂交组之间的鲍生长速度存在明显的差异（P〈0.05）,杂交组合的生长速度明显比自交组合的要快;但杂交组中稚鲍的存活率和自交组之间差异不显著（P〉0.05）.     

奥尼罗非鱼及其亲本的微卫星分析

运用SSR技术对奥利亚罗非鱼（Oreochromis aureus♂）、尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus♀）及其杂交子代（O．aureus♂×O．niloticus♀）的遗传多样性进行了研究。从12对微卫星引物中筛选出8个微卫星特异性位点，其中奥利亚罗非鱼（♂）特异位点7个；尼罗罗非鱼（♀）5个；杂交子代6个。利用这8个位点检测3个群体的遗传结构，共检测到63个等住基因，平均等位基因2．4394个，奥利亚罗非鱼（♂）、尼罗罗非鱼（♀）和杂交子代的平均观测杂合度分别为O．7083、0．9015和0．9787；平均期望杂合度分别为0．5341、0．5761和0．6435，平均多态信息含量（PIC）分别为0．4133、0．4693和0．5584。结果表明，3个群体的遗传多样性水平都较高，其中杂交子代群体的遗传多样性水平最高，奥利亚罗非鱼群体遗传多样性最低；基于Nei＇s遗传距离的聚类分析显示尼罗罗非鱼（♀）和杂交子代的遗传距离较近。     

仿刺参多种杂交方式下杂交效果的初步研究

对仿刺参Apostichopus japonicus中国群体（C）与俄罗斯群体（R）杂交子一代F1（C×R）亲参的发育情况及其与中国仿刺参群体多种杂交后代的早期生长情况进行了研究。结果表明：杂交仿刺参子一代F1（C×R）在渤海北部池塘可自然发育成熟,或经人工促熟后发育成熟。3龄成熟子一代个体体重为（246.5±65.1）g,体重为140-400 g,性腺指数为（15.7±1.6）%,卵径为130-160μm。通过人工催产获得成熟精卵,F1（C×R）与C回交,在温度为（20.0±0.5）℃、盐度为31、pH为8.0、溶氧为7.4mg/L的条件下进行幼体培育,并对其生长指标进行测量。结果表明：各组杂交后代在体长、体重方面表现出一定的杂种优势。其中,耳状幼体阶段各组仿刺参生长速度由高到低依次为F1（C×R）♀×C♂〉C♀×F1（C×R）♂〉F1（C×R）♀×F1（C×R）♂〉C♀×C♂;4月龄时各组稚参、幼参体长日增长由高到低依次为F1（C×R）♀×F1（C×R）♂〉C♀×F1（C×R）♂〉C♀×C♂〉F1（C×R）♀×C♂,体重日增长由高到低依次为F1（C×R）♀×F1（C×R）♂〉F1（C×R）♀×C♂〉C♀×F1（C×R）♂〉C♀×C♂。     

长江草鱼♀×珠江草鱼♂杂交子一代与其亲本一龄阶段生长性能和体型分析

[目的]研究杂交草鱼一龄阶段的生长和体型特点。[方法]建立长江自交YR（长江群体♀×长江群体♂）、珠江自交ZR（珠江群体♀×珠江群体♂）、杂交F1（长江群体♀×珠江群体♂）3个组合。为了避免前期生长差异对后期试验的影响，亲鱼催产至鱼苗下塘均同步进行，控制夏花培育过程养殖密度、养殖环境等条件保持一致；另一方面，到5013龄即对3个组合进行剪鳍标记同箱混养，克服不同网箱的影响。对3个组合鱼的生长和形态数据进行测量分析。体重（w）用电子天平测量，全长（TL）、体长（SL）、头长（HL）、体高（BH）和体宽（BW）用游标卡尺测量。绝对增重率AGR（g／d）=（w2-w1）／（t2-t1）；超亲杂种优势HB％（％）=（F1-BP）×100／BP。其中，AGR为50～170日龄的绝对增重率；W2-W1为饲养50～170d的体增重；t2-t1为两阶段的间隔天数；E为杂交一代某性状的平均值；BP为优良亲本某性状的平均值。体型分析利用体长／全长、头长／全长、体高／体长及体宽／体长4个比例参数进行比较。[结果]体重、体长及绝对增重率均为F1〉ZR〉YR；体重、体长，在50日龄组合间差异不显著（P〉0．05），在170日龄组合间差异均极显著（P〈0．01）；绝对增重率，F1分别比ZR、YR高20．00％、50．00％，F1与ZR差异不显著（P〉0．05），与YR差异显著（P〈0．05）；F1在体重上表现明显的超亲杂种优势（20．09％）。3个组合间，体长／全长差异不显著（P〉0．05），头长／全长、体高／体长及体宽／体长差异显著（P〈0．05），F1表现头短、体高、体宽等特点。[结论]F1在生长性能和体型特征上均具有优势。     

鹅不同杂交组合肉品质比较分析

本研究选取太湖鹅、四川白鹅、皖西白鹅、五龙鹅、三花鹅设计了8个杂交组合,测定了鹅肌肉主要成分、常规肌肉品质、肌肉物理组织学特性、风味物质含量,分析比较不同鹅种的肉品质情况。结果表明,pH值8个组合没有差异,其余6个指标组间存在差异;剪切力3.09~3.78kg;系水力61.48~66.46%;水分含量66.77~73.05%;蛋白含量21.94~23.32%。脂肪含量1.67~3.06%。肌纤维密度970.79~3102.50根/mm2,各组间存在差异。肌纤维直径12.05~29.45μm,各组间存在差异。8个鹅杂交组合中必须脂肪酸百分含量以三花♀×五龙♂组合最高(13.02%),多不饱和脂肪酸百分含量以三花♀×太湖♂组合最高(15.39%);总游离氨基酸含量0.254~0.357g/100g;肌苷酸含量为1.33~4.63mg/g。总体来看三花♀×太湖♂组合肉品质较好。     

山女鳟和虹鳟的杂交子代与其亲本后代早期生产性能的比较

用虹鳟Oncorhynehus mykiss和山女鳟Oncorhynchus masou masou两种冷水性鱼类进行杂交试验，成功地获得杂交种。其中，杂交组虹鳟（♀）×山女鳟（♂）的受精率、发眼率和孵化率与山女鳟、虹鳟对照组相比没有明显差异（P〉0．05），但其卵黄囊吸收较差，上浮率较低，平均成活率为30．68％，明显低于山女鳟、虹鳟（P〈0．01）；杂交组山女鳟（♀）×虹鳟（♂）在胚胎发育后期，眼点形成之前发育受阻，其发眼率仅为0．54％，明显低于山女鳟、虹鳟（P〈0．01），最终成活率仅为0．44％。对杂交子代和亲本后代进行了80d的室内生长对比试验，结果表明：杂交鳟在不同的发育阶段表现出一定程度的杂种优势，体重的杂种优势率为2．22％-18．16％，又长的杂种优势率为1．27％～8．98％；杂交鳟在日增长量上与山女鳟比较接近，略高于虹鳟。